一种测定L-脯氨酰胺合成工艺杂质或其结构类似物对照品含量的方法技术

本发明专利技术公开了一种测定L‑脯氨酰胺合成工艺杂质或其结构类似物对照品含量的方法，首先选定溶剂以及内标物，定量峰；设定优化的核磁共振分析的波谱仪参数，在该参数下测定八氢‑4H‑二吡咯并[1,2‑b:2’,1’‑g][1,2,5]三氮杂卓‑4,6(5H)‑二酮或其结构类似物样品和内标物中各定量目标峰的积分面积从而计算出含量；本发明专利技术的测定方法是在对照品量比较少的情况下进行赋值的一种行之有效的方法；且针对无现成标品的测定对象来说具有可行性，且与传统的质量平衡法相比，除了消耗样品量低至4mg之外，更加的简单、快速；本发明专利技术的测定方法为八氢‑4H‑二吡咯并[1,2‑b:2’,1’‑g][1,2,5]三氮杂卓‑4,6(5H)‑二酮及其结构类似物提供了一个简单、可靠的定量方法。

A method for determination of impurities in the synthesis of L-prolamine or reference substances of its structural analogues

The invention discloses a method for determining the content of impurities in the synthesis process of L prolamine or reference substances of its structural analogues. Firstly, solvents and internal standard substances are selected, and quantitative peaks are determined. Optimized parameters of NMR spectrometer are set to determine octahydro 4H dipyrrolide [1,2_b:2', 1'g] [1,2,5] triazole 4,6(5H)dione or its structural analogues. Compared with the integral area of each quantitative target peak in the internal standard, the determination method of the present invention is an effective method for assigning values when the quantity of the reference product is relatively small, and is feasible for the determination object without ready-made standard, and is simpler and faster than the traditional mass balance method except that the sample consumption is as low as 4 mg. The determination method of the present invention provides a simple and reliable quantitative method for octahydro 4H

【技术实现步骤摘要】
一种测定L-脯氨酰胺合成工艺杂质或其结构类似物对照品含量的方法
本专利技术涉及分析测定
，尤其涉及一种测定L-脯氨酰胺合成工艺杂质或其结构类似物对照品含量的方法。
技术介绍
L-脯氨酰胺，是合成多肽和手性药物的一个重要中间体，也作为不对称催化合成反应的手性配体，用于Robinson幻化反应和Aldol反应等，同时也是一种保健品原料，L-脯氨酰胺是合成治疗2型糖尿病维他列汀和抗癌药LeuprolideAcetate的原料；其工业化合成的研究意义非凡，但是在L-脯氨酰胺的合成工艺中，反应时间较长，整个反应会生产过多副产物，亦即杂质，而杂质控制是药品质量控制的核心内容之一，药品在临床使用中产生的不良反应往往与产品中的杂质有关，因此杂质研究及控制是药品安全保证的关键要素。法规规定，超过质控限度的杂质都需要定入质量标准并控制限度。随之而来的就是我们要获得赋值的杂质对照品。杂质分为已知杂质和未知杂质。已知杂质通常都有市售标准品，但是对于未知杂质，我们通常采用的方法是先鉴定再合成然后标化赋值。药物分析中对杂质对照品的标化通常采用质量平衡法，即含量＝色谱纯度×(1-溶剂残留％-水分％-残渣％)，对于大部分量合成比较简单，得率高的对照品来说，此法比较适合，现在各国药典的对照品的标化均采用此法。而对于合成工艺路线复杂、得率低、价值昂贵的杂质，无法采用样品消耗量巨大的传统的质量平衡法和化学滴定法，传统的质量平衡法消耗通常在2g以上，而且要采用多种手段(HPLC、GC、水分测定、炽灼残渣)综合评估才能得出结果，不仅耗费样品量大而且耗时耗力。退而求其次，通常企业会采取纯度代替含量进行赋值的方法，结果的准确性是无法保证的。八氢-4H-二吡咯并[1,2-b:2’,1’-g][1,2,5]三氮杂卓-4,6(5H)-二酮为L脯氨酰胺合成过程中产生的工艺杂质，即为合成工艺路线较为复杂的杂质，作为维达列汀的原料药中间体，其杂质需要做充分研究。以下简称杂质A，如果采用传统的质量平衡法来进行定量，对照品消耗巨大，样品量无法满足要求。如果我们能从其他的方向入手，例如从核磁原理出发，采用氢核磁法定量法进行该杂质的分析，将会解决上述问题。
技术实现思路
专利技术目的：为了克服现有技术中存在的问题，本专利技术提出了一种测定L-脯氨酰胺合成工艺杂质或其结构类似物对照品含量的方法；提供了一种在对照品量较少的情况下有效简单快速的杂质分析测定方法，下限可以测定到4mg。技术方案：为了解决上述技术问题，本专利技术所采用的技术方案为：一种测定L-脯氨酰胺合成工艺杂质或其结构类似物对照品含量的方法，包括如下步骤：(1)首先通过测定L-脯氨酰胺合成工艺杂质八氢-4H-二吡咯并[1,2-b:2’,1’-g][1,2,5]三氮杂卓-4,6(5H)-二酮或其结构类似物以及不同内标物在不同溶剂中的核磁共振氢谱，根据氢谱出峰情况选定溶剂以及内标物，将八氢-4H-二吡咯并[1,2-b:2’,1’-g][1,2,5]三氮杂卓-4,6(5H)-二酮以下简称杂质A；(2)根据杂质A或其结构类似物以及内标物在选定的溶剂中核磁共振氢谱的出峰情况，选定定量峰；(3)采用质子反转-恢复技术确定弛豫时间为20s；设定核磁共振分析的波谱仪参数为：脉冲序列：zg30，谱宽：5000Hz，中心频率：2100Hz，采样点数：64K，弛豫延迟时间：20s，采样次数：32次，空扫次数：4次；(4)在步骤(3)设定的参数下测定杂质A或其结构类似物样品和内标物中各定量目标峰的积分面积，计算出杂质A或其结构类似物的含量。更为优选的，步骤(1)中所述核磁共振分析的波谱仪参数为：脉冲序列：zg30，谱宽：5000Hz，中心频率：2100Hz，采样点数：64K，弛豫延迟时间：20s，采样次数：32次，空扫次数：4次。更为优选的，所述杂质A具体来源于L-脯氨酰胺合成工艺L-脯氨酰胺进一步缩合而成；其化学结构为：更为优选的，步骤(1)中溶剂选择二甲基亚砜-d6、CDCl3中的一种。更为优选的，步骤(1)中溶剂选择二甲基亚砜-d6。更为优选的，步骤(1)中内标物选择马来酸、对苯二甲酸甲酯中的一种。更为优选的，步骤(1)中内标物选择马来酸。更为优选的，步骤(4)中所述杂质A或其结构类似物的样品选取量下限为4mg。更为优选的，步骤(4)中计算方法如下：A％＝[(As/ns)×Ms×mr]/[(Ar/nr)×Mr×ms]×Wr；其中，A％为杂质A或其结构类似物的含量；As为杂质A或其结构类似物定量峰的积分面积；ns为杂质A或其结构类似物定量峰代表的氢个数；Ms为杂质A或其结构类似物相对分子质量；Ar为内标物定量峰的积分面积；nr为内标物定量峰代表的氢个数；Mr为内标物相对分子质量；mr为内标物质量；Wr为内标物质量分数；ms为杂质A质量。本专利技术的原理：氢核磁法定量法的优点在于在核磁中对于确定的核，其信号强度仅与产生该信号的核的数据成正比，而与核的化学性质没有关系。在此原理的指导下，我们只要能够找到一个适当的已知确切含量的内标物就可以进行定量实验。定量时，一般只对该化合物中某一指定基团上质子引起的峰面积与内标中某一指定质子引起的峰面积进行比较，即可求出其绝对含量，不受样品中水分、残留溶剂的干扰。有益效果：本专利技术提供的一种测定L-脯氨酰胺合成工艺杂质或其结构类似物对照品含量的方法，首先选定溶剂以及内标物，定量峰；设定优化的核磁共振分析的波谱仪参数，在该参数下测定杂质A或其结构类似物样品和内标物中各定量目标峰的积分面积从而计算出杂质A的含量；本专利技术的测定方法是在对照品量比较少的情况下进行赋值的一种行之有效的方法；且针对无现成标品的测定对象来说具有可行性，且与传统的质量平衡法相比，除了消耗样品量低至4mg之外，更加的简单、快速；本专利技术的测定方法为杂质A及其结构类似物提供了一个简单、可靠的定量方法。附图说明：图1为本专利技术实施例1杂质A在溶剂二甲基亚砜-d6中的氢核磁共振谱图；图2为本专利技术实施例1内标物马来酸在溶剂二甲基亚砜-d6中的氢核磁共振谱图；图3为本专利技术实施例1杂质A与内标物马来酸的混合溶液在溶剂二甲基亚砜-d6中的氢核磁共振谱图；图4为本专利技术实施例1进行杂质A定量分析时在溶剂二甲基亚砜-d6中的氢核磁共振谱图；图5为杂质A进行线性测试试验时的标准曲线示意图。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步的详细说明：实施例1：1)实验仪器：BrukerAvanceIIIHD400M核磁共振波谱仪，MettlerXP6型分析天平。2)药品：八氢-4H-二吡咯并[1,2-b:2’,1’-g][1,2,5]三氮杂卓-4,6(5H)-二酮为自制L-脯氨酰胺合成工艺中产生的杂质，具体结构为以下简称杂质A；二甲基亚砜-d6(溶剂)，马来酸对照品(内标物)；3)测试方法：(1)首先设置核磁共振波谱仪的参数为：脉冲序列：zg30，谱宽：5000Hz，中心频率：2100Hz，采样点数：64K，弛豫延迟时间：20s，采样次数：32次，空扫次数：4次；精密称取43.720mg内标物马来酸，置10mL容量瓶中，用二甲基亚砜-d6定容，摇匀，作为内标溶液；精密称定杂质A8.00mg，精密量取上述内标溶液1mL，溶解并定容作为待测溶液；进行氢核磁共振，谱图如图1所本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种测定L‑脯氨酰胺合成工艺杂质或其结构类似物对照品含量的方法，其特征在于包括如下步骤：(1)首先通过测定L‑脯氨酰胺合成工艺杂质八氢‑4H‑二吡咯并[1,2‑b:2’,1’‑g][1,2,5]三氮杂卓‑4,6(5H)‑二酮或其结构类似物以及不同内标物在不同溶剂中的核磁共振氢谱，根据氢谱出峰情况选定溶剂以及内标物，将八氢‑4H‑二吡咯并[1,2‑b:2’,1’‑g][1,2,5]三氮杂卓‑4,6(5H)‑二酮以下简称杂质A；(2)根据杂质A或其结构类似物以及内标物在选定的溶剂中核磁共振氢谱的出峰情况，选定定量峰；(3)采用质子反转‑恢复技术确定并设定核磁共振分析的波谱仪参数；(4)在步骤(3)设定的参数下测定杂质A或其结构类似物样品和内标物中各定量目标峰的积分面积，计算出杂质A或其结构类似物的含量。

【技术特征摘要】
1.一种测定L-脯氨酰胺合成工艺杂质或其结构类似物对照品含量的方法，其特征在于包括如下步骤：(1)首先通过测定L-脯氨酰胺合成工艺杂质八氢-4H-二吡咯并[1,2-b:2’,1’-g][1,2,5]三氮杂卓-4,6(5H)-二酮或其结构类似物以及不同内标物在不同溶剂中的核磁共振氢谱，根据氢谱出峰情况选定溶剂以及内标物，将八氢-4H-二吡咯并[1,2-b:2’,1’-g][1,2,5]三氮杂卓-4,6(5H)-二酮以下简称杂质A；(2)根据杂质A或其结构类似物以及内标物在选定的溶剂中核磁共振氢谱的出峰情况，选定定量峰；(3)采用质子反转-恢复技术确定并设定核磁共振分析的波谱仪参数；(4)在步骤(3)设定的参数下测定杂质A或其结构类似物样品和内标物中各定量目标峰的积分面积，计算出杂质A或其结构类似物的含量。2.根据权利要求1所述的测定L-脯氨酰胺合成工艺杂质或其结构类似物对照品含量的方法，其特征在于：步骤(1)以及步骤(3)中所述核磁共振分析的波谱仪参数为：脉冲序列：zg30，谱宽：5000Hz，中心频率：2100Hz，采样点数：64K，弛豫延迟时间：20s，采样次数：32次，空扫次数：4次。3.根据权利要求1所述的测定L-脯氨酰胺合成工艺杂质或其结构类似物对照品含量的方法，其特征在于：所述杂质A具体来源于L-脯氨酰胺合成工艺L-脯氨酰胺进一步缩合而成；其化学结构为：4.根据权利要求1所述的测...

【专利技术属性】
技术研发人员：项伟，程润，
申请(专利权)人：南京江北新区生物医药公共服务平台有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32