泮托拉唑钠中基因毒性杂质的高灵敏度分析方法技术

本发明专利技术公开了一种泮托拉唑钠中基因毒性杂质2‑氯甲基‑3，4‑二甲氧基吡啶盐酸盐(CMDP)的高灵敏度分析方法。采用高效液相色谱‑质谱联用的分析方法，用碳酸氢铵溶液和乙腈的混合溶液来稀释样品，并以挥发性的碳酸盐溶液和乙腈为流动相，检测限和定量限分别为0.2ppm和0.6ppm，可以更高效地分离并检测出杂质CMDP，具有专属性强、灵敏度高，简单快捷、成本低的优点。

【技术实现步骤摘要】
泮托拉唑钠中基因毒性杂质的高灵敏度分析方法
本专利技术属于药物分析检测
，具体涉及一种泮托拉唑钠中基因毒性杂质的分析方法，更具体地涉及一种用高效液相色谱-质谱联用法对2-氯甲基-3，4-二甲氧基吡啶盐酸盐(CMDP)进行分离和定量测定的方法。
技术介绍
泮托拉唑钠是一种新型质子泵抑制剂，用于治疗胃溃疡、十二指肠溃疡、食道炎等，具有安全可靠，毒副作用小的特点。化合物2-氯甲基-3，4-二甲氧基吡啶盐酸盐(CMDP)是泮托拉唑钠的重要中间体，为基因毒性杂质，必须严格控制其残留。但是，国内外药典均尚未收录该杂质的质量标准。根据欧洲药典管理局(EMEA)发布的《遗传毒性杂质限度指导原则》的规定，按照毒理学担忧阈值(TTC)作为评价大部分遗传毒性杂质的阈值，则遗传毒性杂质摄入量最大限值为1.5ug/天。按照泮托拉唑钠最大剂量240mg/天(40mg/片，3次/天，一次两片)计，该杂质的控制限度为6.25ppm。根据检测要求，检测限一般为控制限度的0.1左右，故检测限应在0.6ppm以下。常规的气相及液相检测方法均无法满足此检测限要求，如现有技术中公开的检测泮托拉唑钠原料或制剂中主成分泮托拉唑或其杂质A-F的方法。另外，泮托拉唑钠和CMDP易发生降解，影响检测结果的准确性，增加了检测的难度。文献Chromatographia(2008)，68(5/6)，481-484公开了用GC-MS和RP-LC检测泮托拉唑钠中CMDP的方法。其中GC-MS方法的检测限为1ppm，RP-LC方法的检测限为3ppm，检测灵敏度差，无法满足检测要求。文献JournalofPharmaceuticalandBiomedicalAnalysis(2012)，70，592-597公开了用LCMS/MS设备，用乙腈/水做稀释剂，恒定比例的乙腈/醋酸铵做洗脱液，检测CMDP的方法。该方法可满足检测要求，但是该方法设备昂贵，操作复杂，不适用于工业化生产。因此，为严格控制CMDP的含量，开发一种灵敏度高、成本低，且易于操作的检测分析方法是亟需解决的难题。
技术实现思路
针对现有技术中存在的缺点与不足，本专利技术的目的是提供一种泮托拉唑钠中基因毒性杂质(CMDP)的高灵敏度分析方法。本申请专利技术人使用高效液相色谱-质谱联用设备，通过对流动相、洗脱方式、质谱等条件反复筛选，探索出了一种满足低检测限要求，且兼顾主成分与杂质分离的检测方法，实现了简便有效地分离和分析CMDP的目的。本专利技术的目的，可通过以下技术方案实现：本专利技术提供一种泮托拉唑钠中基因毒性杂质2-氯甲基-3，4-二甲氧基吡啶盐酸盐的高灵敏度分析方法，其特征在于：泮托拉唑钠样品经稀释剂稀释后，采用高效液相色谱-质谱联用法，用碳酸盐溶液和乙腈为流动相洗脱。在一种优选方案中，所述的碳酸盐溶液为碳酸氢铵溶液或碳酸铵溶液。由于泮托拉唑在酸、强碱、加热等条件下均会被破坏，CMDP在酸性条件下会降解，为保证检测的准确度，需要严格控制稀释剂与流动相的酸碱度。本申请专利技术人对各种碱或盐溶液筛选过程中，发现通过添加碱性缓冲溶液的方式调节稀释剂与流动相的pH时，缓冲溶液配制过程中细微的差别就会对测定结果造成较大差异，故选用单一的碱或盐溶液来调节稀释剂与流动相的pH。经过大量筛选试验后，最终发现采用挥发性的碳酸盐溶液可准确方便地调整pH值至合适的弱碱性，同时能够保证测定过程中样品的稳定性，满足检测要求。在一种优选方案中，所述碳酸盐溶液的浓度为0.01-0.03mol/L，优选0.02mol/L。在一种优选方案中，所述的稀释剂为碳酸氢铵溶液与乙腈的混合溶液，稀释后样品浓度为2mg/mL。在一种优选方案中，稀释剂中碳酸氢铵溶液与乙腈的体积比是5-10∶1，优选9∶1。在一种优选方案中，流动相洗脱的方式为梯度洗脱，洗脱液中碳酸盐的体积含量为20-80％。采用梯度洗脱，通过调节流动相中碳酸盐溶液和乙腈的比例，可提高系统的分离能力，缩短分析时间，使得CMDP与其他组分更好地分离，同时更有效地保证样品的稳定性。在一种优选方案中，所述梯度洗脱的条件为：时间(分钟)碳酸盐溶液(％V/V)乙腈(％V/V)080207554510208010.018020158020在一种优选方案中，流动相的洗脱速率0.8～1.2mL/min，色谱柱的温度为38～42℃。在一种优选方案中，高效液相色谱所用色谱柱为AgilentProshellHPHC18柱，150*4.6mm，2.7μm。在一种优选方案中，所述质谱的离子源的离子化技术为电喷雾离子化技术，喷雾电压为3KV，雾化室压力35psi，干燥气体温度350℃。进一步地，质谱条件如下表所示：与现有技术相比，本专利技术方法取得的有益效果如下：1、本专利技术提供的分析方法可有效检测出泮托拉唑钠基因毒性杂质CMDP，专属性强；2、本专利技术提供的分析方法可对CMDP进行定量分析，满足检测限0.6ppm的要求，灵敏度高；3、本专利技术提供的分析方法操作简单，用时短，减少了样品的分解，检测精确度高；4、本专利技术提供的CMDP的检测分析方法，可提高泮托拉唑钠的质量及用药安全；5、本专利技术提供的CMDP的检测分析方法，对其他可能含有CMDP的药物中基因毒性杂质CMDP的检测提供了很好的借鉴。附图说明图1是实施例1中150301PS批次样品的质谱图；图2是实施例2线性考察中CMDP的线性关系图。具体实施方式下面结合具体实施对本专利技术做进一步的阐述，但这些实施例对本专利技术不构成任何限制。1、仪器：分析天平，型号：SartoriusCPA225D(d＝0.01mg)；BSA224S(d＝0.1mg)；高效液相色谱仪型号为AgilentInfinity1260、色谱柱为AgilentProshellHPHC18，4.6×150mm，2.7um，以十八烷基键合硅胶为填充剂；质谱型号：Agilent6120单四级杆质谱仪。2、试剂：乙腈(色谱纯)，生产商：Fisher碳酸氢铵(色谱纯)，生产商：MREDA水(超纯水)，生产商：屈臣氏2-氯甲基-3，4-二甲氧基吡啶盐酸盐(CMDP)，批号：09514HDV，来源：Sigma，纯度：97％3、样品：泮托拉唑钠，批号：150301PS、150302PS、150303PS、150701PS、150702PS、150703PS。实施例1色谱条件：流动相：0.02mol/L碳酸氢铵溶液为流动相A，乙腈为流动相B；柱温：40℃；流速：1.0mL/min；进样量：10uL；洗脱条件如下表1所示：表11、溶液配制及检测A、供试品溶液的制备：稀释剂：取3.16g碳酸氢铵固体，加水至2L得0.02mol/L的碳酸氢铵溶液，取900mL0.02mol/L碳酸氢铵溶液加100mL乙腈得稀释剂。供试品溶液：取供试品适量(约含泮托拉唑钠20mg)，精密称定，置10mL量瓶中，加稀释剂溶解并定容，摇匀。B、对照品溶液的制备：取CMDP杂质对照品约10mg，精密称定，置10mL量瓶中，加乙腈适量超声使溶解，并用乙腈稀释至刻度；精密量取0.5mL，置50mL量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，再精密量取0.6mL，置50mL量瓶中，加稀释剂至刻度，摇匀，制得浓度约为120ng/mL的溶液，作为CMDP对照品溶液。C、检测方法：分别本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种泮托拉唑钠中基因毒性杂质2‑氯甲基‑3，4‑二甲氧基吡啶盐酸盐的高灵敏度分析方法，其特征在于：泮托拉唑钠样品经稀释剂稀释后，采用高效液相色谱‑质谱联用法，用碳酸盐溶液和乙腈为流动相洗脱。

【技术特征摘要】
1.一种泮托拉唑钠中基因毒性杂质2-氯甲基-3，4-二甲氧基吡啶盐酸盐的高灵敏度分析方法，其特征在于：泮托拉唑钠样品经稀释剂稀释后，采用高效液相色谱-质谱联用法，用碳酸盐溶液和乙腈为流动相洗脱。2.如权利要求1所述的分析方法，其特征在于：所述的碳酸盐溶液为碳酸氢铵溶液或碳酸铵溶液。3.如权利要求2所述的分析方法，其特征在于：所述碳酸盐溶液的浓度为0.01-0.03mol/L，优选0.02mol/L。4.如权利要求1所述的分析方法，其特征在于：所述的稀释剂为碳酸氢铵溶液与乙腈的混合溶液，稀释后样品浓度为2mg/mL。5.如权利要求4所述的分析方法，其特征在于：所述混合溶液中碳酸氢铵溶液与乙腈的体积比是5-10∶1，优选9∶1。6.如权利要求1所述的分析方法，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡方剑，徐莎，毛玮，张昀，周明，
申请(专利权)人：杭州中美华东制药有限公司，杭州华东医药集团新药研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33