一种神经元特异性烯醇化酶校准品及其制备方法技术

一种神经元特异性烯醇化酶校准品及其制备方法，解决了现有校准品成本高、批间差异大、无法标准化生产的问题。本发明专利技术的一种神经元特异性烯醇化酶校准品的制备方法，包括以下步骤：(a)配制缓冲液；(b)将保护剂和不同浓度的神经元特异性烯醇化酶加入到步骤(a)获得的缓冲液中；(c)将步骤(b)中获得的缓冲液混合物进行冷冻干燥，获得一种神经元特异性烯醇化酶校准品。本发明专利技术以缓冲液为基质，通过对缓冲液种类及保护剂的筛选，制备出了成本低廉、批间差异可控、易于标准化生产且性能稳定的神经元特异性烯醇化酶校准品。

A calibrator of neuron-specific enolase and its preparation method

【技术实现步骤摘要】
一种神经元特异性烯醇化酶校准品及其制备方法
本专利技术属于体外诊断
，具体涉及一种神经元特异性烯醇化酶校准品及其制备方法。
技术介绍
神经元特异性烯醇化酶(NSE)是烯醇化酶中的一种，是一种酸性蛋白酶，分子量为78KD。烯醇化酶同工酶由α、β、γ亚基以二聚体的形式组合而成，共存在αα、αβ、ββ、αγ、γγ五种形式。其中二聚体αγ、γγ被称为NSE，NSE在神经元的生长、分化、存活和死亡过程中起着重要的调节作用。正常情况下，血清及脑脊液中含有微量的NSE，NSE异常增高时常伴有脑损伤或其它神经系统疾病和肿瘤相关疾病，如脑出血、脑缺血、脑外伤、阿尔茨海默病、神经母细胞瘤、神经内分泌疾病和小细胞肺癌等。临床上，NSE主要应用于小细胞肺癌(SCLC)的诊断，它是SCLC最敏感、最特异的肿瘤标志物，NSE在SCLC患者血清中的水平明显高于非小细胞肺癌的患者(肺腺癌、肺鳞癌、大细胞肺癌等)，也可用于鉴别诊断。此外NSE也用于神经母瘤的诊断，它与S-100蛋白联合检测也被用于黑色素瘤的诊断。因此NSE体外诊断试剂对上述疾病的早期诊断和预后观察起着十分重要的意义。而作为试剂盒核心组件的校准品，它的性能稳定性则为确保试剂检测结果的恒定提供了充足的保障。目前市售的校准品大多采用血清基质真空冷冻干燥所得，但血清基质存在较多弊端，主要是其成份复杂、含量及其作用机制仍不清楚，尤其是对其中一些多肽类生长因子、激素和脂蛋白类等物质尚未充分认识，对实验会产生一定的影响；其次血清都是批量生产，各批量之间会存在一定差异，而且血清保存期也需要被考虑，容易引起细菌等污染，导致保质期缩短，因此，要保证每批血清的一致性较为困难，从而使实验的标准化受到一定的限制；而且进口血清的价格相对较高，因此选择血清作为基质成分，需要考虑的因素非常多，对实际应用产生了很大的限制。另一方面血清容易被细菌污染，因此会为校准品的效期稳定性带来一定的风险，高品质的血清价格也相对较高，会增加最终校准品的成本。因此急需一种成本低廉、批间差异可控、易于标准化生产且性能稳定的校准品在体外诊断试剂中发挥作用。
技术实现思路
为了解决现有校准品成本高、批间差异大、无法标准化生产的问题，本专利技术提供一种神经元特异性烯醇化酶校准品及其制备方法。本专利技术为解决技术问题所采用的技术方案如下：本专利技术的一种神经元特异性烯醇化酶校准品的制备方法，包括以下步骤：(a)配制缓冲液；(b)将保护剂和不同浓度的神经元特异性烯醇化酶加入到步骤(a)获得的缓冲液中；(c)将步骤(b)中获得的缓冲液混合物进行冷冻干燥，获得一种神经元特异性烯醇化酶校准品。作为优选的实施方式，所述缓冲液为MOPSO、Tris、硼酸缓冲液中的一种或多种。作为优选的实施方式，所述缓冲液为MOPSO、Tris的一种或两种。作为优选的实施方式，所述缓冲液的pH为7.0～7.5。作为优选的实施方式，所述缓冲液的浓度为10～30mM。作为优选的实施方式，所述保护剂是由蛋白类、糖类、抗氧化剂和抑菌剂组成的混合物；所述蛋白类为卵清蛋白、浓度0.3～0.5％人血清白蛋白中的一种或两种；所述糖类为葡聚糖、浓度2～4％海藻糖中的一种或两种；所述抗氧化剂为浓度1～2％硫代硫酸钠；所述抑菌剂为硫柳汞、浓度0.05％叠氮钠中的一种或两种。本专利技术的一种神经元特异性烯醇化酶校准品，所述校准品为冻干粉。本专利技术的有益效果是：本专利技术以缓冲液为基质，通过对缓冲液种类及保护剂的筛选，制备出了成本低廉、批间差异可控、易于标准化生产且性能稳定的NSE校准品。与现有技术相比，本专利技术具有以下优点：1、本专利技术制备的NSE校准品成本低廉，仅是常规市售产品的20％。2、本专利技术制备的NSE校准品批间差异可控，避免了不同批次动物血源性成分中的不明物质对校准品性能的影响。3、本专利技术制备的NSE校准品降低了对实验操作者的生物危害，且易于实现标准化生产。4、依照本专利技术制备的NSE校准品有效期长，冻干品在常温条件下可稳定保持30个月，复溶后的液体产品在2～8度条件下可保存2个月，明显优于市售的同类型产品。附图说明图1为实施例2中神经元特异性烯醇化酶(NSE)校准品剂量反应曲线。具体实施方式本专利技术的一种神经元特异性烯醇化酶校准品的制备方法，具体包括以下步骤：(a)配制缓冲液；(b)将保护剂和不同浓度的神经元特异性烯醇化酶加入到步骤(a)获得的缓冲液中；(c)将步骤(b)中获得的缓冲液混合物进行冷冻干燥，获得一种神经元特异性烯醇化酶校准品。优选的，缓冲液为MOPSO、Tris、硼酸缓冲液中的一种或多种；更优选的，缓冲液为MOPSO或Tris或MOPSO与Tris的混合物。优选的，缓冲液的pH为7.0～7.5；更优选的，缓冲液的pH为7.2～7.4。优选的，缓冲液的浓度为10～30mM；更优选的，缓冲液的浓度为10～20mM。优选的，保护剂是由蛋白类、糖类、抗氧化剂和抑菌剂组成的混合物；其中，蛋白类优选为卵清蛋白或人血清白蛋白或卵清蛋白与人血清白蛋白的混合物；更优选的，蛋白类为浓度0.3～0.5％的人血清白蛋白。优选的，糖类为葡聚糖或海藻糖或葡聚糖与海藻糖的混合物；更优选的，糖类为浓度2～4％的海藻糖。优选的，抗氧化剂为硫代硫酸钠；更优选的，抗氧化剂为浓度1～2％的硫代硫酸钠。优选的，抑菌剂为硫柳汞或叠氮钠或硫柳汞与叠氮钠的混合物；更优选的，抑菌剂为浓度0.05％的叠氮钠。本专利技术的一种神经元特异性烯醇化酶校准品为冻干粉。在本专利技术中所使用的术语，除非另有说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。在以下实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。下述实例中所用的材料、试剂、装置、仪器、设备等，如无特殊说明，均可从商业途径获得。实施例1神经元特异性烯醇化酶校准品的制备配制pH7.0、浓度为10mM的MOPSO缓冲液100mL，向其中加入0.5g人血清白蛋白、4g海藻糖、1g硫代硫酸钠和0.05g叠氮钠，0.22μm滤膜过滤；向上述制备好的校准品基质中加入NSE；将制备好的神经元特异性烯醇化酶校准品称重1g±0.005g/瓶，放入冷冻干燥机，冻干；向制备好的神经元特异性烯醇化酶校准品冻干粉中加入1g±0.005g纯化水，室温复溶15min，进行测试，根据NSE浓度与所对应光量值，绘制剂量反应曲线。实施例2神经元特异性烯醇化酶校准品的制备配制pH7.4、浓度为20mM的Tris缓冲液100mL，向其中加入0.5g卵清蛋白、4g海藻糖、1g硫代硫酸钠和0.05g叠氮钠，0.22μm滤膜过滤；向制备好的上述制备好的校准品基质中加入NSE；将制备好的神经元特异性烯醇化酶校准品称重1g±0.005g/瓶，放入冷冻干燥机，冻干；向制备好的神经元特异性烯醇化酶校准品冻干粉中加入1g±0.005g纯化水，室温复溶15min，进行测试，根据NSE浓度与所对应光量值，绘制剂量反应曲线，如图1所示。上述实施例中所用的pH值的缓冲液、蛋白类、糖类、抗本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种神经元特异性烯醇化酶校准品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(a)配制缓冲液；(b)将保护剂和不同浓度的神经元特异性烯醇化酶加入到步骤(a)获得的缓冲液中；(c)将步骤(b)中获得的缓冲液混合物进行冷冻干燥，获得一种神经元特异性烯醇化酶校准品。

【技术特征摘要】
1.一种神经元特异性烯醇化酶校准品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(a)配制缓冲液；(b)将保护剂和不同浓度的神经元特异性烯醇化酶加入到步骤(a)获得的缓冲液中；(c)将步骤(b)中获得的缓冲液混合物进行冷冻干燥，获得一种神经元特异性烯醇化酶校准品。2.根据权利要求1所述的一种神经元特异性烯醇化酶校准品的制备方法，其特征在于，所述缓冲液为MOPSO、Tris、硼酸缓冲液中的一种或多种。3.根据权利要求2所述的一种神经元特异性烯醇化酶校准品的制备方法，其特征在于，所述缓冲液为MOPSO、Tris的一种或两种。4.根据权利要求1所述的一种神经元特异性烯醇化酶校准品的制备方法，其特征在于，所述缓冲液的pH为7.0～7.5。5...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵妍，
申请(专利权)人：迪瑞医疗科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：吉林,22