一种增加苜蓿中皂苷提取量的发酵处理方法技术

本发明专利技术提供了一种增加苜蓿中皂苷提取量的发酵处理方法，包括以下步骤：步骤1，培养基配制；YPD固体培养基，LB固体培养基，MRS固体培养基。步骤2，酵母菌发酵液体菌制备：枯草芽孢杆菌发酵液体菌制备：植物乳杆菌发酵液体菌制备：步骤3，准确紫花苜蓿粉，以步骤2制作的发酵液为发酵菌种，按照菌种体积比组合酵母菌、枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌的其中一种或几种发酵；发酵水分为40～60％、发酵温度为25～35℃、发酵时间为24～72h。本发明专利技术优点在于：无环境污染，无能耗，无有害物质产生的方式对其进行处理，提高了提取量。

A Fermentation Method for Increasing the Extraction of Saponins from Alfalfa

The invention provides a fermentation processing method for increasing the extraction amount of saponins in alfalfa, including the following steps: step 1, preparation of culture medium; YPD solid culture medium, LB solid culture medium, MRS solid culture medium. Step 2: Yeast fermentation liquid bacteria preparation: Bacillus subtilis fermentation liquid bacteria preparation: Lactobacillus plantarum fermentation liquid bacteria preparation: Step 3, accurate alfalfa powder, step 2 fermentation liquid as fermentation bacteria, according to the volume ratio of yeast, Bacillus subtilis, Lactobacillus plantarum one or more fermentation; fermentation water 40-60%, fermentation temperature The fermentation time was 24-72 hours and the degree of fermentation was 25-35 degrees. The invention has the advantages of no environmental pollution, no energy consumption and no harmful substance generation, and improves the extraction amount.

【技术实现步骤摘要】
一种增加苜蓿中皂苷提取量的发酵处理方法
本专利技术涉及固体发酵处理
，特别涉及一种增加紫花苜蓿中皂苷提取量的固体发酵处理方法。
技术介绍
紫花苜蓿(MedicagoSativaL.)是一种多年生豆科植物，由于紫花苜蓿对生长条件的要求不高，在大多数地区均可以种植，但是在全球范围内以美洲和欧洲种植范围最为广泛。在我国境内，苜蓿种植比较广泛的区域主要分布在东北等一些地区。由于紫花苜蓿的适应力强、营养丰富、动物喜食等优点，有“牧草之王”的美称。紫花苜蓿干草中的粗蛋白含量高，一般为18.5％左右，粗蛋白含量高于禾本科植物和能量饲料。苜蓿干物质中的粗蛋白含量是玉米的2倍左右，接近是豆粕的1/2，是禾本科牧草的1.4～3.3倍，是一种优质的植物蛋白饲料。同时，苜蓿干草中的可消化蛋白含量高，比禾本科牧草高2倍以上。紫花苜蓿的蛋白质中具有动物生长发育过程中需要的多种氨基酸。在紫花苜蓿含有的所有氨基酸中，赖氨酸(Lys)、丝氨酸(Ser)等氨基酸的含量较高，但是酪氨酸(Tyr)、组氨酸(His)等氨基酸的含量较低。由于紫花苜蓿中氨基酸含量丰富，比例较合理，因此是一种调整配合饲料适口性的植物类饲料，也是人类膳食中的美味菜肴。正是由于苜蓿的这些优良性状，使得紫花苜蓿在我国广大地区种植广泛，具有丰富的资源。除了蛋白和氨基酸，紫花苜蓿中含有多种微量组分如，维生素，其中除了B族维生素外，还有叶酸、生物素、烟酸、胡萝卜素等，其中生物素的含量较高，而且紫花苜蓿是生物素利用率最高的原料之一。此外，还含有多种矿物质，除了Ca、Mg、K、Na等一些常量元素外，还含有多种微量元素，如Fe、Mn、Zn、Se等。紫花苜蓿中的矿物质元素含量明显高于禾本科牧草，而且苜蓿中的磷不含植酸磷，生物学价值较高。活性成分也是紫花苜蓿发挥特殊功能的主要物质，其中包括皂苷、多糖、黄酮类以及未知促生长因子等。苜蓿多糖(MSP)是一种由酸性碳水化合物构成的植物型多糖，苜蓿多糖中不含有蛋白、淀粉和鞣质，而且苜蓿多糖是一种酸性多糖[73]。苜蓿多糖具有多种功效，能够抑制肿瘤细胞生长，提高免疫力，还有降血糖和抗辐射等功效。苜蓿皂苷是一种结构复杂的化合物，紫花苜蓿的各个部位均含有皂苷，而且苜蓿皂苷具有多种功效，能够降低胆固醇，抑制病菌生长，还有消炎镇痛的作用。研究表明，苜蓿皂甙能够降低胆固醇，原因是它可以阻止胆汁酸在体内经过化学反应转变为胆固醇，最终只能被动物机体排出体外，通过降低胆汁酸的含量，从而降低体内胆固醇含量。此外，苜蓿皂苷具有抑菌作用，能够抑制一些细菌的生长，还可以清除机体内自由基，具有抗氧化作用。由于紫花苜蓿的营养特性，目前紫花苜蓿已经被广泛种植，除了应用于畜牧业之外，大量的紫花苜蓿被用于活性成分的提取。提取后的渣类同样具有很高的饲用价值，因此通过对苜蓿皂苷的提取，不仅获得了活性成分，还能够给畜牧业提供饲草。为了充分开发苜蓿的价值，提取其中的活性成分也是大家关注的焦点。皂苷是一种结构为五环三萜烯类化合物，按照皂苷分子中含有的皂苷元结构不同，可以分为两种皂苷，分别为甾体皂苷和三萜类皂苷。紫花苜蓿中存在多种皂苷，主要为齐墩果烷型。苜蓿皂苷一般为白色粉末，能溶于水，易溶于热乙醇等溶剂，不溶于乙醚等溶剂。紫花苜蓿植株中的皂苷含量受多种因素影响，不同地区的紫花苜蓿中皂苷含量存在差异，不同生长阶段的紫花苜蓿植株内的皂苷含量也不相同。而且，紫花苜蓿不同部位的皂苷含量也存在差异，不同部位的皂苷溶血性强弱也有差异。皂苷作为苜蓿中的重要的活性成分，具有多种生物学功能，主要包括：(1)能降低胆固醇含量。研究表明，苜蓿皂苷能够抑制肠道对胆固醇的吸收，增加了胆固醇排出体外的量，从而降低了血液中胆固醇的含量。(2)抗菌、杀虫作用。研究发现，苜蓿皂苷能够在一定程度上增加细胞膜渗透性，而且能够消除细胞膜上的麦角固醇，从而起到对病菌的抑制作用。对于一些昆虫来说，皂苷是有毒物质，因此皂苷可以当作驱虫剂或杀虫剂，用来驱除有害昆虫。(3)溶血性。溶血性是皂苷的重要特征，皂苷进入到血液后可以与血红细胞中的胆固醇结合，具有很强的毒性，但是在正常服用时没有影响。(4)化感作用。皂苷能够破坏植物的细胞膜结构，利用皂苷的化感作用可以将皂苷制成除草剂，用来去除杂草。皂苷的提取方法主要有水提取法、醇提取法、超声波辅助提取法，微波辅助提取法等。水提取法就是以水作为溶剂，在加热条件下进行提取，水提取液用正丁醇萃取，减压回收后得到粗皂苷。醇提取法就是用乙醇或甲醇作为提取溶剂，在加热条件下回流提取，醇提取液用石油醚脱脂后，用正丁醇萃取，减压回收后得到粗皂苷。超声波辅助提取法就是以水或醇作为溶剂，用超声波作为辅助条件，可以加快分子的运动频率和溶剂的渗透性，能够加快植物中有效成分的扩散，有利于提高皂苷的提取效率。微波辅助提取法就是以水或醇作为溶剂，用微波作为辅助提取条件，在微波的作用下加速皂苷的扩散，可以加快提取速度，大幅度缩减提取时间。植物中皂苷的提取量会受到多种条件影响，已经有研究表明，除了自身含量的影响之外，不同的处理方式能够影响植物中皂苷含量。现有的预处理方式耗能(如微波、加热等)、有污染(如有机溶剂处理等)；如果不处理提取量较低。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术的缺陷，提供了一种增加苜蓿中皂苷提取量的发酵处理方法，能有效的解决上述现有技术存在的问题。为了实现以上专利技术目的，本专利技术采取的技术方案如下：一种增加苜蓿中皂苷提取量的发酵处理方法，包括以下步骤：步骤1，培养基配制；YPD固体培养基配制：蛋白胨2g，葡萄糖2g，酵母膏1g，固体培养基添加琼脂2g，灭菌备用，用于培养酵母菌种。LB固体培养基配制：NaCl1g，蛋白胨1g，酵母膏0.5g，固体培养基添加琼脂粉2g，灭菌备用，用于培养枯草芽孢杆菌菌种。MRS固体培养基配制：葡萄糖2g，乙酸钠0.75g，蛋白胨1.5g，硫酸镁0.03g，牛肉膏1.5g，柠檬酸铵0.2g，酵母膏0.75g，磷酸氢二钾0.2g，固体培养基添加琼脂粉2g，灭菌备用，用于培养植物乳杆菌菌种。步骤2，发酵液体菌种制备；酵母菌制备：用接种环从实验室斜面培养基上挑取一个酿酒酵母的单菌落，置于装有5mL液体培养基的试管中，30℃，200r/min转速下震荡培养培养12h，按照2％的体积比接种到装液量20％的三角瓶液体培养基中，继续摇床培养12h左右，至活菌数1×109CFU/mL，收集酵母菌发酵液备用。枯草芽孢杆菌制备：用接种环从实验室斜面培养基上挑取一个枯草芽孢杆菌的单菌落，置于装有5mL液体培养基的试管中，37℃，200r/min转速震荡培养12h，按照2％的比例接种到装液量20％的三角瓶液体培养基中，继续摇床培养12小时，至活菌数5×109CFU/mL，收集枯草芽孢杆菌发酵液备用。植物乳杆菌制备：用接种环从实验室斜面培养基上挑取一个植物乳杆菌的单菌落，置于装有5mL液体培养基的试管中，37℃，密闭静置培养12h，按照2％的比例接种到装液量90％的三角瓶液体培养基中，静置培养12小时，至活菌数5×109CFU/mL，收集植物乳杆菌发酵液备用。步骤3，准确称取50g的紫花苜蓿粉，放置于500mL锥形瓶中。以步骤2制作的发酵液为发酵菌种，按照菌种体积比组合酵母菌、枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌的其本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种增加苜蓿中皂苷提取量的发酵处理方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，培养基配制；YPD固体培养基配制：蛋白胨2g，葡萄糖2g，酵母膏1g，固体培养基添加琼脂2g，灭菌备用，用于培养酵母菌种；LB固体培养基配制：NaCl1g，蛋白胨1g，酵母膏0.5g，固体培养基添加琼脂粉2g，灭菌备用，用于培养枯草芽孢杆菌菌种；MRS固体培养基配制：葡萄糖2g，乙酸钠0.75g，蛋白胨1.5g，硫酸镁0.03g，牛肉膏1.5g，柠檬酸铵0.2g，酵母膏0.75g，磷酸氢二钾0.2g，固体培养基添加琼脂粉2g，灭菌备用，用于培养植物乳杆菌菌种；步骤2，发酵液体菌种制备；酵母菌制备：用接种环从实验室斜面培养基上挑取一个酿酒酵母的单菌落，置于装有5mL液体培养基的试管中，30℃，200r/min转速下震荡培养培养12h，按照2％的体积比接种到装液量20％的三角瓶液体培养基中，继续摇床培养12h左右，至活菌数1×10

【技术特征摘要】
1.一种增加苜蓿中皂苷提取量的发酵处理方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，培养基配制；YPD固体培养基配制：蛋白胨2g，葡萄糖2g，酵母膏1g，固体培养基添加琼脂2g，灭菌备用，用于培养酵母菌种；LB固体培养基配制：NaCl1g，蛋白胨1g，酵母膏0.5g，固体培养基添加琼脂粉2g，灭菌备用，用于培养枯草芽孢杆菌菌种；MRS固体培养基配制：葡萄糖2g，乙酸钠0.75g，蛋白胨1.5g，硫酸镁0.03g，牛肉膏1.5g，柠檬酸铵0.2g，酵母膏0.75g，磷酸氢二钾0.2g，固体培养基添加琼脂粉2g，灭菌备用，用于培养植物乳杆菌菌种；步骤2，发酵液体菌种制备；酵母菌制备：用接种环从实验室斜面培养基上挑取一个酿酒酵母的单菌落，置于装有5mL液体培养基的试管中，30℃，200r/min转速下震荡培养培养12h，按照2％的体积比接种到装液量20％的三角瓶液体培养基中，继续摇床培养12h左右，至活菌数1×109CFU/mL，收集酵母菌发酵液备用；枯草芽孢杆菌制备：用接种环从实验室斜面培养基上挑取一个枯草芽孢杆菌的单菌落，置于装有5mL液体培养基的试管中，37℃，200r...

【专利技术属性】
技术研发人员：李旺，丁轲，李元晓，曹平华，赵龙妹，
申请(专利权)人：河南科技大学，
类型：发明
国别省市：河南,41