一种椰子花序的灭菌方法技术

本发明专利技术提供一种椰子花序的灭菌方法，选取带有佛焰苞的未开放的椰子花序，通过至少四次在椰子花序的切口处均匀喷洒质量浓度为70～80％乙醇并点燃，对椰子花序内部的花穗进行灭菌；该灭菌方法可减少环境污染、降低试剂成本、避免花穗外植体损伤、无褐化现象、简化试验步骤、缩短试验时间的椰子花序的灭菌方法，提高椰子组培的安全性、操作的简便性。

Sterilization of Coconut Inflorescence

【技术实现步骤摘要】
一种椰子花序的灭菌方法
本专利技术涉及椰子组培
，特别涉及一种椰子花序的灭菌方法。
技术介绍
在植物的组织培养中，外植体材料的消毒灭菌影响着后续的组培效果。椰子花序是椰子组织培养中重要的外植体材料，花序取材相对容易，且目前有多个关于成功诱导出再生植株的报道。但现有椰子花序外植体的灭菌方法均采用化学试剂灭菌的方式，一般为升汞、次氯酸钠等化学试剂浸泡灭菌，而化学试剂灭菌存在诸多的问题。一方面化学试剂会造成环境污染、材料污染、外植体损伤、外植体褐化、外植体死亡、试验成本增加。另一方面，在试验过程中往往需多次用化学试剂对外植体进行浸泡，再用无菌水进行多次清洗，最后还需要较长时间等待材料晾干等，因此化学试剂消毒灭菌还存在着处理步骤繁琐、处理时间长等缺点。寻找一种新型的椰子花序灭菌方法，以不仅能够解决上述化学试剂的弊端，降低成本低、环保高效，而且可有效保护外植体材料，提高材料完整性和避免褐化现象。
技术实现思路
鉴于此，本专利技术提出一种可减少环境污染、降低试剂成本、避免花穗外植体损伤、无褐化现象、简化试验步骤、缩短试验时间的椰子花序的灭菌方法，提高椰子组培的安全性、操作的简便性。本专利技术的技术方案是这样实现的：一种椰子花序的灭菌方法，选取带有佛焰苞的未开放的椰子花序，通过至少四次在椰子花序的切口处均匀喷洒质量浓度为70～80％乙醇并点燃，对椰子花序内部的花穗进行灭菌。本专利技术是将带有佛焰苞的未开发的椰子花序作为选材，并通过在椰子花序的切口处，重复多次采用质量浓度为70～80％乙醇喷洒于切口处，再由该改切口处点燃，不仅实现了利用佛焰苞对椰子花穗的保护作用，避免椰子花序内部的花穗的烧伤，提高了花穗外植体的完整性；而且可以在持续燃烧的条件下，达到充分干燥的高温灭菌效果，无酒精消毒的痕迹，避免了椰子花序内部的花穗出现褐化现象，实现对椰子花序内部的花穗的彻底灭菌。进一步说明，每次乙醇的喷洒量为18～22ml。当乙醇过多会造成残留而使椰子花序内部的花穗出现烧伤和褐化，过少会导致无法保证在持续燃烧的条件下来形成充分干燥的灭菌效果，灭菌不彻底，因此通过控制乙醇的喷洒量，不仅能够减少外植体的烧伤和褐化，提高花穗的完整性，而且保证椰子花序的彻底灭菌。进一步说明，一种椰子花序的灭菌方法，包括如下步骤：A.预灭菌：选取带有佛焰苞未开放的椰子花序，用乙醇进行初步清洗后，浸泡于抗氧化溶液中，再次用乙醇清洗去除残留抗氧化溶液，并采用无菌风吹干；B.干燥灭菌：(1)将经过预灭菌的椰子花序放于托盘中；(2)向托盘内部和椰子花序的切口处均匀喷洒质量浓度为70～80％乙醇并点燃，待火焰熄灭后，再次喷洒质量浓度为70～80％乙醇并点燃，如此反复4次；(3)在第4次点燃时，将椰子花序连同托盘一起放入超净工作台；(4)待火焰熄灭后，剖开佛焰苞，取出内部的无菌花穗，用于进行接种试验。本专利技术通过对椰子花序进行预灭菌处理，由乙醇对椰子花序的切口处进行初步消毒，并去除该切口处的杂质和水分；而且将其浸泡于抗氧化溶液后，再次清洗并充分吹干，有效降低了材料在后续进行干燥灭菌处理过程的烧伤和褐化率，提高整体椰子花序的灭菌效果。将椰子花序置于托盘中，向托盘内部也均匀喷洒乙醇并点燃，进一步提高灭菌的温度，并且不会对花序内部的花穗造成烧伤，以及通过多次结合质量浓度为70～80％乙醇进行点燃，使灭菌效果彻底，方便快捷。另外，可根据椰子花序的实际大小，选择重复的次数，保证其花序内部的花穗的充分干燥灭菌，提高椰子花序的灭菌效果。进一步说明，所述抗氧化溶液由质量浓度为1g/L柠檬酸和1g/L抗坏血酸混合而成。利用一定浓度的柠檬酸和抗坏血酸，不仅可以有效防止材料褐化，在后续的干燥灭菌过程，无溶液残留，避免造成对花序内部的花穗造成烧伤。进一步说明，预灭菌步骤中，椰子花序于抗氧化溶液浸泡的时间为20～25min。进一步说明，预灭菌步骤中，采用质量浓度为70～75％乙醇进行初步清洗1～2min，并用同样质量浓度的乙醇清洗去除残留抗氧化溶液。进一步说明，干燥灭菌的步骤(2)中，所述乙醇的质量浓度为75％，每次乙醇的喷洒量为20ml。采用质量浓度为75％乙醇喷洒于椰子花序的切口处，其灭菌效果最佳。控制乙醇的喷洒量为20ml时，经过重复多次燃烧，均能达到充分干燥的高温灭菌效果，且每次椰子内部的花穗均未出现烧伤或褐化的现象。进一步说明，干燥灭菌的步骤(2)中，每次火焰的燃烧时间为＞2min。控制燃烧时间，不仅使灭菌彻底，而且不会烧伤花穗。进一步说明，干燥灭菌的步骤(2)中，第一次喷洒乙醇的质量浓度为70％，燃烧时间为2.5～3min；第二次喷洒乙醇的质量浓度为72％，燃烧时间为3～3.5min；第三次喷洒乙醇的质量浓度为75％，燃烧时间为3.5～4.5min；第四次喷洒乙醇的质量浓度为80％，燃烧时间为4.5～5.5min。进一步说明，干燥灭菌的步骤(4)中，待火焰熄灭，采用高温的无菌蒸馏水浸泡椰子花序的顶部10min，于通风橱中干燥1min后，剖开佛焰苞。采用无菌蒸馏水浸泡椰子花序的顶部，对其进行软化，方便后续的解剖步骤，减少对内部花穗的损伤。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：通过本专利技术的椰子花序的灭菌方法，具有以下特点：(1)实现了充分干燥的高温灭菌效果，无酒精消毒的痕迹，椰子花序的消毒灭菌效果好，并且保证花穗材料的干燥、无菌状态，避免了再消毒灭菌过程出现无褐化现象；(2)避免了化学试剂对椰子花穗材料的影响，减少试剂对花穗的损伤，减少花穗材料的褐化及死亡，提高了花穗材料的完整性；(3)减少试验过程中化学试剂的使用，减少环境污染，降低试验成本，安全环保；(4)简化了试验操作步骤，缩短试验时间，有效提高灭菌效率。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的优选实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为本专利技术一种椰子花序的灭菌方法的实施二的经过第1次灼烧的椰子花序图；图2为本专利技术一种椰子花序的灭菌方法的实施例二的经过第2次灼烧的椰子花序图；图3为本专利技术一种椰子花序的灭菌方法的实施例二的经过第3次灼烧的椰子花序图；图4为本专利技术一种椰子花序的灭菌方法的实施例二的完成干燥灭菌后的椰子花序图；图5为本专利技术一种椰子花序的灭菌方法的完成灭菌后佛焰苞内侧的状态图；图6为本专利技术一种椰子花序的灭菌方法的完成灭菌后佛焰苞外侧的图；图7为本专利技术一种椰子花序的灭菌方法的实施例二的完成灭菌后取出内部干燥的花穗图；图8为本专利技术实施例四获得的花穗外植体接种10天的示意图；图9为本专利技术实施例四获得的花穗外植体接种14天的示意图；图10为本专利技术实施例四获得的花穗外植体接种21天的示意图；图11为本专利技术实施例四获得的花穗外植体接种30天的示意图。具体实施方式为了更好理解本专利技术
技术实现思路
，下面提供具体实施例，对本专利技术做进一步的说明。本专利技术实施例所用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。本专利技术实施例所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。实施例1一种椰子花序的灭菌方法，包括如下步骤：选取带有佛焰苞未开放的椰子花序，将其放入托盘中，在椰子花序的切口处均匀喷洒质量浓度本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种椰子花序的灭菌方法，其特征在于：选取带有佛焰苞的未开放的椰子花序，通过至少四次在椰子花序的切口处均匀喷洒质量浓度为70～80％乙醇并点燃，对椰子花序内部的花穗进行灭菌。

【技术特征摘要】
1.一种椰子花序的灭菌方法，其特征在于：选取带有佛焰苞的未开放的椰子花序，通过至少四次在椰子花序的切口处均匀喷洒质量浓度为70～80％乙醇并点燃，对椰子花序内部的花穗进行灭菌。2.根据权利要求1所述的一种椰子花序的灭菌方法，其特征在于：每次乙醇的喷洒量为18～22ml。3.根据权利要求1或2所述的一种椰子花序的灭菌方法，其特征在于：包括如下步骤：A.预灭菌：选取带有佛焰苞未开放的椰子花序，用乙醇进行初步清洗后，浸泡于抗氧化溶液中，再次用乙醇清洗去除残留抗氧化溶液，并采用无菌风吹干；B.干燥灭菌：(1)将经过预灭菌的椰子花序放于托盘中；(2)向托盘内部和椰子花序的切口处均匀喷洒质量浓度为70～80％乙醇并点燃，待火焰熄灭后，再次喷洒质量浓度为70～80％乙醇并点燃，如此反复4次；(3)在第4次点燃时，将椰子花序连同托盘一起放入超净工作台；(4)待火焰熄灭后，剖开佛焰苞，取出内部的无菌花穗，用于进行接种试验。4.根据权利要求3所述的一种椰子花序的灭菌方法，其特征在于：所述抗氧化溶液由质量浓度为1g/L柠檬酸和1g/L抗坏血酸混合而成。5.根据权利要求3所述的一种椰子花序的灭菌方法，其特征在于：预灭菌步...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢里夫·法西·艾德·赛义德·朱斯，范海阔，
申请(专利权)人：中国热带农业科学院椰子研究所，
类型：发明
国别省市：海南,46