褐色脂肪细胞的制备方法技术

本发明专利技术的课题在于提供能够在不进行基因导入的情况下利用低分子化合物进行从体细胞向褐色脂肪细胞的直接转变或诱导的新的制造方法。作为本发明专利技术，例如，可以举出褐色脂肪细胞的制备方法，其是通过直接分化诱导从体细胞制备褐色脂肪细胞的方法，该方法包括：在选择性PPARγ激动剂及cAMP诱导剂的存在下，在无血清的分化诱导用培养基中对体细胞进行培养的工序。根据本发明专利技术，可以在不进行基因导入的情况下有效地进行从体细胞向褐色脂肪细胞的直接转变或诱导。利用本发明专利技术得到的褐色脂肪细胞作为再生医疗、人褐色脂肪细胞及人米色细胞模型等是有用的。等是有用的。等是有用的。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】褐色脂肪细胞的制备方法


[0001](相关申请)
[0002]本申请主张2019年11月25日向日本专利局申请的日本申请编号第2019
‑
211990号的权益。出于所有目的，该日本申请以其申请文件(说明书、权利要求书、附图、说明书摘要)的全部在本说明书中公开的方式作为参照而引入本说明书。
[0003]本专利技术属于再生医疗的
本专利技术涉及在该
中利用低分子化合物从体细胞制备褐色脂肪细胞的方法、以及通过所述制备方法制备的低分子化合物诱导性褐色脂肪细胞(ciBAs：chemical compound
‑
induced Brown Adipocytes)。另外，本专利技术还涉及能够用于制备该褐色脂肪细胞的方法的诱导用培养基组合物。

技术介绍

[0004]近年来，正在积极地研究在不进行基因导入的情况下利用低分子化合物将成纤维细胞这样的体细胞直接转变为其它细胞的方法(直接重编程：Direct Reprogramming)。例如，在专利文献1中，将ALK5抑制剂、ALK6抑制剂等若干低分子化合物进行组合，在其存在下对体细胞、特别是人成纤维细胞进行培养，并从其直接诱导为褐色脂肪细胞等。如专利文献1的专利技术那样，如果能够利用容易获得的低分子化合物从普通的成纤维细胞直接诱导成褐色脂肪细胞等细胞，将会是非常有益的。例如，由于能够从自体的成纤维细胞简便地制备自体的其它细胞，因此提高了在再生医疗上的应用。另外，可以容易地制备作为用于新药开发的实验材料的细胞。
[0005]非专利文献1也与专利文献1同样，在若干低分子化合物的组合的存在下培养人皮肤成纤维细胞，由所述成纤维细胞直接诱导为褐色脂肪细胞。具体而言，在非专利文献1的专利技术中，在SB431542(ALK5抑制剂)、LDN193189(ALK2/3抑制剂)、Dorsomorphin(ALK2/3/6抑制剂)、毛喉素(cAMP诱导剂)、以及罗格列酮(PPARγ激动剂)这样的低分子化合物的存在下培养人皮肤成纤维细胞，从所述成纤维细胞直接诱导为褐色脂肪细胞。专利文献1中也公开了所述低分子化合物的组合。
[0006]从上述这样的体细胞向褐色脂肪细胞等的分化诱导必须通过在包含其它的化合物、营养素等的培养基中进行培养而进行。作为该培养基，可以列举例如：作为通常的培养基的MEM(最低必需培养基)、DMEM(Dulbecco
’
s Modified Eagle Medium、Dulbecco改良Eagle培养基)、DMEM/F12、或者对它们进行了改良而得到的培养基，它们是市售的。另外，通常考虑到待诱导的细胞而将适当的成分(血清、蛋白质、氨基酸、糖类、维生素类、脂肪酸类、抗生素等)适宜添加至这些培养基中进行细胞的分化诱导。其中，由于胎牛血清(FBS)这样的血清中包含激素、生长因子、粘附因子等细胞增殖所必需的成分，因此经常添加血清进行分化诱导。专利文献1、非专利文献1的专利技术也利用添加有FBS的培养基进行了分化诱导。
[0007]现有技术文献
[0008]专利文献
[0009]专利文献1：国际公开第2018/062269号
[0010]非专利文献
[0011]非专利文献1：Takeda Y.,Harada Y.,Yoshikawa T.,and Dai P.,Sci.Rep.,7,4304(2017)

技术实现思路

[0012]专利技术要解决的课题
[0013]本专利技术的主要课题在于提供能够在不进行基因导入的情况下利用低分子化合物进行从体细胞向褐色脂肪细胞的直接转变或诱导的新的制造方法。另外，本专利技术还在于提供用于在低分子化合物的存在下培养体细胞并通过直接转变制备褐色脂肪细胞的新的组合物。
[0014]解决课题的方法
[0015]本专利技术人等进行了深入研究，结果发现，在无血清状态下利用一定的低分子化合物的组合可以解决上述课题，从而完成了本专利技术。
[0016]作为本专利技术，例如，可以举出下述专利技术。
[0017][1]一种褐色脂肪细胞的制备方法，其是通过直接分化诱导而从体细胞制备褐色脂肪细胞的方法，该方法包括：
[0018]在选择性PPARγ激动剂及cAMP诱导剂的存在下，在无血清的分化诱导用培养基中对体细胞进行培养的工序。
[0019][2]根据上述[1]所述的褐色脂肪细胞的制备方法，其中，上述工序为进一步在BMP7的存在下对体细胞进行培养的工序。
[0020][3]根据上述[1]或[2]所述的褐色脂肪细胞的制备方法，其中，上述工序为进一步在ALK2/3抑制剂及ALK6抑制剂不存在的条件下对体细胞进行培养的工序。
[0021][4]根据上述[1]～[3]中任一项所述的褐色脂肪细胞的制备方法，其中，上述工序为进一步在ALK5抑制剂不存在的条件下对体细胞进行培养的工序。
[0022][5]根据上述[1]～[4]中任一项所述的褐色脂肪细胞的制备方法，其中，选择性PPARγ激动剂为罗格列酮，或者cAMP诱导剂为毛喉素。
[0023][6]根据上述[1]～[5]中任一项所述的褐色脂肪细胞的制备方法，其中，上述体细胞为成纤维细胞。
[0024][7]一种褐色脂肪细胞，其是由上述[1]～[6]中任一项所述的制备方法制备的。
[0025][8]一种分化诱导用组合物，其是用于通过直接分化诱导从体细胞制备褐色脂肪细胞的组合物，所述分化诱导用组合物包含选择性PPARγ激动剂及cAMP诱导剂、且无血清。
[0026][9]根据上述[8]所述的分化诱导用组合物，其进一步包含BMP7。
[0027][10]根据上述[8]或[9]所述的分化诱导用组合物，其中，选择性PPARγ激动剂为罗格列酮，或者cAMP诱导剂为毛喉素。
[0028][11]根据上述[8]～[10]中任一项所述的分化诱导用组合物，其中，上述体细胞为成纤维细胞。
[0029][12]一种筛选作用于褐色脂肪细胞的药剂的方法，其使用通过上述[1]～[6]中任一项所述的制备方法制备的褐色脂肪细胞、或上述[7]所述的褐色脂肪细胞。
[0030][13]一种评价因受试物质所引起的细胞的褐色化倾向的增强程度的方法，该方法
包括：
[0031]对于通过权利要求[1]～[6]中任一项所述的制备方法制备的褐色脂肪细胞或其制备过程中的细胞、或权利要求[7]所述的褐色脂肪细胞添加受试物质，并评价该受试物质所引起的该细胞的褐色化倾向的增强程度。
[0032]专利技术的效果
[0033]根据本专利技术，可以在不进行基因导入的情况下，以无血清状态有效地进行从体细胞向褐色脂肪细胞的直接转变或直接分化诱导。由本专利技术得到的褐色脂肪细胞作为再生医疗、人褐色脂肪细胞模型等是有用的。
附图说明
[0034]图1是培养细胞的照片、以及将该细胞的线粒体(红)、UCP1蛋白质(绿)及细胞核(蓝)进行免疫染色而得到的照片。由于图1是单色的，因此，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种褐色脂肪细胞的制备方法，其是通过直接分化诱导而从体细胞制备褐色脂肪细胞的方法，该方法包括：在选择性PPARγ激动剂及cAMP诱导剂的存在下，在无血清的分化诱导用培养基中对体细胞进行培养的工序。2.根据权利要求1所述的褐色脂肪细胞的制备方法，其中，所述工序为进一步在BMP7的存在下对体细胞进行培养的工序。3.根据权利要求1或2所述的褐色脂肪细胞的制备方法，其中，所述工序为进一步在ALK2/3抑制剂及ALK6抑制剂不存在的条件下对体细胞进行培养的工序。4.根据权利要求1～3中任一项所述的褐色脂肪细胞的制备方法，其中，所述工序为进一步在ALK5抑制剂不存在的条件下对体细胞进行培养的工序。5.根据权利要求1～4中任一项所述的褐色脂肪细胞的制备方法，其中，选择性PPARγ激动剂为罗格列酮，或者cAMP诱导剂为毛喉素。6.根据权利要求1～5中任一项所述的褐色脂肪细胞的制备方法，其中，所述体细胞为成纤维细胞。7.一种褐色脂肪细胞，其是由权利要求1～6中任一项...

【专利技术属性】
技术研发人员：戴平，武田行正，原田义规，松本润一，
申请(专利权)人：京都府公立大学法人，
类型：发明
国别省市：