一种过氧化氢检测干化学试纸及其制备方法技术

一种过氧化氢检测干化学试纸及其制备方法，属于体外诊断试剂领域，包括浸液A，包括缓冲溶液、稳定剂、络合剂、酶类物质和表面活性剂；浸液B包括3,3’,5,5’‑四甲基联苯胺和无水乙醇；将浸渍干燥机温度主加热设定65～85℃，副加热设定50～60℃，待主机加热温度达到75℃，各干燥室温度≥55℃时开始浸A液，同时将浸渍干燥机的走纸速度设定为11.5～15.5Hz；按上述条件设定干燥温度后浸B液，走速23.0～27.0Hz；经两次浸液的干燥后制成过氧化氢检测干化学试纸。本发明专利技术配制简便、使用方便、易于操作、检测速度快，灵敏度高、特异性好的优势，与类似产品相比操作简单，适宜普及。

【技术实现步骤摘要】
一种过氧化氢检测干化学试纸及其制备方法
本专利技术属于体外诊断试剂
，具体涉及一种过氧化氢检测干化学试纸及其制备方法。
技术介绍
细菌性阴道病是育龄妇女最常见的阴道感染性疾病，细菌性阴道病的致病机制是由于各种原因导致阴道内乳酸杆菌大量减少，阴道分泌物中乳酸含量下降，大量厌氧菌繁殖，产生挥发性有机胺含量增加，同时还伴有阴道加德纳菌类杆菌属及支原体的大量增殖，阴道内正常存在的乳酸杆菌对维持阴道正常菌群起着关键的作用，乳酸杆菌是阴道正常菌群中最重要、数量最多的常住菌。而女性阴道易被各种细菌、真菌和微生物定植。在正常女性阴道中，每毫升的阴道流体中通常含有多于约104个乳酸杆菌，温和的酸性阴道环境有助于防止病原微生物的入侵。然而这种阴道平衡状态很容易地被外界各种因素扰乱，而最终导致阴道感染的发生。女性一生中，年龄以及生理激素的变化影响阴道微生态的构成，阴道上皮的糖原经乳酸杆菌的作用，分解成乳酸使阴道的局部形成弱酸环境(pH＜4.5，一般在3.8～4.4)，可以抑制其他寄生菌的过度生长，其代谢产物乳酸和过氧化氢等物质能保持阴道正常酸性环境，此外，部分乳酸杆菌尚合成过氧化氢，产生的过氧化氢也可抑制其他病原细菌的生长。另一方面，乳酸杆菌形成的酸性环境又有利于减少细菌表面负电荷和去除覆盖于受体表面的糖基和暴露受体而有助于细菌黏附。因此，乳酸杆菌是通过正反两方面调节正常阴道的菌群。阴道和乳酸杆菌形成共生关系，其中阴道上皮细胞以糖原的形式提供维持乳酸杆菌群体的营养，乳酸杆菌菌群提供对其他病原体的防御。具体而言，乳酸杆菌产生酸化阴道的乳酸，以及防止病原体增长的过氧化氢，健康阴道的乳酸杆菌群体能够大量产生杀微生物的化合物，如乳酸、细菌素和过氧化氢。而过氧化氢在阻止阴道中病原体增长中发挥特别重要的作用，乳酸杆菌利用黄素蛋白，将氧转化为过氧化氢。过氧化氢可以抑制细菌、真菌、病毒和哺乳动物细胞，这是由于许多细菌缺乏被称为过氧化氢酶的酶，过氧化氢酶能够分解过氧化氢并保护细菌免受过氧化氢的氧化，大量临床试验证实，单独的过氧化氢或其与引导分泌物中的卤化物和过氧化酶结合时，也可以显示毒性，表现为对HIV1、阴道加德纳菌、拟杆菌属、淋病奈瑟菌和白色念球菌的杀害。除此之外，乳酸杆菌产生过氧化氢，尚可以治疗BV，可提高宿主的免疫水平，克服BV复发作用。阴道分泌物中过氧化氢(H2O2)、白细胞酯酶(LE)、唾液酸酶(SNa)三者作为经典的联合检测，用于对阴道清洁度联合诊断的依据。根据阴道分泌物中所见的上皮细胞、白细胞或脓细胞、阴道杆菌与杂菌的数量进行判断，并划分清洁度为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ度四个等级。Ⅰ、Ⅱ度为正常，Ⅲ、Ⅳ度为不清洁。表1阴道分泌物清洁度分级清洁度阴道杆菌杂菌上皮细胞白细胞(个/HP)Ⅰ度多无或少许满视野0-5Ⅱ度中+1/2视野6-15Ⅲ度少++少许16-30Ⅳ度—++++无或少许>30
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种具有配制和使用简便、检测速度快、灵敏度高、特异性好的过氧化氢检测干化学试纸及其制备方法，主要用作检验阴道清洁度的辅助评判指标。本专利技术为解决技术问题所采用的技术方案如下：本专利技术的一种过氧化氢检测干化学试纸，包括：浸液A，包括缓冲溶液、稳定剂、络合剂、酶类物质和表面活性剂；浸液B，包括反应底物和溶剂，所述反应底物为3,3’,5,5’-四甲基联苯胺，所述溶剂为无水乙醇溶液；滤纸，将滤纸依次经浸液A和浸液B的干燥后制成过氧化氢检测干化学试纸。作为优选的实施方式，所述缓冲溶液为柠檬酸-柠檬酸三钠缓冲液、柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液或磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液。作为优选的实施方式，所述缓冲溶液的pH为4.5～6.5，浓度为0.5～5mol/kg。作为更优选的实施方式，所述缓冲溶液的pH为5.0～5.5，浓度为1～3mol/kg。作为优选的实施方式，所述稳定剂为10～30％(V/V)明胶或10～30％(V/V)阿拉伯胶。作为优选的实施方式，所述络合剂为0.5～3.0mg/mLEDTA。作为优选的实施方式，所述酶类物质为0.2～0.6mg/mL辣根过氧化物酶。作为优选的实施方式，所述表面活性剂为1.0～5.0mg/mL十二烷基硫酸钠或1.0～5.0mg/mL十二烷基苯磺酸钠。作为优选的实施方式，所述滤纸为7218型滤纸、31ET型滤纸、3MM型滤纸、526型滤纸或319型滤纸。作为优选的实施方式，所述3,3’,5,5’-四甲基联苯胺的浓度为0.5～3.0mg/mL。本专利技术的一种过氧化氢检测干化学试纸的制备方法，包括以下步骤：步骤一、浸液A的配制将缓冲溶液、稳定剂、络合剂、酶类物质和表面活性剂混合均匀形成浸液A；步骤二、浸液B的配制将反应底物溶解于无水乙醇溶液中形成浸液B；步骤三、浸液A的干燥将浸渍干燥机的温度主加热设定为65～85℃，副加热设定为50～60℃，待主机加热温度达到75℃，各干燥室温度≥55℃时开始浸液，同时将浸渍干燥机的走纸速度设定为11.5～15.5Hz；步骤四、浸液B的干燥将浸渍干燥机的温度主加热设定为65～85℃，副加热设定为50～60℃，待主机加热温度达到75℃，各干燥室温度≥55℃时开始浸液，同时将浸渍干燥机的走纸速度设定为23.0～27.0Hz；步骤五、经两次浸液的干燥，再经裁切制成过氧化氢检测干化学试纸。作为优选的实施方式，步骤三中，浸渍干燥机的温度主加热设定为70～80℃。作为优选的实施方式，步骤四中，浸渍干燥机的温度主加热设定为70～80℃。本专利技术的有益效果是：本专利技术的过氧化氢检测干化学试纸可作为检验阴道清洁度的辅助评判指标，并结合pH值联合对阴道清洁度进行更为准确划分，H2O2直接由产H2O2的乳酸杆菌分泌，其浓度与乳酸杆菌的数量成正比，直接反应维持阴道正常内生态的乳酸杆菌数量，能直接反应阴道内生态状况。乳酸杆菌在维持阴道自净及抗感染中起着关键作用。它可分解阴道粘膜上皮细胞内的糖原，产生一定量的乳酸，使阴道保持酸性环境。有利于阴道的自净作用。同时它可提高机体的免疫功能，激活巨噬细胞，维持阴道局部的抗感染能力。此外它亦具有防止宫颈阴道上皮化生的作用。唾液酸酶是由阴道菌群中厌氧菌分泌的，其活性与厌氧菌数量成正比，酶活性高反映阴道内厌氧菌过度生长，特异性较好。有部分引发BV的厌氧菌不产生唾液酸酶或产酶量少，造成部分BV漏检。故将唾液酸酶活性与H2O2浓度结合分析作为临床诊断BV的指标，兼顾阴道内产H2O2乳酸杆菌的数量，减少部分造成唾液酸酶假阴性或假阳性的发生，使诊断BV指标更客观。此外有形成分乳酸杆菌与干化学过氧化氢联合辅助检测阴道清洁度，可以有效降低由于医生在采集样本的过程中操作方法所带来的误差，使测试结果之间相互佐证，相辅相成，联合评判，对临床诊断具有重大意义。本专利技术以3,3’,5,5’-四甲基联苯胺为反应底物，阴道微生态环境中存在过氧化氢，在辣根过氧化物酶的水解作用下，释放出新生态氧，底物发生自缩合反应而显色，检测阴道分泌物样本中过氧化氢浓度，呈色深度与浓度成正比。本专利技术的过氧化氢检测干化学试纸配制简便、使用方便、易于操作，检测时不需要显微镜等特殊设备，结合迪瑞GMD-S600全自动妇科分泌物分析系统，在8-10min内即可出结果，具有检测速度快，灵敏度高、特异性好的优势，与类似产品本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种过氧化氢检测干化学试纸，其特征在于，包括：浸液A，包括缓冲溶液、稳定剂、络合剂、酶类物质和表面活性剂；浸液B，包括反应底物和溶剂，所述反应底物为3,3’,5,5’‑四甲基联苯胺，所述溶剂为无水乙醇溶液；滤纸，将滤纸依次经浸液A和浸液B的干燥后制成过氧化氢检测干化学试纸。

【技术特征摘要】
1.一种过氧化氢检测干化学试纸，其特征在于，包括：浸液A，包括缓冲溶液、稳定剂、络合剂、酶类物质和表面活性剂；浸液B，包括反应底物和溶剂，所述反应底物为3,3’,5,5’-四甲基联苯胺，所述溶剂为无水乙醇溶液；滤纸，将滤纸依次经浸液A和浸液B的干燥后制成过氧化氢检测干化学试纸。2.根据权利要求1所述的一种过氧化氢检测干化学试纸，其特征在于，所述缓冲溶液为柠檬酸-柠檬酸三钠缓冲液、柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液或磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液。3.根据权利要求1所述的一种过氧化氢检测干化学试纸，其特征在于，所述缓冲溶液的pH为4.5～6.5，浓度为0.5～5mol/kg。4.根据权利要求1所述的一种过氧化氢检测干化学试纸，其特征在于，所述稳定剂为10～30％(V/V)明胶或10～30％(V/V)阿拉伯胶。5.根据权利要求1所述的一种过氧化氢检测干化学试纸，其特征在于，所述络合剂为0.5～3.0mg/mLEDTA。6.根据权利要求1所述的一种过氧化氢检测干化学试纸，其特征在于，所述酶类物质为0.2～0.6mg/mL辣根过氧化物酶。7.根据权利要求1所述的一种过氧化氢检测干化学试纸，其特征在于，所述表面活性剂为1.0～5.0mg/mL十二烷基硫酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱子是，崔秀丽，孙德亚，林月，何浩会，孙成艳，
申请(专利权)人：迪瑞医疗科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：吉林,22