培养基用组合物制造技术

本发明专利技术的课题在于提供能够在从体细胞向褐色脂肪细胞分化诱导时使用的新的培养基用组合物。作为本发明专利技术，例如，可以举出从体细胞向褐色脂肪细胞分化诱导时使用的培养基用组合物，其是以包含甲状腺激素受体激动剂、糖皮质激素受体激动剂、磷酸二酯酶抑制剂、胰岛素、抗坏血酸衍生物、白蛋白、以及抗生素这7种成分为特征的分化诱导培养基用组合物。根据本发明专利技术，可以有效地进行从体细胞向褐色脂肪细胞的分化诱导。另外，根据本发明专利技术，可以有效地保持褐色脂肪细胞。脂肪细胞。脂肪细胞。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】培养基用组合物


[0001](相关申请)
[0002]本申请主张2019年11月25日向日本专利局申请的日本申请编号第2019
‑
211991号的权益。出于所有目的，该日本申请以其申请文件(说明书、权利要求书、附图、说明书摘要)全部在本说明书中公开的方式作为参照而引入本说明书。
[0003]本专利技术属于再生医疗的
本专利技术涉及在该
中能够在从体细胞向褐色脂肪细胞分化诱导时使用的培养基用组合物、以及用于保持被分化诱导的褐色脂肪细胞的培养基用组合物。

技术介绍

[0004]近年来，正在积极地研究在进行将基因导入体细胞的情况下利用低分子化合物将成纤维细胞这样的体细胞直接转变为其它细胞的方法(直接重编程：Direct Reprogramming)。例如，在专利文献1中，将ALK5抑制剂、ALK6抑制剂等若干低分子化合物进行组合，在其存在下对体细胞、特别是人成纤维细胞进行培养，并从其直接诱导为褐色脂肪细胞等。如专利文献1的专利技术那样，如果能够利用容易获得的低分子化合物从普通的成纤维细胞直接诱导成褐色脂肪细胞等细胞，将会是非常有益的。例如，由于能够从自体的成纤维细胞简便地制备自体的其它细胞，因此提高了在再生医疗上的应用。另外，可以容易地制备作为用于新药开发的实验材料的细胞。
[0005]非专利文献1也与专利文献1同样，在若干低分子化合物的组合的存在下培养人皮肤成纤维细胞，由所述成纤维细胞直接诱导为褐色脂肪细胞。具体而言，在非专利文献1的专利技术中，在SB431542(ALK5抑制剂)、LDN193189(ALK2/3抑制剂)、Dorsomorphin(ALK2/3/6抑制剂)、毛喉素(cAMP诱导剂)、以及罗格列酮(PPARγ激动剂)这样的低分子化合物的存在下培养人皮肤成纤维细胞，从所述成纤维细胞直接诱导为褐色脂肪细胞。专利文献1中也公开了所述低分子化合物的组合。
[0006]从上述这样的体细胞向褐色脂肪细胞等的分化诱导必须通过在包含其它的化合物、营养素等的培养基中进行培养而进行。作为该培养基，可以列举例如：作为通常的培养基的MEM(最低必需培养基)、DMEM(Dulbecco改良Eagle培养基)、DMEM/F12、或者对它们进行了改良而得到的培养基，它们是市售的。另外，通常考虑到待诱导的细胞而将适当的成分(血清、蛋白质、氨基酸、糖类、维生素类、脂肪酸类、抗生素等)适宜添加至这些培养基中进行细胞的分化诱导。其中，由于胎牛血清(FBS)这样的血清中包含激素、生长因子、粘附因子等细胞增殖所必需的成分，因此经常添加血清进行分化诱导。专利文献1、非专利文献1的专利技术也利用添加有FBS的培养基进行了分化诱导。
[0007]现有技术文献
[0008]专利文献
[0009]专利文献1：国际公开第2018/062269号
[0010]非专利文献
[0011]非专利文献1：Takeda Y.,Harada Y.,Yoshikawa T.,and Dai P.,Sci.Rep.,7,4304(2017)

技术实现思路

[0012]专利技术要解决的课题
[0013]本专利技术以提供能够在从体细胞向褐色脂肪细胞进行分化诱导时所使用的新的培养基用组合物作为主要的课题。另外，本专利技术还在于提供用于保持被分化诱导而得到的褐色脂肪细胞的新的培养基用组合物。
[0014]解决课题的方法
[0015]本专利技术人等进行了深入研究，结果发现，通过包含一定的低分子化合物的培养基用组合物，可以解决上述课题，从而完成了本专利技术。
[0016]作为本专利技术，例如，可以举出下述专利技术。
[0017][1]一种分化诱导培养基用组合物，其是从体细胞向褐色脂肪细胞进行分化诱导时所使用的培养基用组合物，其包含以下的7种成分。
[0018]·
甲状腺激素受体激动剂
[0019]·
糖皮质激素受体激动剂
[0020]·
磷酸二酯酶抑制剂
[0021]·
胰岛素
[0022]·
抗坏血酸衍生物
[0023]·
白蛋白
[0024]·
抗生素
[0025][2]根据上述[1]所述的分化诱导培养基用组合物，其中，上述分化诱导是在不向体细胞导入基因的情况下直接进行的。
[0026][3]根据上述[1]或[2]所述的分化诱导培养基用组合物，其中，甲状腺激素受体激动剂为三碘甲状腺原氨酸，糖皮质激素受体激动剂为地塞米松，磷酸二酯酶抑制剂为异丁基甲基黄嘌呤，抗坏血酸衍生物为L
‑
抗坏血酸2
‑
磷酸酯，白蛋白为结合有亚油酸和油酸的白蛋白或脂肪酸非结合白蛋白，或者抗生素为青霉素和/或链霉素。
[0027][4]根据上述[1]～[3]中任一项所述的分化诱导培养基用组合物，其进一步包含选择性PPARγ激动剂、或选择性PPARγ激动剂及cAMP诱导剂和/或BMP7。
[0028][5]根据上述[4]所述的分化诱导培养基用组合物，其中，选择性PPARγ激动剂为罗格列酮，或者cAMP诱导剂为毛喉素。
[0029][6]一种分化诱导培养基，其包含上述[1]～[5]中任一项所述的分化诱导培养基用组合物，且无血清。
[0030][7]根据上述[6]所述的分化诱导培养基，其是在DMEM培养基中添加上述[1]～[5]中任一项所述的分化诱导培养基用组合物而成的。
[0031][8]根据上述[7]所述的分化诱导培养基，其中，上述DMEM培养基为高葡萄糖DMEM培养基。
[0032][9]根据上述[7]或[8]所述的分化诱导培养基，其中，上述DMEM培养基含有L
‑
谷氨酰胺。
[0033][10]根据上述[1]～[9]中任一项所述的分化诱导培养基用组合物或分化诱导培养基，其中，上述体细胞为成纤维细胞。
[0034][11]一种褐色脂肪细胞，其是使用上述[1]～[10]中任一项所述的分化诱导培养基用组合物或分化诱导培养基制备的。
[0035][12]一种保持培养基用组合物，其是用于保持从体细胞分化诱导而制备的褐色脂肪细胞的培养基用组合物，其包含以下的5种成分。
[0036]·
选择性PPARγ激动剂
[0037]·
糖皮质激素受体激动剂
[0038]·
胰岛素
[0039]·
白蛋白
[0040]·
抗生素
[0041][13]根据上述[12]所述的保持培养基用组合物，其中，选择性PPARγ激动剂为罗格列酮，糖皮质激素受体激动剂为地塞米松，白蛋白为结合有亚油酸和油酸的白蛋白或脂肪酸非结合白蛋白，或者抗生素为青霉素和/或链霉素。
[0042][14]一种保持培养基，其包含上述[12]或[13]所述的保持培养基用组合物，且无血清。
[0043][15]根据上述[14]所述的保持培养基，其是在本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种分化诱导培养基用组合物，其是从体细胞向褐色脂肪细胞进行分化诱导时所使用的培养基用组合物，其包含以下的7种成分：1：甲状腺激素受体激动剂2：糖皮质激素受体激动剂3：磷酸二酯酶抑制剂4：胰岛素5：抗坏血酸衍生物6：白蛋白7：抗生素。2.根据权利要求1所述的分化诱导培养基用组合物，其中，所述分化诱导是在不向体细胞导入基因的情况下直接进行的。3.根据权利要求1或2所述的分化诱导培养基用组合物，其中，甲状腺激素受体激动剂为三碘甲状腺原氨酸，糖皮质激素受体激动剂为地塞米松，磷酸二酯酶抑制剂为异丁基甲基黄嘌呤，抗坏血酸衍生物为L
‑
抗坏血酸2
‑
磷酸酯，白蛋白为结合有亚油酸和油酸的白蛋白或脂肪酸非结合白蛋白，或者抗生素为青霉素和/或链霉素。4.根据权利要求1～3中任一项所述的分化诱导培养基用组合物，其进一步包含：选择性PPARγ激动剂；或者选择性PPARγ激动剂、及cAMP诱导剂和/或BMP7。5.根据权利要求4所述的分化诱导培养基用组合物，其中，选择性PPARγ激动剂为罗格列酮，或者cAMP诱导剂为毛喉素。6.一种分化诱导培养基，其包含权利要求1～5中任一项所述的分化诱导培养基用组合物，且无血清。7.根据权利要求6所述的分化诱导培养基，其是在DMEM培养基中添加权利要求1～5中任一项所述的分化诱导培养基用组合物而成的。8.根据权利要求7所述的分化诱导培养基，其中，所述DMEM培养基为高葡萄糖DMEM培养基。9....

【专利技术属性】
技术研发人员：戴平，武田行正，原田义规，松本润一，
申请(专利权)人：京都府公立大学法人，
类型：发明
国别省市：