对植物寄生线虫具有杀线虫活性的黑曲霉F22菌株及其用途制造技术

本发明专利技术包括对植物寄生线虫具有杀线虫活性的黑曲霉(Aspergillus niger)F22菌株；及含有所述菌株、或其孢子、培养体或其培养液作为有效成分的，针对植物寄生线虫的杀线虫用微生物制剂；用于防治植物寄生线虫的方法，包括通过所述微生物制剂处理作物、作物的种子或栽培地的方法；及包括所述菌株培养步骤的针对植物寄生线虫的杀线虫用微生物制剂的制备方法。

Aspergillus Niger F22 strain with nematocidal activity against plant parasitic nematodes and its application

The present invention includes Aspergillus Niger F22 strain with nematocidal activity against plant parasitic nematodes, microbial agents for nematocidal action against plant parasitic nematodes containing the strain, its spores, cultures or its culture medium as effective components, and methods for controlling plant parasitic nematodes, including the treatment of crops and crop species by the microbial agents. A method for seed or cultivation site, and a preparation method of a microbial preparation for nematocidal use against plant parasitic nematodes including the cultivation step of the strain.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】对植物寄生线虫具有杀线虫活性的黑曲霉F22菌株及其用途
本专利技术涉及一种对植物寄生线虫具有杀线虫活性的黑曲霉F22菌株及其用途，更详细来说，本专利技术包括对植物寄生线虫具有杀线虫活性的黑曲霉(Aspergillusniger)F22菌株；及含有所述菌株、或其孢子、培养体或其培养液作为有效成分的，针对植物寄生线虫的杀线虫用微生物制剂；用于防治植物寄生线虫的方法，包括通过所述微生物制剂处理作物、作物的种子或栽培地的方法；及包括所述菌株培养步骤的针对植物寄生线虫的杀线虫用微生物制剂的制备方法。
技术介绍
给韩国主要园艺作物、果蔬类园艺栽培地带来损害的典型线虫为包括根结线虫(root-knotnematode)的植物寄生线虫(plant-parasiticnematode)。特别是温室土壤中的根结线虫对农作物造成严重损害。植物寄生线虫根据破坏模式和寄主，分为根结线虫(Meloidogynespp.)、球异皮线虫(Globoderaspp.)、小麦粒线虫(Anguinaspp.)，茎线虫(Ditylenchusspp.)、滑刃线虫(Aphalenchoidesspp.)、短体线虫(Pratylenchusspp.)、矮化线虫(Tylenchorhychusspp.)、盘旋线虫(Rotylenchulusspp.)等。影响农业的主要根结线虫有红薯根结线虫(Meloidogyneincognita)、胡萝卜根结线虫(Meloidogynehapla)、爪哇根结线虫(Meloidogynejavanica)和花生根结线虫(Meloidogynearenaria)。近年来，为了防治植物寄生线虫，已采用了栽培、物理或化学防治。栽培防治是通过使用新鲜水、荒地、干燥的土壤、深翻、运土、稻轮作栽培、抗病品种等，物理防治是通过热处理(蒸汽、干热、热水浸泡方法)、太阳热消毒等，化学防治是通过使用化学药物如呋喃、噻唑磷(线虫弹)等来实现防治线虫的。由于地域条件和作物的原因，栽培防治费用昂贵或应用有限，尤其抗病品种的应用局限于作物，因此实用性差。虽然化学杀线虫剂对植物寄生线虫具有较高的防治效果，但它们大部分是有机磷或氨基甲酸酯，它残留在土壤中累积时，不仅具有很强的毒性，造成对环境的污染，还由于对土壤中有利于作物生长的有益微生物的无区别杀菌作用，对农作物的损害加重，并逐渐使土壤更加贫瘠。因此，由于使用农药产生环境污染、对生态系统的破坏、对人畜的毒害危险性等问题，以及由于对环保农产品需求的增加，农药的使用已被废止。另外，已普遍用作防治线虫的土壤熏蒸剂甲基溴(Methylbromide)也将因臭氧层耗竭问题被禁止使用。(Cabonietal.(2013)J.Agric.FoodChem.61,1794-1803)。因此，需要开发一种可以取代上述农药的，对环境更加安全的杀线虫剂。近年来，在环保的植物寄生线虫防治方法中，有一种利用微生物的方法。一些研究表明，随着微生物的生长，它们产生各种2次代谢产物，或直接作用于植物病原体，表现出多种抗菌和杀虫活性。(Zhaoetal.(2014)AntagonisticactionofBacillussubtillisstrainSG6onFusariumgraminearum.PLoSone.9(3),e92486)。因此对于多种微生物培养液，通过杀线虫活性的筛选分离菌株，并利用该菌株开发防治植物寄生线虫病的菌株的研究仍在进行中。同时，韩国公开专利第2006-0002789号揭示了“杀线虫剂”，韩国公开专利第2010-0116562号揭示了“贝莱斯芽孢杆菌G341菌株及利用该菌株的植物病防治方法”。然而，目前还没有任何说明如本专利技术揭示对植物寄生线虫具有杀线虫活性的黑曲霉F22菌株及其用途的情况。
技术实现思路
因此，本专利技术的目的是解决上述现有技术存在的问题，本专利技术确认，在61种真菌中，黑曲霉(Aspergillusniger)F22(KCTC12771BP)是不仅在实验室条件下对植物寄生线虫幼虫显示杀线虫活性，甚至在利用番茄作物的温室条件下也显著抑制根结线虫病发病的菌株。另外，本专利技术证实，当制备5种基本剂型即悬浮剂(SC)、悬浮微生物剂(SM)、吸附性颗粒剂(吸附式GR)、造粒式颗粒剂(造粒式GR)和可湿性粉剂(WP)，调查对番茄根结线虫的防治活性时，发现可湿性粉剂有最优秀的防治值。因此，本专利技术人已经证实，本专利技术的菌株可以作为防治植物寄生线虫的生物农药取代化学农药，可提供一个突破性的生物防治剂防止由环境污染引起的问题，基于这些事实，完成本专利技术。为了解决上述课题，本专利技术提供对植物寄生线虫具有杀线虫活性的黑曲霉(Aspergillusniger)F22菌株。同时，本专利技术提供含有所述菌株、或其孢子、培养体或其培养液作为有效成分的，针对植物寄生线虫的杀线虫用微生物制剂。本专利技术还提供用于防治植物寄生线虫的方法，包括通过所述微生物制剂处理作物、作物的种子或栽培地的方法；本专利技术还提供针对植物寄生线虫的杀线虫用微生物制剂的制备方法，包括所述菌株培养步骤。与现有技术相比，本专利技术的有益效果如下：本专利技术中的黑曲霉(Aspergillusniger)F22菌株，不仅在试管内试验(invitro)中而且在番茄根结线虫病的温室内试验中，都以依赖浓度的方式显示杀线虫活性，因此它作为植物寄生线虫防治剂，被认为具有很高的开发可能性。该菌株当被制成可湿性粉剂时，仍显示出优秀的防治效果，若随后经过最佳发酵工艺和制剂优化过程时，可以作为一种新型的微生物杀线虫剂代替传统的化学农药。因此，本专利技术的菌株可作为突破性的生物防治剂防止由环境污染引起的问题，可以非常有效地加以利用。附图说明通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本专利技术的其它特征、目的和优点将会变得更明显：图1显示以各种浓度的本专利技术的入选菌株培养滤液处理时番茄根结线虫(Meloidogyneincognita)的杀线虫活性的图表；图2显示本专利技术的入选菌株用10％浓度的培养滤液处理致死的番茄根结线虫(Meloidogyneincognita)形态的结果，及与无处理区的对比；图3显示了本专利技术中的入选菌株利用ITS区(A)和26sRNA(B)序列的系统进化分析位置；图4显示本专利技术的黑曲霉(Aspergillusniger)F22菌株在不同培养基中显示出的杀线虫活性图表；图5是利用本专利技术的黑曲霉F22菌株培养滤液进行处理时，盆栽实验后，显示出的番茄根结线虫病的防治活性图表；图6显示了用本专利技术的黑曲霉F22菌株培养滤液10倍稀释液处理后的番茄植物根系形态与无处理区进行比较的结果；图7显示利用本专利技术的黑曲霉F22菌株培养液的基本剂型对番茄根结线虫的防治值图表；图8显示本专利技术的黑曲霉F22菌株可湿性粉剂的100倍和50倍稀释溶液处理区的番茄植物根系形态与无处理区及阿维菌素(Abamectin,全明星)3000倍稀释溶液处理区进行比较的结果；图9显示黑曲霉F22菌株培养滤液浓度对胡萝卜根结线虫和松材线虫的杀线虫率。具体实施方式以下本专利技术的详细说明，通过本专利技术可以付诸实践的特定实施例来阐述，通过充分详细地说明，使得本行业的人能够将本专利技术付诸实施。本专利技术的各种实施例应当被理解为可以彼此不同，但彼此本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种对植物寄生线虫具有杀线虫活性的黑曲霉F22菌株。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.04.06 KR 10-2015-00485711.一种对植物寄生线虫具有杀线虫活性的黑曲霉F22菌株。2.根据权利要求第1项所述的黑曲霉F22菌株，其特征在于，所述黑曲霉F22菌株是以收录编号为KCTC12771BP的菌株。3.根据权利要求第1项所述的黑曲霉F22菌株，其特征在于，所述植物寄生线虫是松材线虫或根结线虫。4.根据权利要求第3项所述的黑曲霉F22菌株，其特征在于，，所述根结线虫可以选自红薯根结线虫、胡萝卜根结线虫、爪哇根结线虫、花生根结线虫和番茄根结线虫中的一个或多个。5.一种针对植物寄生线虫的杀线虫用微生物制剂，其特征在于，含有权利要求第1项到第4项中任何一项...

【专利技术属性】
技术研发人员：金镇铁，金宪，辛基善，张子英，崔京子，崔溶镐，张庆秀，金美芳，
申请(专利权)人：全南大学校产学协力团，韩国化学研究院，韩国生命工学研究院，
类型：发明
国别省市：韩国,KR