一种靶向CD317的嵌合抗原受体T细胞及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种靶向CD317的嵌合抗原受体T细胞，包括靶向CD317的嵌合抗原受体CAR‑CD317，CAR‑CD317包括从氨基端到羧基端顺次连接的靶向CD317的单链抗体、胞外铰链区、跨膜区和胞内信号区的氨基酸序列，靶向CD317的单链抗体包括如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列，胞内信号区包括顺次连接的CD28信号区和CD3ζ信号区，CD28信号区包括如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。CAR‑CD317可以专一性地靶向CD317，促进T细胞在患者体内的扩增，高效且特异性地杀伤肿瘤细胞。本发明专利技术还提供了该T细胞的制备方法和应用。

A Chimeric Antigen Receptor T Cell Targeting CD317 and Its Preparation and Application

【技术实现步骤摘要】
一种靶向CD317的嵌合抗原受体T细胞及其制备方法和应用
本专利技术涉及医学生物领域，特别涉及一种靶向CD317的嵌合抗原受体T细胞及其制备方法和应用。
技术介绍
恶性肿瘤(癌症)已成为威胁人类生命的元凶，发病率成上升趋势。CD317是脂筏相关蛋白，主要表达在肝癌、结肠癌等多种实体瘤细胞上，而在普通细胞中几乎很少表达。CD317的表达往往是细胞对gamma-干扰素通路的应答表现，因此与肿瘤的发生有密切关系。CAR-T(嵌合抗原受体T细胞)技术是一种新型细胞疗法，它是将经过CAR改造的T细胞回输至人体，激活自身免疫系统，对肿瘤细胞进行杀伤，被认为是目前最有效的恶性肿瘤的治疗方式之一。但目前CAR-T技术的应用还局限于血液瘤，对肝癌等多种实体瘤还未有进展。此外，CAR-T细胞的在体维持能力(persistence)是CAR-T长期疗效的保证，但实际上CAR-T在回输后几天到几周就完全消失，而未能发挥长效持久的杀伤肿瘤细胞的能力。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供了一种靶向CD317的嵌合抗原受体T细胞，包括靶向CD317的嵌合抗原受体CAR-CD317，。所述靶向CD317的嵌合抗原受体可以专一性地靶向CD317，促进T细胞在患者体内的扩增，高效且特异性地杀伤肿瘤细胞，并且几乎不对正常细胞造成损伤。同时人源化单链抗体制得的靶向CD317的嵌合抗原受体T细胞能够持久地维持其自我更新能力和肿瘤杀伤力。本专利技术还提供了一种靶向CD317的嵌合抗原受体T细胞的制备方法和应用。第一方面，本专利技术提供了一种靶向CD317的嵌合抗原受体T细胞，包括靶向CD317的嵌合抗原受体CAR-CD317，所述CAR-CD317包括从氨基端到羧基端顺次连接的靶向CD317的单链抗体、胞外铰链区、跨膜区和胞内信号区的氨基酸序列，其中所述靶向CD317的单链抗体包括如SEQIDNO：1所示的氨基酸序列，所述胞内信号区包括从氨基端到羧基端顺次连接的CD28信号区和CD3ζ信号区，所述CD28信号区的氨基酸序列包括如SEQIDNO：2所示的氨基酸序列。其中，所述“从氨基端到羧基端顺次连接”具体为：所述靶向CD317的单链抗体的氨基酸序列的羧基端与所述铰链区的氨基酸序列的氨基端相连，所述胞外铰链区的氨基酸序列的羧基端与所述跨膜区的氨基酸序列的氨基端相连，所述跨膜区的氨基酸序列的羧基端与所述胞内信号区的氨基酸序列的氨基端相连。可选的，所述靶向CD317的单链抗体的编码基因包括如SEQIDNO：6所示的核苷酸序列。可选的，所述靶向CD317的单链抗体编码基因应该考虑简并碱基，即如SEQIDNO:1所示的氨基酸序列的编码基因包括如SEQIDNO:6所示的核苷酸序列，保护范围还应该保护与SEQIDNO:6具有碱基简并性质的核苷酸序列，这些核苷酸序列对应的氨基酸序列仍然为SEQIDNO:1。本专利技术中，所述胞外铰链区用于促进所述靶向CD317的单链抗体与肿瘤上的CD317结合。可选的，所述胞外铰链区包括CD8α铰链区、CD28铰链区、CD4铰链区、CD5铰链区、CD134铰链区、CD137铰链区、ICOS铰链区中的一种或多种的组合。进一步可选的，所述胞外铰链区为CD8α铰链区。可选的，所述CD8α铰链区的氨基酸序列包括如SEQIDNO：7所示的氨基酸序列。可选的，所述CD8α铰链区的编码基因包括如SEQIDNO：8所示的核苷酸序列。可选的，所述CD8α铰链区的编码基因应该考虑简并碱基，即如SEQIDNO:6所示的氨基酸序列的编码基因包括如SEQIDNO:8所示的核苷酸序列，保护范围还应该保护与SEQIDNO:7具有碱基简并性质的核苷酸序列，这些核苷酸序列对应的氨基酸序列仍然为SEQIDNO:7。本专利技术中，所述跨膜区用于固定所述靶向CD317的嵌合抗原受体CAR-CD317。可选的，所述跨膜区包括CD3跨膜区、CD4跨膜区、CD8跨膜区、CD28跨膜区中的一种或多种的组合。进一步可选的，所述跨膜区为CD8跨膜区。可选的，所述CD8跨膜区的氨基酸序列包括如SEQIDNO：9所示的氨基酸序列。可选的，所述CD8跨膜区的编码基因包括如SEQIDNO：10所示的核苷酸序列。可选的，所述CD8跨膜区的编码基因应该考虑简并碱基，即如SEQIDNO:8所示的氨基酸序列的编码基因包括如SEQIDNO:10所示的核苷酸序列，保护范围还应该保护与SEQIDNO:10具有碱基简并性质的核苷酸序列，这些核苷酸序列对应的氨基酸序列仍然为SEQIDNO:9。本专利技术中，所述胞内信号区用于提供T细胞活化的信号，维持T细胞的生存时间和激活T细胞增殖信号通路。可选的，所述胞内信号区包括4-1BB信号区、CD3ζ信号区、ICOS信号区、CD27信号区、OX40信号区、CD28信号区、IL1R1信号区、CD70信号区、TNFRSF19L信号区中的一种或多种的组合。本专利技术中，所述胞内信号区为从氨基端到羧基端顺次连接的CD28信号区和CD3ζ信号区。可选的，所述CD28信号区的氨基酸序列包括如SEQIDNO：2所示的氨基酸序列。可选的，所述CD28信号区的编码基因包括如SEQIDNO：11所示的核苷酸序列。可选的，所述CD28信号区的编码基因应该考虑简并碱基，即如SEQIDNO:10所示的氨基酸序列的编码基因包括如SEQIDNO:11所示的核苷酸序列，保护范围还应该保护与SEQIDNO:11具有碱基简并性质的核苷酸序列，这些核苷酸序列对应的氨基酸序列仍然为SEQIDNO:10。可选的，所述CD3ζ信号区的氨基酸序列包括如SEQIDNO：12所示的氨基酸序列。可选的，所述CD3ζ信号区的编码基因包括如SEQIDNO：13所示的核苷酸序列。可选的，所述CD3ζ信号区的编码基因应该考虑简并碱基，即如SEQIDNO:12所示的氨基酸序列的编码基因包括如SEQIDNO:13所示的核苷酸序列，保护范围还应该保护与SEQIDNO:13具有碱基简并性质的核苷酸序列，这些核苷酸序列对应的氨基酸序列仍然为SEQIDNO:12。可选的，所述CAR-CD317的氨基酸序列包括如SEQIDNO：3所示的氨基酸序列。可选的，所述CAR-CD317的编码基因包括如SEQIDNO：4所示的核苷酸序列。可选的，所述CAR-CD317的编码基因应该考虑简并碱基，即如SEQIDNO:3所示的氨基酸序列的编码基因包括如SEQIDNO:4所示的核苷酸序列，保护范围还应该保护与SEQIDNO:4具有碱基简并性质的核苷酸序列，这些核苷酸序列对应的氨基酸序列仍然为SEQIDNO:3。本专利技术第一方面提供的所述靶向CD317的嵌合抗原受体T细胞，包括靶向CD317的嵌合抗原受体CAR-CD317，该受体可供所述T细胞专一性地靶向表达CD317的肿瘤细胞，在CAR-CD317与CD317结合后，所述T细胞的胞内信号区被激活，促进T细胞在患者体内的扩增，并高效且特异性的杀伤肿瘤细胞，而对正常细胞几乎不会造成损伤。而且，如SEQIDNO：2的氨基酸序列所示的CD28信号区作为所述T细胞的共刺激信号，在它与作为T细胞的抗原特异性信号(即，第一信号)的CD3ζ信号区的共同作用下，T细胞在识别抗原后被完全活化。特别地，选用如SEQIDNO：2的CD27信号本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种靶向CD317的嵌合抗原受体T细胞，其特征在于，包括靶向CD317的嵌合抗原受体CAR‑CD317，所述CAR‑CD317包括从氨基端到羧基端顺次连接的靶向CD317的单链抗体、胞外铰链区、跨膜区和胞内信号区的氨基酸序列，其中，所述靶向CD317的单链抗体包括如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列，所述胞内信号区包括从氨基端到羧基端顺次连接的CD28信号区和CD3ζ信号区，所述CD28信号区的氨基酸序列包括如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
1.一种靶向CD317的嵌合抗原受体T细胞，其特征在于，包括靶向CD317的嵌合抗原受体CAR-CD317，所述CAR-CD317包括从氨基端到羧基端顺次连接的靶向CD317的单链抗体、胞外铰链区、跨膜区和胞内信号区的氨基酸序列，其中，所述靶向CD317的单链抗体包括如SEQIDNO：1所示的氨基酸序列，所述胞内信号区包括从氨基端到羧基端顺次连接的CD28信号区和CD3ζ信号区，所述CD28信号区的氨基酸序列包括如SEQIDNO：2所示的氨基酸序列。2.如权利要求1所述的靶向CD22的嵌合抗原受体T细胞，其特征在于，所述胞外铰链区包括CD8α铰链区，所述跨膜区包括CD8跨膜区。3.如权利要求2所述的靶向CD317的嵌合抗原受体T细胞，其特征在于，所述CAR-CD317的氨基酸序列包括如SEQIDNO：3所示的氨基酸序列。4.如权利要求3所述的靶向CD22的嵌合抗原受体T细胞，其特征在于，所述CAR-CD317的编码基因序列包括如SEQIDNO：4所示的核苷酸序列。5.一种重组病毒载体，其特征在于，所述重组病毒载体包括如权利要求1-4任一项所述的靶向CD317的嵌合抗原受体T细胞的CAR-CD317的编码基因序列。6.如权利要求5所述的重组病毒载体，其特征在于，所述CAR-CD317的编码基因序列包括如SEQIDNO：5所示的核苷酸序列。7.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包括如权利要求5-6任一项所述的重组病毒载体。8.一种靶向CD317的嵌合抗原受体T...

【专利技术属性】
技术研发人员：张宏玲，龙丽梅，钟春颖，
申请(专利权)人：深圳宾德生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44