一种可视的连续空间定向进化方法技术

本发明专利技术涉及定向进化筛选领域，特别涉及一种可视的连续空间定向进化方法，宿主在固体培养空间上进行生长与运动，所述宿主中携带有外来的待进化目的基因，所述宿主自身包含辅助目的基因进化的基因元件，所述目的基因与所述宿主生长运动关联；通过所述宿主生长运动过程中，在所述固体培养空间上形成不同的空间分布形态进行筛选得到进化产物。该方法直接在固体培养空间上进行，通过在局部形成肉眼可见的不同空间分布形态图像，进而挑选进化产物，不需要液体流加培养设备，同时进化效果通过进化中形成的感染斑进行肉眼观察，不需要实时监测设备，操作简单，通量高。

A Visual Directed Evolution Method in Continuous Space

【技术实现步骤摘要】
一种可视的连续空间定向进化方法
本专利技术涉及定向进化筛选领域，具体而言，涉及一种可视的连续空间定向进化方法。
技术介绍
定向进化(也称实验室进化)是一种强有力的技术方法，它可以通过驾驭生物进化过程，产生具有指定功能的生物分子。所产生的生物分子已广泛应用于工业生产、生物工程、医药开发等诸多领域。哈佛大学DavidRLiu实验室开发了一种基于噬菌体生长的连续进化系统(噬菌体辅助持续进化，PACE)。它主要包含LWS、CCP、IMP三个模块：噬菌体模块(LWS)：噬菌体M13基因中包装以及侵染宿主菌所需的gIII基因被切除，插入待进化生物分子的基因，其中噬菌体缺少gIII后，无法侵染宿主产生子代噬菌体；诱变模块(IMP)：利用阿拉伯糖作为诱导物诱导DNAQ926、dam和seqA表达，使DNA复制过程中聚合酶引入的错误碱基不能被切除，提高突变率，由阿拉伯糖诱导的IMP使噬菌体的突变速率提高几百倍；辅助模块(CCP)：含有噬菌体侵染宿主细胞进行繁殖所需的gIII基因，通过将CCP上gIII的表达与LWS上待进化目的基因的生物活性绑定在一起(比如要使某RNA聚合酶向特定方向进化，则利用与进化本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种可视的连续空间定向进化方法，其特征在于，宿主在固体培养空间上进行生长与运动，所述宿主中携带有外来的待进化目的基因，所述宿主自身包含辅助目的基因进化的基因元件，所述目的基因与所述宿主生长运动关联；通过所述宿主生长运动过程中，在所述固体培养空间上形成不同的空间分布形态进行筛选得到进化产物。

【技术特征摘要】
1.一种可视的连续空间定向进化方法，其特征在于，宿主在固体培养空间上进行生长与运动，所述宿主中携带有外来的待进化目的基因，所述宿主自身包含辅助目的基因进化的基因元件，所述目的基因与所述宿主生长运动关联；通过所述宿主生长运动过程中，在所述固体培养空间上形成不同的空间分布形态进行筛选得到进化产物。2.根据权利要求1所述的一种可视的连续空间定向进化方法，其特征在于，所述目的基因位于所述宿主基因组或质粒或与所述宿主相应的寄生生物中。3.根据权利要求1所述的一种可视的连续空间定向进化方法，其特征在于，所述寄生生物包括噬菌体、噬藻体、动植物病毒、真菌病毒、支原体、衣原体和细菌中的任一种。4.根据权利要求1所述的一种可视的连续空间定向进化方法，其特征在于，所述寄生生物为噬菌体；所述宿主为以下中的任一种：所述噬菌体的非缺陷株的天然宿主菌；所述噬菌体的非缺陷株的天然宿主菌经过遗传改造后获得的菌株；经过遗传改造后才获得易感性的非天然宿主菌；进一步地，所述宿主包括大肠杆菌、巴斯德菌、痢疾杆菌、假单胞菌、黄单胞菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌以及基因改造改变其易感性的改造菌株；优选地，所述宿主为携带F因子的大肠杆菌。进一步地，所述噬菌体为温和噬菌体、烈性噬菌体或慢性感染噬菌体；进一步地，所述噬菌体包括丝状噬菌体、T4噬菌体、T7噬菌体、λ噬菌体、P1噬菌体、P2噬菌体、P22噬菌体、噬菌体、SP6噬菌体；优选地，所述丝状噬菌体包括M13丝状噬菌体、f1丝状噬菌体。5.根据权利要求1所述的一种可视的连续空间定向进化方法，其特征在于，所述目的基因为一种或几种蛋白的编码基因和非编码基因的组合；进一步地，所述目的基因选自T7RNA聚合酶基因、蛋白酶基因、纤维素酶基因、荧光蛋白基因、密度感应基因中的一种或几种。6.根据权利要求1所述的一种可视的连续空...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘陈立，赖旺生，陈茜，魏婷，孙陈健，
申请(专利权)人：深圳先进技术研究院，
类型：发明
国别省市：广东,44