一种暖木条荚蒾的离体快繁方法技术

本发明专利技术属于植物组织培养领域，提供了一种暖木条荚蒾的离体快繁方法。本发明专利技术以暖木条荚蒾的幼嫩茎段为外植体，以MS为基本培养基，添加植物生长调节物质6‑BA、IBA诱导腋芽萌发生长，在继代增殖过程中添加GA3促进形成丛生芽，再经生根诱导及炼苗移栽，可在短时间内获得大量遗传性一致的再生植株。为其良种快速繁育提供技术支撑,为加速暖木条荚蒾的综合开发利用具有重要的现实意义。

【技术实现步骤摘要】
一种暖木条荚蒾的离体快繁方法
本专利技术属于植物组织培养领域，具体涉及一种暖木条荚蒾的离体快繁方法。
技术介绍
暖木条荚蒾ViburnumburejaeticumRegeletHerder又名暖木条子、修枝荚蒾，忍冬科(Caprifoliaceae)荚蒾属落叶灌木。生长于针、阔叶混交林中，主要分布在黑龙江、吉林、辽宁，国外朝鲜北部、俄罗斯远东地区也有分布。该树种耐阴，抗寒、抗旱，生长快，耐修剪，萌发力强，根系发达，可孤植、丛植、群植于公园、广场等绿地，也可作绿篱，在园林绿化中具有良好的应用前景，是东北地区观花赏果的优良绿化树种。暖木条荚蒾枝叶茂盛，花色素雅，气味清香，是良好的蜜源植物；果实可食；种子含油约17％，供制肥皂用；枝条柔韧性好可供编织。荚蒾属植物药用价值极高，具有清热解毒、祛风除湿、健脾消食、强身、抗衰老等作用。现已研究表明，暖木条荚蒾茎枝的水煎液具有一定的抗炎镇咳祛痰作用。暖木条荚蒾具有较高的园林应用价值和经济价值，但目前多处于野生状态，未得到很好地开发和利用。现存野生资源也较少，因此培育大量优质苗木势在必行。目前暖木条荚蒾主要通过播种繁殖。但其种子具有形态生理休眠特性，播种繁殖比较困难，制约了暖木条荚蒾的推广种植及应用。因此采用组织培养方法开展离体快繁的研究是一种有效的途径。因此,建立一种暖木条荚蒾的离体快繁方法,可实现规模化育苗，为其良种快速繁育提供技术支撑，从而促进其进一步综合开发利用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种暖木条荚蒾的离体快繁方法，实现规模化育苗。通过外植体选择及消毒、启动诱导培养、继代增殖培养、生根诱导培养、炼苗移栽等过程实现了暖木条荚蒾离体快繁。本专利技术提供一种暖木条荚蒾离体快繁方法,包括以下步骤:(1)外植体的消毒及启动诱导培养：选择生长健壮的无病虫害的幼嫩枝条为外植体，先用流水冲洗30min，剪去幼枝上的叶片，然后用滴加少量吐温80的0.1％HgCl2溶液灭菌5min左右，无菌水漂洗5次。将嫩枝修剪成1cm左右带芽茎段接种于启动诱导培养基上，置于每天光照10～12h，光照强度为15001x，培养温度为23～25℃条件下培养，直至诱导腋芽萌发生长；(2)继代增殖培养：将腋芽萌发伸长生长的芽苗转入增殖培养基上进行继代增殖培养,置于每天光照12h,光照强度为15001x,培养温度为23～25℃条件下培养，直至腋芽萌发或形成丛生芽，继代周期为40d；(3)生根诱导培养：将高度约为3cm生长健壮的无根苗接种到生根培养基上进行生根诱导,置于每天光照12h,光照强度为2000～25001x,培养温度为23～25℃条件下培养至生根；(4)炼苗移栽:暖木条荚蒾在生根培养基中培养25～30d后，挑选生长健壮、根系发达的组培苗,先打开封口膜置于自然光照下炼苗3～5d,然后用清水洗净组培苗根部残留的培养基,然后用800倍多菌灵溶液浸泡20～30min，再移栽到已消毒的等体积比的珍珠岩、蛭石和腐殖土的混合基质中。上述步骤(1)所述的启动诱导培养基为MS+1.0mg/L6-BA(6-苄氨基腺嘌呤)+0.1～0.3mg/LIBA(吲哚丁酸)+30g/L蔗糖+6g/L琼脂，pH值为5.8。经过20d左右的诱导培养，腋芽萌发抽枝，35d时枝长2cm左右。上述步骤(2)所述的增殖培养基为MS+1.0mg/L6-BA+0.3mg/LIBA+0.5mg/LGA3(赤霉素)+30g/L蔗糖+6g/L琼脂，pH值为5.8；平均增殖系数达6以上。上述步骤(3)所述的生根培养基为1/2MS+0.3mg/LIBA+0.3mg/LNAA(萘乙酸)+15g/L蔗糖+6g/L琼脂,pH值为5.8。大约15d开始生根，30d左右时已分化8～12条粗壮的不定根，根长为1.5～2cm，生根率达到100％。上述步骤(4)移栽前将基质用0.3％高锰酸钾溶液淋透消毒，然后再用清水冲淋2～3遍。移栽前期覆盖塑料薄膜保湿并用遮荫网适当遮阴，每天喷雾1次，移栽后期逐渐降低湿度，增加光照。移栽15d左右长出新根，移栽成活率达85％以上。保证温湿度平衡和光照需求是移栽成功的关键。本专利技术的有益效果目前国内外还未见暖木条荚蒾离体快繁的相关报道，本专利技术采用植物组织培养技术，通过诱导腋芽萌发和形成丛生芽的途径，可在短时间内繁育大量苗木。本专利技术具有增殖系数高、移栽成活率高、生长周期短等特点，大大提高了暖木条荚蒾的育苗效率，利于工厂化生产。具体实施方式以下实施例是对本专利技术的进一步说明,不是对本专利技术的限制。具体实施(1)外植体的消毒及启动诱导培养：选择生长健壮的无病虫害的当年萌发的幼嫩枝条或萌发条为外植体，先用流水冲洗30min，然后剪去幼枝上的叶片，留2～3mm叶柄。采用两种消毒方法：一种是用10％Ca(ClO)2灭菌20min，无菌水漂洗3次；另一种是在0.1％HgCl2溶液中滴加少量吐温80灭菌5min，无菌水漂洗5次。将嫩枝剪成1cm左右带芽茎段接种于启动诱导培养基上，置于每天光照10～12h，光照强度为15001x，培养温度为23～25℃条件下培养。采用以下4种诱导培养基：MS+1.0mg/L6-BA+0.1mg/LIBA；MS+1.0mg/L6-BA+0.3mg/LIBA；MS+1.0mg/L6-BA+0.1mg/LNAA；MS+1.0mg/L6-BA+0.3mg/LNAA；每种培养基的蔗糖浓度均为30g/L，琼脂浓度均为6g/L,pH值均为5.8。经过20d的诱导培养，添加IBA的培养基中,外植体腋芽萌发生长快，两个对生侧芽分别萌发长出2片小叶；而添加NAA的培养基中腋芽诱导较慢，腋芽刚刚萌动。采用10％Ca(ClO)2灭菌效果差，污染率达70％；而采用在0.1％HgCl2溶液中滴加少量吐温80灭菌效果好，污染率仅为10％。(2)继代增殖培养：将腋芽萌发伸长生长的芽苗转入增殖培养基上进行继代增殖培养,置于每天光照12h,光照强度为15001x,培养温度为23～25℃条件下培养。采用以下3种增殖培养基：MS+1.0mg/L6-BA+0.3mg/LIBA；MS+1.0mg/L6-BA+0.3mg/LIBA+0.5mg/LGA3；MS+1.0mg/L6-BA+0.5mg/LIBA；每种培养基的蔗糖浓度均为30g/L，琼脂浓度均为6g/L,pH值均为5.8。继代培养35d观察发现添加赤霉素的培养基中，在暖木条荚蒾腋芽部位形成大量丛生芽，增殖系数大于6。而未加赤霉素的只通过腋芽萌发实现增殖，同时生长素IBA浓度为0.5mg/L时，经过3次继代培养，基部形成愈伤组织。(3)生根诱导培养：将高度约为3cm生长健壮的无根苗接种到生根培养基上进行生根诱导,置于每天光照12小时,光照强度为2000～25001x,培养温度为23～25℃条件下培养。采用以下4种生根培养基：1/2MS+0.5mg/LNAA；1/2MS+0.5mg/LIBA；1/2MS+0.3mg/LNAA+0.3mg/LIBA；1/2MS+0.5mg/LNAA+0.5mg/LIBA。每种培养基的蔗糖浓度均为15g/L，琼脂浓度均为7g/L,pH值均为5.8。培养30d，观察并统计不同处理的生根率、生根数量及根长。植物生长素对暖木条荚蒾生根的影响(4)炼苗移栽:暖木条荚蒾在生根培养基中培本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种暖木条荚蒾的离体快繁方法，其特征在于包括以下步骤：（1）外植体的消毒及诱导培养：选择生长健壮的无病虫害的当年萌发的幼嫩枝条为外植体，先用流水冲洗30min，剪掉幼枝上的叶片，然后用滴加少量吐温80的0.1%HgCl2溶液灭菌5 min左右，无菌水漂洗5次，将嫩枝修剪成1cm左右带芽茎段接种于启动诱导培养基上，置于每天光照10～12h,光照强度为15001x,培养温度为23～25℃条件下培养,直至诱导腋芽萌发生长；（2）继代增殖培养：将腋芽萌发伸长生长的芽苗转入增殖培养基上进行继代增殖培养,置于每天光照12 h,光照强度为1500 1x,培养温度为23～25 ℃条件下培养，直至腋芽萌发或形成丛生芽，继代周期为40d；（3）生根诱导培养：将高度约为3cm的生长健壮的无根苗接种到生根培养基上进行生根诱导, 置于每天光照12 h,光照强度为2000～25001x,培养温度为23～25℃条件下培养至生根；(4)炼苗移栽: 暖木条荚蒾在生根培养基中培养25～30d后，挑选生长健壮、根系发达的组培苗, 先打开封口膜置于自然光照下炼苗3～5 d, 然后用清水洗净根部残留的培养基, 移栽到已消毒的等体积比的珍珠岩、蛭石和腐殖土的混合基质中；步骤(1)所述的诱导培养基为 MS+1.0 mg/L 6‑BA(6‑苄氨基腺嘌呤)+0.1～0.3 mg/L IBA（吲哚丁酸）+30g/L蔗糖+6g/L琼脂，pH值为5.8；步骤(2)所述的增殖培养基为MS+1.0 mg/L 6‑BA+0.3mg/L IBA+0.5mg/LGA3（赤霉素）+30 g/L蔗糖+6 g/L琼脂，pH值为5.8；步骤(3)所述的生根培养基为1/2MS+0.3 mg/L IBA+0.3mg/L NAA（萘乙酸）+15 g/L蔗糖+6g/L琼脂,pH值为5.8。...

【技术特征摘要】
1.一种暖木条荚蒾的离体快繁方法，其特征在于包括以下步骤：（1）外植体的消毒及诱导培养：选择生长健壮的无病虫害的当年萌发的幼嫩枝条为外植体，先用流水冲洗30min，剪掉幼枝上的叶片，然后用滴加少量吐温80的0.1%HgCl2溶液灭菌5min左右，无菌水漂洗5次，将嫩枝修剪成1cm左右带芽茎段接种于启动诱导培养基上，置于每天光照10～12h,光照强度为15001x,培养温度为23～25℃条件下培养,直至诱导腋芽萌发生长；（2）继代增殖培养：将腋芽萌发伸长生长的芽苗转入增殖培养基上进行继代增殖培养,置于每天光照12h,光照强度为15001x,培养温度为23～25℃条件下培养，直至腋芽萌发或形成丛生芽，继代周期为40d；（3）生根诱导培养：将高度约为3cm的生长健壮的无根苗接种到生根培养基上进行生根诱导,置于每天光照12h,光照强度为200...

【专利技术属性】
技术研发人员：王欢，王志，吕伟伟，杜凤国，
申请(专利权)人：北华大学，
类型：发明
国别省市：吉林,22