【技术实现步骤摘要】
一种抗手足口病鸡卵黄抗体的制备方法
本专利技术涉及免疫学
,特别是指一种抗手足口病鸡卵黄抗体的制备方法。
技术介绍
手足口病(HandfootandmouthdiseaseHFMD)是一种儿童传染病,又名发疹性水疱口腔炎,是由一组肠道病毒引起的常见传染病,该病全年均可发病,多发于夏秋季,可引起发热和手、足、口腔等部位的皮疹或疱疹,具有很强的传染性,可以通过玩具、食具、鼻咽分泌物、飞沫粪便等多种途径传染。手足口病的易感人群基本是五岁以下儿童,临床表现以发热和手、足、口腔等部位的疱疹为主要临床特征,可引起手、足、口腔等部位的疱疹,少数患儿可引起心肌炎、肺水肿、无菌性脑膜脑炎等,合并神经系统、呼吸系统、循环系统等并发症状,导致严重的后遗症甚至死亡,尤以脑干脑炎为甚。严重威胁儿童健康。2008年我国首次将手足口病纳入法定传染病。手足口病是由肠道病毒引起的传染病,引发手足口病的肠道病毒有20多种(型),其中以肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A16型(CoxA16)最为常见,不同年间的主要感染病毒类型有所变化。手足口病病例中,EV71型感染引发的后遗症更严重,致死率更高,在我国EV71-C4亚型占主导地位。中国疾病预防控制中心统计数据显示,2008-2015年,我国共报告手足口病约1380万例,平均年发病率为14.7例/万人,重症病例约13万例,死亡3300多人。其中EV71、CV-A16和其他肠道病毒感染比例分别为44%、25%和31%。重症病例中EV71感染占74%,死亡病例中EV71构成比高达93%,据估算,我国每年由EV71感染所致重症和轻症手足口 ...
【技术保护点】
1.一种抗手足口病鸡卵黄抗体的制备方法,其特征在于描述复合抗原的制备及免疫方法、鸡卵黄抗原的纯化方法及鸡卵黄抗原的稳定性评价方法,包含以下步骤:1)制备手足口病病毒EV71病毒颗粒;2)根据EV71序列设计一对特异性引物,以手足口患儿咽拭子标本提取病毒核酸经逆转录后产物cDNA为模板,PCR扩增VP1基因,再经PCR扩增后双酶切的方法构建原核表达载体pET22b‑VP1,测序成功后的表达载体用于VP1蛋白的表达;3)复合抗原的制备;4)将复合免疫抗原对SPF产蛋母鸡进行免疫,获得免疫鸡蛋;5)将免疫鸡蛋蛋黄进行提取、纯化,后过滤除菌,再经过超低温喷雾干燥,即得抗手足口病的鸡卵黄抗体纯品,4℃保存。
【技术特征摘要】
1.一种抗手足口病鸡卵黄抗体的制备方法,其特征在于描述复合抗原的制备及免疫方法、鸡卵黄抗原的纯化方法及鸡卵黄抗原的稳定性评价方法,包含以下步骤:1)制备手足口病病毒EV71病毒颗粒;2)根据EV71序列设计一对特异性引物,以手足口患儿咽拭子标本提取病毒核酸经逆转录后产物cDNA为模板,PCR扩增VP1基因,再经PCR扩增后双酶切的方法构建原核表达载体pET22b-VP1,测序成功后的表达载体用于VP1蛋白的表达;3)复合抗原的制备;4)将复合免疫抗原对SPF产蛋母鸡进行免疫,获得免疫鸡蛋;5)将免疫鸡蛋蛋黄进行提取、纯化,后过滤除菌,再经过超低温喷雾干燥,即得抗手足口病的鸡卵黄抗体纯品,4℃保存。2.如权利要求1所述的一种抗手足口病鸡卵黄抗体的制备方法,其特征在于,步骤1)EV71病毒颗粒的制备方法:收集EV71病毒,EV71病毒接种单层Vero细胞,37℃、5%二氧化碳培养至细胞半数死亡,冻融裂解细胞三次后,12000rpm离心收集上清液,甲醛或β-丙内酯灭活病毒,PEG8000沉淀病毒,4℃沉淀过夜,8000rpm离心20min,收集沉淀,PBS缓慢溶解沉淀,再通过蔗糖垫层进行超速离心,病毒颗粒收集完毕。3.如权利要求1所述的一种抗手足口病鸡卵黄抗体的制备方法,其特征在于,步骤2)中一对特异性引物的序列,上游引物:GGAGATAGGGTGGCAGATGTAA,下游引物:AAGAGTAGTGATCGCTGTGCGA。4.如权利要求1所述的一种抗手足口病鸡卵黄抗体的制备方法,其特征在于,步骤2)中PCR扩增的VP1,其基因序列为:GGAGATAGGGTGGCAGATGTAATTGAAAGTTCCATAGGAGATAGCGTGAGCAGAGCCCTCACTCACGCTCTACCAGCACCCACAGGCCAGAACACACAGGTGAGCAGTCATCGACTGGATACAGGCAAGGTTCCAGCACTCCAAGCTGCTGAAATTGGAGCATCATCAAATGCTAGTGACGAGAGCATGATTGAGACACGCTGTGTTCTTAACTCGCACAGCACAGCTGAGACCACTCTTGATAGTTTCTTCAGCAGAGCGGGATTAGTCGGAGAGATAGATCTCCCTCTTGAAGGCACAACTAACCCAAATGGTTATGCCAACTGGGACATAGATATAACAGGTTACGCACAAATGCGTAGAAAGGTGGAGCTATTCACCTACATGCGCTTTGATGCAGAGTTCACTTTTGTTGCGTGCACACCCACCGGGGGAATTGTCCCACAATTGCTCCAATACATGT...
【专利技术属性】
技术研发人员:邵峰,
申请(专利权)人:青岛今墨堂生物技术有限公司,
类型:发明
国别省市:山东,37
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