一种髓过氧化物酶检测试剂及其制备和使用方法技术

本发明专利技术涉及一种髓过氧化物酶检测试剂及其制备和使用方法。应用该检测试剂可以实现在全自动生化分析仪上对髓过氧化物酶含量的自动化测定，可以高通量、快速化、精确地测定生物样本中髓过氧化物酶的含量，且具有操作简便、灵敏度高、特异性强、结果准确等优点，有效降低髓过氧化物酶检测成本，有利于临床广泛推广使用。

【技术实现步骤摘要】
一种髓过氧化物酶检测试剂及其制备和使用方法
本专利技术属于生物检测
，具体涉及一种髓过氧化物酶检测试剂及其制备和使用方法。
技术介绍
髓过氧化物酶（Myeloperoxidase，MPO）是一种血色素蛋白，它存在于嗜中性多核细胞的嗜天青颗粒和巨嗜细胞中，其主要功能是利用过氧化氢和氯离子产生次氯酸盐，并形成具有氧化能力的自由基，在吞噬细胞内杀灭微生物。而且MPO可释放到细胞外，破坏多种靶物质，如肿瘤细胞、血小板、NK细胞、原虫、毒素等，对机体产生和调节炎症反应等多方面发挥作用。因此，MPO含量在炎症病变中是一项灵敏的指标。目前，国内外用于髓过氧化物酶含量检测的方法主要有：气相色谱法（GC）、高效液相色谱法(HPLC)、液相色谱-质谱法(LC-MS)、酶联免疫分析法(ELISA)、放射免疫法(RIA)、时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)和化学发光免疫分析法(CLIA)等，这些方法在临床应用上均具有一定的局限性。目前市场上缺乏稳定性好、灵敏度高、特异性强的髓过氧化物酶检测试剂，尤其是质量好的自动化检验试剂。因此，研发一种质量达到临床要求、实用性强、性价比高，可应用于全自动生化分析仪本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种髓过氧化物酶检测试剂，其特征在于，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1中包含抗髓过氧化物酶特异性抗体和均相酶底物溶液；所述试剂R2包含髓过氧化物酶氨基末端三肽酶标偶联物和R2缓冲液。

【技术特征摘要】
1.一种髓过氧化物酶检测试剂，其特征在于，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1中包含抗髓过氧化物酶特异性抗体和均相酶底物溶液；所述试剂R2包含髓过氧化物酶氨基末端三肽酶标偶联物和R2缓冲液。2.根据权利要求1所述的髓过氧化物酶检测试剂，其特征在于，制备方法包括以下步骤：A.试剂R1的制备：将质量分数5.0%的氧化态的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、5.0%的葡萄糖-6-磷酸、0.1%的牛血清白蛋白、0.05%的NaN3的用55mmol/L、pH=8.0的Tris缓冲液溶解制成均相酶底物溶液；再将抗髓过氧化物酶特异性抗体加入所述均相酶底物溶液中混匀，得到试剂R1，所述抗髓过氧化物酶特异性抗体与均相酶底物溶液的体积比为1:100～1:10000；优选地，所述抗髓过氧化物酶特异性抗体与均相酶底物溶液的体积比为1:450；B.试剂R2的制备：将质量分数0.1%的牛血清白蛋白、0.05%的NaN3用120mmol/L、pH=8.2的Tris缓冲液溶解制成R2缓冲液，再将髓过氧化物酶氨基末端三肽酶标偶联物加入所述R2缓冲液中混匀，得到试剂R2，所述髓过氧化物酶氨基末端三肽酶标偶联物与R2缓冲液的体积比为1:100～1:10000；优选地，所述髓过氧化物酶氨基末端三肽酶标偶联物与R2缓冲液的体积比为1:1350。3.根据权利要求1-2中任一项所述的髓过氧化物酶均相酶免疫检测试剂，其特征在于，所述的抗髓过氧化物酶特异性抗体，由髓过氧化物酶氨基末端三肽免疫原免疫实验动物后产生，所述抗体为完整抗体分子，或者为保留与髓过氧化物酶氨基末端三肽特异性结合能力的抗体片段或抗体衍生物，所述实验动物为兔、山羊、小鼠、绵羊、豚鼠或马中的一种，优选为兔；所述抗髓过氧化物酶特异性抗体的制备方法，包括以下步骤：a.用PBS缓冲液将髓过氧化物酶氨基末端三肽免疫原稀释至3.0mg/ml，得到免疫原溶液，然后用3.0ml所述免疫原溶液与等量弗氏完全佐剂混合，对实验动物进行注射；b.2周后，再用3.0ml相同的免疫原溶液与等量弗氏不完全佐剂混合，对上述实验动物注射一次，之后每隔2～5周注射一次，共计注射3～8次；c.对免疫后的实验动物取血，分离纯化得到抗髓过氧化物酶特异性抗体。4.根据权利要求3所述的髓过氧化物酶均相酶免疫检测试剂，其特征在于，所述髓过氧化物酶氨基末端三肽免疫原由髓过氧化物酶氨基末端三肽衍生物与载体连接而成，其结构式如下述式（Ⅰ）所示：式（Ⅰ）；所述载体为具有免疫原性的蛋白质或多肽，选自血清蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白或甲状腺球蛋白中的一种，优选为血清蛋白，更优选为牛血清白蛋白；所述髓过氧化物酶氨基末端三肽免疫原的制备方法，包括以下步骤：（1）将质量分数1.0%的载体蛋白溶解于0.2mmol/L，pH=8.5的磷酸缓冲液中，得到载体蛋白溶液；（2）将质量分数0.5%的髓过氧化物酶氨基末端三肽衍生物、5.0%的二甲基甲酰胺、5.0%的乙醇溶解于10mmol/L，pH=5.0的磷酸钾缓冲液中，再加入质量分数0.5%的1-乙基-3-(-3-二甲氨丙基)碳二亚胺，将上述化学物质在25～35℃下搅拌反应30～60分钟；（3）将步骤（2）中溶解好的溶液缓慢滴加至步骤（1）中的载体蛋白溶液中，并在-4～0℃下搅拌12～24小时，得到偶联物溶液，将反应后的偶联物溶液进行透析纯化，纯化后所得溶液即为髓过氧化物酶氨基末端三肽免疫原溶液，在髓过氧化物酶氨基末端三肽免疫原溶液中加入质量分数0.10%的NaN3，于-20℃下储存。5.根据权利要求1-2中任一项所述的髓过氧化物酶均相酶免疫检测试剂，其特征在于，所述的髓过氧化物酶氨基末端三肽酶标偶联物由髓过氧化物酶氨基末端三肽衍生物与葡萄糖-6-磷酸脱氢酶连接而成，其结构式如下述式（Ⅱ）所示：式（Ⅱ）；所述髓过氧化物酶氨基末端三肽酶标偶联物的制备方法，包括以下步骤：①葡萄糖-6-磷酸脱氢酶溶液的制备：将质量分数2.5%的规格为200KU的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶，室温下溶解于含有0.05mol/LTris、3.6mmol/LMgCl2和1.8mmol/LNaCl，pH=8.5～9.0的溶液中；在此溶...

【专利技术属性】
技术研发人员：虞留明，
申请(专利权)人：苏州博源医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32