【技术实现步骤摘要】
一种在双降醇生产中基因敲除新金色分枝杆菌的方法
本专利技术涉及双降醇生产
，具体为一种在双降醇生产中基因敲除新金色分枝杆菌的方法。
技术介绍
双降醇(21-hydroxy-20-methylpregn-4-en-3-one)分子式为C22H34O2，分子量为330.5，是甾体激素类药物的一种重要中间体，可以用作甾体药物黄体酮和氢化可的松的合成，具有重要的商业价值。微生物降解植物甾醇的的工作开始于20世纪60年代，目前已经发现许多微生物可以降解植物甾醇，包括Arthrobacter，Brevibacterium，Pseudomonas，Nocardia，BaciI/us，Streptomyces，Microbacterium，Achromobacter，Protaminobacter，Comamonas，Mycobacterium；fIJRhodococcus等菌种，微生物通过体内酶系高效降解植物甾醇侧链以及氧化母核环。研究表明，9-羟化酶KshA与KshB共同催化形成9-羟基雄烯二酮，从而进一步催化最终降解为二氧化碳和水。研究表明，C22脱氢酶是植物甾醇生成...
【技术保护点】
1.一种在双降醇生产中基因敲除新金色分枝杆菌的方法，具体步骤如下：1)供体构建体的构建：所述供体构建体是通过甾酮C27‑单加氧酶中的氨基酸的脱脂制得，选取定量的所述甾酮C27‑单加氧酶与定量的酸性溶液加入至反应釜中储存得混合液；2)诱变株的选取：从步骤1)的反应釜中选取含甾酮C27‑单加氧酶的混合液5‑20重量份，调整pH为6.0～7.0，并向其中加入水溶液使得制成菌悬液，将菌悬液静置1小时后再将其进行滤置，静置后菌悬液取出并通过紫外光线对其进行诱变并得到C1，2脱氢酶以及C22脱氢酶；3)C1，2脱氢酶以及C22脱氢酶的富集转化：将诱变得到的C1，2脱氢酶以及C22脱氢酶...
【技术特征摘要】
1.一种在双降醇生产中基因敲除新金色分枝杆菌的方法，具体步骤如下：1)供体构建体的构建：所述供体构建体是通过甾酮C27-单加氧酶中的氨基酸的脱脂制得，选取定量的所述甾酮C27-单加氧酶与定量的酸性溶液加入至反应釜中储存得混合液；2)诱变株的选取：从步骤1)的反应釜中选取含甾酮C27-单加氧酶的混合液5-20重量份，调整pH为6.0～7.0，并向其中加入水溶液使得制成菌悬液，将菌悬液静置1小时后再将其进行滤置，静置后菌悬液取出并通过紫外光线对其进行诱变并得到C1，2脱氢酶以及C22脱氢酶；3)C1，2脱氢酶以及C22脱氢酶的富集转化：将诱变得到的C1，2脱氢酶以及C22脱氢酶集中放置在封闭的储存罐中，储存罐的内部设有压强调节设备和温度调节器，C1，2脱氢酶以及C22脱氢酶在储存罐中富集时向储存罐中加入富集催化剂，富集催化剂加快C1，2脱氢酶以及C22脱氢酶在储存罐中的富集速度，最终转化为内部含有大量的新金色分枝杆菌双降醇；4)新金色分枝杆菌的敲除：将步骤3)中转化得到的双降醇提取与精制，然后向精制的双降醇再放入KmR抗性和sacB在5-12％蔗糖，通...
【专利技术属性】
技术研发人员：王友富，王荣，王炳乾，王洪福，邵振平，雷灵芝，黄橙橙，王瑞，陈克纲，应杨波，
申请(专利权)人：浙江神洲药业有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33
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