抗体、结合片段及使用方法技术

本发明专利技术涉及抗SSEA4抗体及其结合片段，其包含能够高亲和力结合至SSEA4分子及SSEA4相关表达肿瘤细胞(例如乳癌、胰脏癌及肾癌细胞)的特异性互补决定区。这些抗SSEA4抗体及结合片段会诱导靶向肿瘤细胞中的ADCC或CDC效应并抑制及/或减轻癌症/肿瘤增殖。本发明专利技术亦提供用于治疗癌症的呈医药组合物形式之抗SSEA4抗体及其结合片段。另外，这些抗SSEA4抗体及结合片段可用于诊断癌症。

Antibodies, Binding Fragments and Their Use

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗体、结合片段及使用方法相关申请案本申请案主张于2016年8月22日申请的美国临时申请案案号62/378,102的优先权，其全文内容以引用方式并入本文。
本专利技术涉及用于治疗增生性病症(包括癌症)的免疫疗法及诊断这些病症的方法的抗体及结合片段。具体而言，本专利技术涉及包含针对免疫原性寡醣SSEA4的抗体及/或结合片段的碳水化合物相关的免疫疗法及医药组合物。此外，本专利技术涉及过度增生性病况及在异常细胞上表现的肿瘤相关或特异性碳水化合物的检测及/或诊断。
技术介绍
阶段特异性胚胎抗原4(Stage-specificembryonicantigen4；SSEA4)属球系列鞘醣脂(GSL)的六醣且包含Neu5Acα2→3Galβ1→3GalNAcβ1→3Galα1→4Galβ1→4Glcβ1的结构。自从1983年SSEA4首次自人类畸形癌细胞分离(KannagiR等人，1983)，迄今为止其一直广泛用作表面标记物来定义人类胚胎干细胞(hESC)。在过去几十年中，越来越多的研究指示，GloboH与SSEA4共用核心结构Galβ1→3GalNAcβ1→3Galα1→4Galβ1→4Glcβ1(SSEA3)的GSL，其在许多上皮癌(包括卵巢癌、胃癌、前列腺癌、肺癌、乳癌及胰脏癌)中过表现(ZhangS等人，1997)。且在肾细胞癌(SaitoS等人，1997)及多形性神经胶母细胞瘤(LouYW等人，2014)中观察到SSEA4的大量表现。更有趣的是，不仅在乳房肿瘤细胞中且亦在乳癌干细胞中发现SSEA4以及SSEA3及GloboH的表现(ChangWW等人，2008；HuangYL等人，2013)。然而，碳水化合物抗原通常为免疫系统可耐受，且因此诱导弱或非特异性免疫反应(SteinKE等人，1992；SnapperCM等人，1996。)。业内提出，碳水化合物抗原无法被抗原呈递细胞(APC)(例如巨噬细胞、B细胞或树突细胞)内化及消化，且因此无法呈递至辅助T(Th)细胞。自APC至T细胞缺少模拟导致不存在抗体成熟及同型切换。因此，主要产生针对碳水化合物抗原的低亲和力及非类别切换IgM抗体(MusherDM等人，1990；LortanJE等人，1993)。业内已研发出多种方法来解决缺陷。自从1950年代即研发出偶联碳水化合物抗原与载体蛋白以改良免疫原性(LindbergAA等人，1999)。该类高免疫原性蛋白包括白喉类毒素(DT)、破伤风类毒素(TT)、CRM197(白喉毒素的无毒变体)及来自脑膜炎双球菌(N.meningitides)的复合外膜蛋白(OMP)混合物(AdaG.等人，1999)。除这些蛋白质的固有免疫原性外，若接受者之前已经这些类毒素免疫，则预期加强效应。载体蛋白-碳水化合物抗原偶联物提供与欲处理且由APC经由MHCII分子呈递的某些碳水化合物抗原偶联的肽。藉由自Th细胞共模拟，针对某些碳水化合物抗原的T及B细胞则被活化。随后进行抗体同型切换及成熟，可进一步生成具有高亲和力及特异性的针对某些碳水化合物抗原的IgG抗体(BazendaleHE等人，2000)。WO2016029071提供基于碳水化合物的疫苗，其包含经由连接体化学偶联至免疫原性载体白喉毒素交叉反应材料197(CRM197)的合成SSEA4类似物。尽管载体蛋白在碳水化合物疫苗接种中提供改良免疫原性的解决方案，但该策略引起一些新的及现有问题(IngaleS等人，2007)。第一，外源载体蛋白及附接连接体可引发强免疫反应，由此导致抑制针对碳水化合物抗原的抗体反应。第二，化学偶联基本上处于蛋白质表面的离胺酸上。该实验过程难以控制，从而产生异质组成及最终结构。不明确的组成可能引起不同的免疫反应。第三，模拟细胞表面上的碳水化合物表现的偶联并不理想，由此经诱导抗体可能无法识别碳水化合物簇。研究替代性方法(例如碳水化合物聚乙二醇化)(GiorgiME.等人，2014)来克服所存在问题。然而，上文所提及的活性免疫疗法在处于免疫低下状态的癌症患者中并不充分实用。尤其接受化学疗法或放射疗法之那些以及晚期癌症患者，活性免疫介入之效能通常有限。根据上文，业内需要研发出针对癌症碳水化合物表位的治疗抗体来替代疫苗接种以适应被动免疫。
技术实现思路
本专利技术提供实例性经分离抗SSEA4单株抗体、其结合片段、编码其的核酸、及含有这些抗体及其片段的组合物、及其用于抑制及/或减少肿瘤生长及治疗癌症的方法。本文所提供的实例性单株抗SSEA4抗体及结合片段可调介抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)及/或补体依赖性细胞毒性(CDC)活性以靶向并杀死表现SSEA4的肿瘤细胞。另外，在实例性诊断应用中，本文所提供的单株抗SSEA4抗体可用于检测肿瘤样品及/或切片内的表现SSEA4的肿瘤细胞。因此，本文提供特异性结合至SSEA4或其衍生物的新颖重组抗SSEA4抗体及片段、及其用于抗肿瘤免疫疗法(例如癌症治疗)中的方法。结合至癌症抗原后，抗体可立即诱导抗体依赖性细胞介导的细胞毒性，活化补体系统，及抑制肿瘤生长。在一个实施例中，SSEA4在多个肿瘤细胞上高表现，这些肿瘤细胞包括脑瘤细胞、肺肿瘤细胞、乳房肿瘤细胞、口肿瘤细胞、食道肿瘤细胞、胃肿瘤细胞、肝肿瘤细胞、胆管肿瘤细胞、胰脏肿瘤细胞、结肠肿瘤细胞、肾肿瘤细胞、子宫颈肿瘤细胞、卵巢肿瘤细胞、前列腺肿瘤细胞。在一个实施例中，单株抗SSEA4抗体特异性结合至SSEA4分子及衍生物。在一个实施例中，包含本文所述抗SSEA4抗体的组合物可用于抗癌疗法中。具体而言，本实施例提供特异性抗SSEA4抗体的互补决定区(CDR)序列，其可用于多个抗SSEA4结合部分中。具体而言，本专利技术提供能够结合至SSEA4或其衍生物的人类化或嵌合抗体或其抗原结合片段。在某些实施例中，CDR序列由Kabat方法定义。在某些实施例中，抗SSEA4抗体具有在结合至SSEA4阳性或SSEA4表现细胞时抑制肿瘤生长的活性。在某些实施例中，经分离抗SSEA4抗体是单株抗体。针对SSEA4的单株抗体可根据业内的知识及技能制得。举例而言，其可藉由向测试个体注射人类胚胎癌细胞且然后分离具有期望序列或功能特征的杂交瘤表现抗体来制得。在一个实施例中，本专利技术提供结合至SSEA4的经分离单株抗体或其抗原结合部分，其中在靶结合时抗体具有CDC诱导活性。在一个实施例中，本专利技术提供结合至SSEA4的经分离单株抗体或其抗原结合部分，其中在靶结合时抗体具有ADCC诱导活性。在一态样中，本专利技术提供经分离单株抗体或其抗原结合片段，其分别包含：(i)选自SEQIDNo.10、40、50、60、70、80、100、120、130、140、150及170的H-CDR1、或其80％或更保守的序列同系物；(ii)选自SEQIDNo.11、41、51、61、71、81、101、121、131、141、151及171的H-CDR2、或其80％或更保守的序列同系物；(iii)选自SEQIDNo:12、42、52、62、72、82、102、122、132、142、152及172的H-CDR3、或其80％或更保守的序列同系物；(iv)选自SEQIDNo.15、45、55、65、75、85、105、125、135、145、155及本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种经分离单株抗体或其抗原结合片段，其分别包含：(i)选自SEQ ID No.10、40、50、60、70、80、100、120、130、140、150及170的H‑CDR1，或(i)的80％或更保守的序列同系物；(ii)选自SEQ ID No.11、41、51、61、71、81、101、121、131、141、151及171的H‑CDR2，或(ii)的80％或更保守的序列同系物；(iii)选自SEQ ID No:12、42、52、62、72、82、102、122、132、142、152及172的H‑CDR3，或(iii)的80％或更保守的序列同系物；(iv)选自SEQ ID No.15、45、55、65、75、85、105、125、135、145、155及175的L‑CDR1，或(iv)的80％或更保守的序列同系物；(v)选自SEQ ID No.16、46、56、66、76、86、106、126、136、146、156及176的L‑CDR2，或(v)的80％或更保守的序列同系物；及(vi)选自SEQ ID No:17、47、57、67、77、87、107、127、137、147、157及177的L‑CDR3，或(vi)的80％或更保守的序列同系物。...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.08.22 US 62/378,1021.一种经分离单株抗体或其抗原结合片段，其分别包含：(i)选自SEQIDNo.10、40、50、60、70、80、100、120、130、140、150及170的H-CDR1，或(i)的80％或更保守的序列同系物；(ii)选自SEQIDNo.11、41、51、61、71、81、101、121、131、141、151及171的H-CDR2，或(ii)的80％或更保守的序列同系物；(iii)选自SEQIDNo:12、42、52、62、72、82、102、122、132、142、152及172的H-CDR3，或(iii)的80％或更保守的序列同系物；(iv)选自SEQIDNo.15、45、55、65、75、85、105、125、135、145、155及175的L-CDR1，或(iv)的80％或更保守的序列同系物；(v)选自SEQIDNo.16、46、56、66、76、86、106、126、136、146、156及176的L-CDR2，或(v)的80％或更保守的序列同系物；及(vi)选自SEQIDNo:17、47、57、67、77、87、107、127、137、147、157及177的L-CDR3，或(vi)的80％或更保守的序列同系物。2.一种经分离单株抗体或其抗原结合片段，其分别包含：(i)选自SEQIDNo.10、40、50、60、70、80、100、120、130、140、150及170的H-CDR1，或(i)的含有少于5个氨基酸取代的保守序列同系物；(ii)选自SEQIDNo.11、41、51、61、71、81、101、121、131、141、151及171的H-CDR2，或(ii)的含有少于5个氨基酸取代的保守序列同系物；(iii)选自SEQIDNo:12、42、52、62、72、82、102、122、132、142、152及172的H-CDR3，或(iii)的含有少于5个氨基酸取代的保守序列同系物；(iv)选自SEQIDNo.15、45、55、65、75、85、105、125、135、145、155及175的L-CDR1，或(iv)的含有少于5个氨基酸取代的保守序列同系物；(v)选自SEQIDNo.16、46、56、66、76、86、106、126、136、146、156及176的L-CDR2，或(v)的含有少于5个氨基酸取代的保守序列同系物；及(vi)选自SEQIDNo:17、47、57、67、77、87、107、127、137、147、157及177的L-CDR3，或(vi)的含有少于5个氨基酸取代的保守序列同系物。3.如权利要求1或2的经分离单株抗体或其抗原结合片段，其进一步包含在CDR上的氨基酸取代，所述取代选自重链上的A100R、N31S、T62A中的一或多者及/或轻链上的S52Y。4.如权利要求1或2的经分离单株抗体或其抗原结合片段，其进一步包含CDR上的氨基酸取代，所述取代选自重链上的V50A、G53A、S35T中的一或多者及/或轻链上的V30I/A、G91A、Y94F中的一或多者。5.一种经分离单株抗体或其抗原结合片段，其包含：(i)选自SEQIDNo.13、23、33、43、53、63、73、83、103、123、133、143、153及173的重链可变结构域，或其80％或更保守的序列同系物；及(ii)选自SEQIDNo.18、28、38、48、58、68、78、88、108、128、138、148、158及178的轻链可变结构域，或其80％或更保守的序列同系物。6.一种经分离单株抗体或其抗原结合片段，其包含：(i)选自SEQIDNo.13、23、33、43、53、63、73、83、103、123、133、143、153及173的重链可变结构域，或其含有少于10个氨基酸取代的保守序列同系物；及(ii)选自SEQIDNo.18、28、38、48、58、68、78、88、108、128、138、148、158及178的轻链可变结构域，或其含有少于10个氨基酸取代的保守序列同系物。7.一种经分离单株抗体或其抗原结合片段，其包含：(i)选自SEQIDNo.13、23、33、43、53、63、73、83、103、123、133、143、153及173的重链可变结构域或其80％或更保守的序列同系物，其分别进一步包含选自SEQIDNo.10、40、50、60、70、80、100、120、130、140、150及170的H-CDR1；选自SEQIDNo.11、41、51、61、71、81、101、121、131、141、151及171的H-CDR2；选自SEQIDNo:12、42、52、62、72、82、102、122、132、142、152及172的H-CDR3；及(ii)选自SEQIDNo.18、28、38、48、58、68、78、88、108、128、138、148、158及178的轻链可变结构域或其80％或更保守的序列同系物，其分别进一步包含选自SEQIDNo.15、45、55、65、75、85、105、125、135、145、155及175的L-CDR1；选自SEQIDNo.16、46、56、66、76、86、106、126、136、146、156及176的L-CDR2；及选自SEQIDNo:17、47、57、67、77、87、107、127、137、147、157及177的L-CDR3。8.一种经分离单株抗体或其抗原结合片段，其包含：(i)选自SEQIDNo.13、23、33、43、53、63、73、83、103、123、133、143、153及173的重链可变结构域或其含有少于10个氨基酸取代的保守序列同系物，其分别进一步包含选自SEQIDNo.10、40、50、60、70、80、100、120、130、140、150及170的H-CDR1；选自SEQIDNo.11、41、51、61、71、81、101、121、131、141、151及171的H-CDR2；选自SEQIDNo:12、42、52、62、72、82、102、122、132、142、152及172的H-CDR3；及(ii)选自SEQIDNo.18、28、38、48、58、68、78、88、108、128、138、148、158及178的轻链可变结构域或其含有少于10个氨基酸取代的保守序列同系物，其分别进一步包含选自SEQIDNo.15、45、55、65、75、85、105、125、135、145、155及175的L-CDR1；选自SEQIDNo.16、46、56、66、76、86、106、126、136、146、156及176的L-CDR2；及选自SEQIDNo:17、47、57、67、77、87、107、127、137、147、157及177的L-CDR3。9.一种经分离单株抗体或其抗原结合片段，其进一步包含：(i)选自SEQIDNo.13、23、33、43、53、63、73、83、103、123、133、143、153及173的重链可变结构域；及(ii)选自SEQIDNo.18、28、38、48、58、68、78、88、108、128、138、148、158及178的轻链可变结构域或其含有少于10个氨基酸取代的保守序列同系物，其分别进一步包含选自SEQIDNo.15、45、55、65、75、85、105、125、135、145、155及175的L-CDR1；选自SEQIDNo.16、46、56、66、76、86、106、126、136、146、156及176的L-CDR2；及选自SEQIDNo:17、47、57、67、77、87、107、127、137、147、157及177的L-CDR3。10.一种经分离单株抗体或其抗原结合片段，其进一步包含：(i)选自SEQIDNo.13、23、33、43、53、63、73、...

【专利技术属性】
技术研发人员：林南宏，黄久珍，陈建有，朱国庆，翁启惠，吴汉忠，
申请(专利权)人：醣基生医股份有限公司，
类型：发明
国别省市：中国台湾,71