槟榔ERF116基因及其在植物器官脱落中的应用制造技术

本发明专利技术提供一种槟榔ERF116基因，其CDS序列如SEQ ID No.1所示。本发明专利技术首次从槟榔中克隆获得槟榔ERF116基因，ERF116定位在细胞核，在槟榔落果顶峰期表达量达到最高，说明ERF116基因能够调控植物器官脱落，例如，将AcERF116基因转化番茄，能够促进番茄花梗脱落。而且本发明专利技术的AcERF116能够与AcPME启动子互作，通过调控AcPME的表达，进而影响植物器官脱落。本发明专利技术克隆的AcERF116基因具有促进植物器官脱落的功能，在作物遗传育种提供新的基因资源和技术支持，具有非常广泛的应用前景。具有非常广泛的应用前景。具有非常广泛的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
槟榔ERF116基因及其在植物器官脱落中的应用


[0001]本专利技术属于基因工程
，具体涉及一种槟榔ERF116基因及其在植物器官脱落中的应用。

技术介绍

[0002]槟榔(ArecacatechuL.)棕榈科槟榔属常绿乔木，茎直立，乔木状，高10多米，最高可达30米，有明显的环状叶痕，雌雄同株，花序多分枝，子房长圆形，果实长圆形或卵球形，种子卵形，花果期3
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4月。花果脱落是一个高度程序化的生理过程，与作物的产量密切相关，幼果异常脱落严重影响产量，是槟榔种植产业中亟待解决的问题。因此在槟榔中开展植物器官脱落相关基因的研究，对于槟榔产业的发展具有重要的意义。
[0003]本专利技术以“热研1号”槟榔幼果离层组织为试验材料，克隆得到AcERF116基因的CDS序列，并分析其在幼果脱落进程中的表达模式；构建植物超表达载体，通过农杆菌介导法转化Micro
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Tom番茄过量表达，证明其促进了番茄花梗的提前脱落。另外，克隆和研究槟榔中有关器官脱落的基因有助于提高作物遗传育种的效率，对农业生产也具有非常重要的理论和实践意义。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于克服现有技术中的不足，提供一种槟榔ERF116基因及其在植物器官脱落中的应用。
[0005]本专利技术的第一个方面是提供一种槟榔ERF116基因，其CDS序列如SEQ ID No.1所示。
[0006]本专利技术的第二个方面是提供本专利技术第一个方面所述槟榔ERF116基因编码的蛋白。
[0007]本专利技术的第三个方面是提供含有本专利技术第一个方面所述槟榔ERF116基因的编码区的重组载体或宿主菌。
[0008]其中，所述重组载体原始载体可以采用基因重组领域中常用的载体，例如病毒、质粒等。本专利技术对此不进行限定。在本专利技术的一个具体实施方式中，所述原始载体采用pCAMBIA1302，但应当理解的是，本专利技术还可以采用其他质粒、或者病毒等。
[0009]本专利技术的第四个方面是提供如本专利技术第一个方面所述的槟榔ERF116基因、或者本专利技术第二个方面所述的蛋白、或者本专利技术第三个方面所述的重组载体或宿主菌在调节植物器官脱落中的应用。
[0010]本专利技术的第五个方面是提供如本专利技术第一个方面所述的槟榔ERF116基因、或者本专利技术第二个方面所述的蛋白、或者本专利技术第三个方面所述的重组载体或宿主菌在促进果实脱落中的应用。
[0011]本专利技术的第六个方面是提供如本专利技术第一个方面所述的槟榔ERF116基因、或者本专利技术第二个方面所述的蛋白、或者本专利技术第三个方面所述的重组载体或宿主菌在促进植物花梗脱落中的应用。
[0012]本专利技术的第七个方面是提供如本专利技术第一个方面所述的槟榔ERF116基因、或者本专利技术第二个方面所述的蛋白、或者本专利技术第三个方面所述的重组载体或宿主菌在调控AcPME表达中的应用。
[0013]其中，槟榔ERF116基因编码的蛋白与AcPME启动子互作，抑制AcPME启动子活性，从而调控AcPME表达，所述AcPME启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。
[0014]本专利技术的第八个方面是提供如本专利技术第一个方面所述的槟榔ERF116基因、或者本专利技术第二个方面所述的蛋白、或者本专利技术第三个方面所述的重组载体或宿主菌在抑制AcPME启动子活性中的应用，所述AcPME启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。
[0015]本专利技术的第九个方面是提供一种引物对，所述引物对包括：AcERF116
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Fprimer：CAGATCTATGCTCCTGCTCGACATGCT(下划线的碱基为酶切位点和保护碱基，下同)，和AcERF116
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Rprimer：CCCATGGTCACCAAGGGCCAGAAGAAACCT(下划线的碱基为酶切位点和保护碱基)。
[0016]本专利技术首次从槟榔中克隆获得槟榔ERF116基因，AcERF116定位在细胞核，在槟榔落果顶峰期表达量达到最高，说明ERF116基因可调控植物器官脱落，例如，将ERF116基因转化番茄，能够促进番茄花梗脱落。而且本专利技术的AcERF116能够与AcPME启动子互作，通过调控AcPME的表达，进而影响植物器官脱落。本专利技术提供的槟榔ERF116基因可为植物尤其是槟榔的品种改良和选育提供方向和技术支持。
附图说明
[0017]图1为亚细胞定位情况。
[0018]图2为槟榔ERF116基因在槟榔幼果脱落过程中的表达情况。
[0019]图3为转槟榔ERF116基因番茄花梗脱落表型分析情况。
[0020]图4为转槟榔ERF116基因番茄花梗脱落率。
[0021]图5为显微镜观察转槟榔ERF116基因番茄果实与花梗连接部位。A
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B：野生型，C
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D：转槟榔ERF116基因番茄。
[0022]图6为酵母单杂交验证结果。
[0023]图7为双荧光素酶实验结果。
具体实施方式
[0024]下面参照附图，结合具体的实施例对本专利技术作进一步的说明，以更好地理解本专利技术。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
[0025]一、槟榔ERF116基因的获得
[0026]提取槟榔幼果离层RNA，反转录成cDNA，以所得cDNA为模板，采用基因克隆全长引物AcERF116
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Fprimer：CAGATCTATGCTCCTGCTCGACATGCT，和AcERF116
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R primer：CCCATGGTCACCAAGGGCCAGAAGAAACCT，进行PCR扩增。
[0027]PCR扩增反应体系如下：
[0028][0029]PCR扩增程序：98℃5分钟；98℃10秒钟，58℃10秒，72℃40秒，32个循环；72℃5分钟。
[0030]回收扩增产物，送测序。通过PCR方法扩增获得槟榔ERF116基因(也称为AcERF116基因)，其CDS序列如SEQ ID No.1所示。
[0031]二、AcERF116亚细胞定位
[0032]设计含有接头的AcERF116基因特异性引物(F：ActagggtctcGctccATGCTCCTGCTCGACATGCT；R：ActagggtctcTaccgTCACCAAGGGCCAGAAGAAACCTC)，以实施一中所得cDNA为模板，进行PCR扩增，PCR扩增反应体系如下：
[0033][0034]PCR扩增程序：98℃5分钟；98℃10秒钟，58℃10秒，72℃40秒，32个循环；72℃5分钟。
[0035]将PCR产物进行回收、测序正确后，通过BsaI
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HF酶切和T4DNAligase连接反应，将其片段连入pEGOEP35S
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...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种槟榔ERF116基因，其特征在于，其CDS序列如SEQ ID No.1所示。2.权利要求1所述槟榔ERF116基因编码的蛋白。3.含有权利要求1所述槟榔ERF116基因编码区的重组载体或宿主菌。4.如权利要求1所述的槟榔ERF116基因、或者权利要求2所述的蛋白、或者权利要求3所述的重组载体或宿主菌在调节植物器官脱落中的应用。5.如权利要求1所述的槟榔ERF116基因、或者权利要求2所述的蛋白、或者权利要求3所述的重组载体或宿主菌在促进植物果实脱落中的应用。6.如权利要求1所述的槟榔ERF116基因、或者权利要求2所述的蛋白、或者权利要求3所述的重组载体或宿主菌在促进植物花梗脱落中的应用。7.如权利要求1所述的槟榔ERF116基因、或者权利要求2所述的蛋白、或者权利要求3所述的重组载体或宿主菌在调控AcPME表...

【专利技术属性】
技术研发人员：李佳，王林凯，李萌，陈云澈，刘立云，李东霞，
申请(专利权)人：中国热带农业科学院椰子研究所，
类型：发明
国别省市：