耐高温糙皮侧耳菌及其筛选方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种耐高温糙皮侧耳菌及其筛选方法和应用，该耐高温糙皮侧耳菌保藏号为CGMCC：16378，具有较好的耐高温能力，在30‑35℃下培养生长良好。耐高温糙皮侧耳菌的发酵液中含有丰富的多糖，这些多糖对.OH自由基和O2

High Temperature Resistant Pleurotus ostreatus and Its Screening Method and Application

The invention discloses a high temperature resistant Pleurotus ostreatus and its screening method and application. The preservation number of Pleurotus ostreatus is CGMCC:16378, which has good high temperature resistance and grows well at 30 35 C. The fermentation broth of Pleurotus ostreatus is rich in polysaccharides. These polysaccharides are rich in. OH free radicals and O 2.

【技术实现步骤摘要】
耐高温糙皮侧耳菌及其筛选方法和应用
本专利技术属于糙皮侧耳
，具体来说涉及一种耐高温糙皮侧耳菌及其筛选方法和应用。
技术介绍
糙皮侧耳菌(Pleurotusostreatus)，属担子菌亚门，侧耳科侧耳属，在我国广泛分布于河北、山东、山西、湖南、湖北、黑龙江、辽宁、四川、贵州等地区，是一种食用菌。糙皮侧耳菌子实体肉质肥嫩，味道鲜美，营养丰富，是一种高蛋白、低脂肪的食品。糙皮侧耳菌不仅营养价值高，而且具有一定的食疗价值，糙皮侧耳菌子实体能够降低血脂和胆固醇，其多糖不仅有抗肿瘤活性，还可以清除自由基，起到抗氧化作用。目前，一些地区(如湖南、四川等)由于夏季温度过高，缺乏优良的高温型糙皮侧耳菌菌种，导致夏季市场上糙皮侧耳菌数量紧缺，且品质不好，因此，高温型糙皮侧耳菌株的筛选具有一定的研究价值。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种耐高温糙皮侧耳菌。本专利技术的另一目的是提供一种耐高温糙皮侧耳菌的筛选方法。本专利技术的另一目的是提供一种耐高温糙皮侧耳菌的出菇方法。本专利技术的另一目的是提供一种耐高温糙皮侧耳菌的发酵方法。本专利技术的另一目的是提供一种耐高温糙皮侧耳菌获得胞外粗多糖的方法。本专利技术的另一目的是提供一种耐高温糙皮侧耳菌获得的胞外粗多糖在清除O2-.自由基中的应用。本专利技术的另一目的是提供一种耐高温糙皮侧耳菌获得的胞外粗多糖在清除.OH自由基中的应用。本专利技术的目的是通过下述技术方案予以实现的。一种耐高温糙皮侧耳菌，该耐高温糙皮侧耳菌于2018年10月18日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏号为CGMCC：16378，分类命名为糙皮侧耳Pleurotusostreatus。在上述技术方案中，将耐高温糙皮侧耳菌的1片菌丝体放置在PDA培养基上，于30-35℃黑暗条件下生长10-15天，形成的菌落直径为78～82mm，菌丝呈白色，气生菌丝背面呈浅褐色。上述耐高温糙皮侧耳菌的筛选方法，包括以下步骤：步骤1之前，将平菇切成小块组织，得到多块蘑菇组织；所述蘑菇组织的体积为0.3-0.6cm3。在将平菇切成小块组织之前，对所述平菇进行表面消毒，所述表面消毒的方法为：用体积浓度为70-75％的乙醇水溶液浸泡90-120s，再用无菌水冲洗4-5遍。步骤1，将平菇的蘑菇组织放置于筛选培养基上，再将所述筛选培养基于25-28℃恒温培养5-8天，使蘑菇组织长出菌丝，当形成直径1-1.5cm的菌落时，从所述菌落的边缘挑取菌丝，用液态的PDA培养基进行倍比稀释，得到第一稀释液，取所述第一稀释液涂布在筛选培养基上，25-28℃恒温培养至形成直径0.5-1cm的菌落，再进行纯培养，纯培养后获得纯化后菌株的菌落；在所述步骤1中，所述筛选培养基为PDA培养基。在所述步骤1中，当蘑菇组织放置于筛选培养基上时，所述蘑菇组织的切面面向所述筛选培养基。在所述步骤1中，所述纯培养的方法为重复以下步骤4～5次：从菌落的边缘挑取菌丝，用液态的PDA培养基倍比稀释2、4、8和16倍，得到第二稀释液，取0.5-1mL第二稀释液涂布在筛选培养基上，25-28℃恒温培养至形成直径0.5-1cm的菌落。步骤2，耐高温菌株的初筛对每株纯化后菌株的菌落进行如下操作：从所述纯化后菌株的菌落中取菌块并接种到培养基上，25-28℃恒温培养10-15天形成第一菌落，在所述第一菌落上取多个菌块，将从所述第一菌落上取到的菌块各接种到1个筛选培养基上并分别置于32℃以上、38℃以下的温度恒温培养，挑选在培养14天后菌落直径超过4cm的菌株作为初筛菌株；在所述步骤2中，在所述第一菌落上取多个菌块的方法为：以所述第一菌落的接种点为中心，在半径为2cm的圆周上取4～8个菌块；步骤3，耐高温菌株的复筛对每株初筛菌株进行以下操作：在该株初筛菌株上取菌块后接种到培养基上，25-28℃恒温培养10-15天形成第二菌落，在所述第二菌落上取菌块；将第二菌落取得的菌块接种至培养基并在40℃培养6小时；再置于25-28℃恢复培养7-10天，测量菌落直径，当菌落仍生长时该菌株为耐高温糙皮侧耳菌。在上述技术方案中，所述筛选培养基为PDA培养基，所述培养基为PDA培养基。在上述技术方案中，所述PDA培养基制备方法为：将180-220质量份数的马铃薯块与950-980体积份数的水混合，加热至沸腾并维持沸腾20-30min，趁热过滤，滤渣弃取，获得滤液，在滤液中加入15-25质量份数的葡萄糖和20-25质量份数的琼脂，加热融化后定容至1000体积份数，pH值自然。在上述技术方案中，当体积份数的单位为mL时，质量份数的单位为g。上述耐高温糙皮侧耳菌的出菇方法，包括以下步骤：将耐高温糙皮侧耳菌接种至出菇培养基上，于30-35℃培养20-28天。在上述技术方案中，所述出菇培养基的制备方法为：将玉米芯、棉籽壳、木屑、麦麸、豆饼粉和水混拌均匀后发酵10-15天，得到所述出菇培养基，灭菌后使用，其中，每100g出菇培养基由30-60g玉米芯、15-25g棉籽壳、15-25g木屑、5-15g麦麸、2-8g豆饼粉和65-70g水配制而成。上述耐高温糙皮侧耳菌的发酵方法，包括以下步骤：a)无菌条件下，取耐高温糙皮侧耳菌的菌丝体接种至种子培养基上，于30-35℃恒温且湿度自然的摇床中培养96-120h，得到种液；b)无菌条件下，按2-7％的接种量将步骤a)所得种液接种到发酵培养基上，于28-32℃恒温且湿度自然的摇床中培养10-15天，得到发酵液。在上述技术方案中，所述摇床的转速为150-190rpm/min，所述湿度自然为相对湿度30-60％。在上述技术方案中，所述种子培养基的制备方法：将5-15质量份数的麸皮和10-30质量份数的豆饼粉混合，用定容溶液定容至1000体积份数，灭菌后使用，其中，所述定容溶液为水、磷酸二氢钾和七水硫酸镁的混合溶液，所述定容溶液中磷酸二氢钾的浓度为1.5-4.5g/L，七水硫酸镁的浓度为0.5-2.5g/L，当体积份数的单位为mL时，质量份数的单位为g。在上述技术方案中，所述发酵培养基的制备方法：将25-60质量份数的麦芽糊精、10-25质量份数的甘油、40-60质量份数的酵母蛋白胨、1.5-4.5质量份数的磷酸二氢钾、0.5-2.5质量份数的七水硫酸镁、1-3质量份数的磷酸二氢铵、0.3-1.5质量份数的半胱氨酸、1.5-3.5质量份数的蛋氨酸和0.00005-0.001质量份数的维生素B1混匀，用去离子水定容至1000体积份数，灭菌后使用。在上述技术方案中，所述发酵液中胞外粗多糖的含量为3g/L，总糖含量为2.4g/L。所述耐高温糙皮侧耳菌获得胞外粗多糖的方法，包括以下步骤：将所述发酵液离心10-20min，弃沉淀，将上层清液加入等体积无水乙醇，在22-27℃下醇析16-24h，过滤收集沉淀为胞外粗多糖。在上述技术方案中，离心速度为3000-6000rmp/min。由所述耐高温糙皮侧耳菌获得的胞外粗多糖在清除O2-.自由基中的应用。在上述技术方案中，将所述胞外粗多糖与水混合，配置成多糖水溶液，当多糖水溶液中胞外粗多糖质量浓度达到0.45mg/mL时，O2-.清除率为(31.53±1.89)％。由所述耐高温糙皮侧耳菌获得的胞外粗多糖在清除.OH自本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种耐高温糙皮侧耳菌，其特征在于，保藏号为CGMCC：16378。

【技术特征摘要】
1.一种耐高温糙皮侧耳菌，其特征在于，保藏号为CGMCC：16378。2.如权利要求1所述耐高温糙皮侧耳菌的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，将平菇的蘑菇组织放置于筛选培养基上，再将所述筛选培养基于25-28℃恒温培养5-8天，使蘑菇组织长出菌丝，当形成直径1-1.5cm的菌落时，从所述菌落的边缘挑取菌丝，用液态的PDA培养基进行倍比稀释，得到第一稀释液，取所述第一稀释液涂布在筛选培养基上，25-28℃恒温培养至形成直径0.5-1cm的菌落，再进行纯培养，纯培养后获得纯化后菌株的菌落；步骤2，耐高温菌株的初筛对每株纯化后菌株的菌落进行如下操作：从所述纯化后菌株的菌落中取菌块并接种到培养基上，25-28℃恒温培养10-15天形成第一菌落，在所述第一菌落上取多个菌块，将从所述第一菌落上取到的菌块各接种到1个筛选培养基上并分别置于32℃以上、38℃以下的温度恒温培养，挑选在培养14天后菌落直径超过4cm的菌株作为初筛菌株；步骤3，耐高温菌株的复筛对每株初筛菌株进行以下操作：在该株初筛菌株上取菌块后接种到培养基上，25-28℃恒温培养10-15天形成第二菌落，在所述第二菌落上取菌块；将第二菌落取得的菌块接种至培养基并在40℃培养6小时；再置于25-28℃恢复培养7-10天，当菌落仍能生长时该菌株为耐高温糙皮侧耳菌。3.根据权利要求2所述的筛选方法，其特征在于，步骤1之前，将平菇切成小块组织，得到多块蘑菇组织；所述蘑菇组织的体积为0.3-0.6cm3；在将平菇切成小块组织之前，对所述平菇进行表面消毒，所述表面消毒的方法为：用体积浓度为70-75％的乙醇水溶液浸泡90-120s，再用无菌水冲洗4-5遍；在所述步骤1中，所述筛选培养基为PDA培养基；在所述步骤1中，当蘑菇组织放置于筛选培养基上时，所述蘑菇组织的切面面向所述筛选培养基；在所述步骤1中，所述纯培养的方法为重复以下步骤4～5次：从菌落的边缘挑取菌丝，用液态的PDA培养基倍比稀释2、4、8和16倍，得到第二稀释液，取0.5-1mL第二稀释液涂布在筛选培养基上，25-28℃恒温培养至形成直径0...

【专利技术属性】
技术研发人员：孟昭晖，
申请(专利权)人：澳门荣世联商贸一人有限公司，
类型：发明
国别省市：中国澳门,82