一种A型口蹄疫病毒的可视化快速检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术提供了一种A型口蹄疫病毒的可视化快速检测试剂盒及其制备方法，属于病毒检测技术领域。A型口蹄疫病毒的可视化快速检测试剂盒，包括包被酶标板、洗涤液、血清稀释液、底物显色液、酶标二抗、终止液、阳性标准品和阴性标准品，所述包被酶标板中包被有A型口蹄疫病毒抗体；所述A型口蹄疫病毒抗体的稀释倍数为1:1000～2000。所述试剂盒能实现在室温下可视化检测，具有操作简便、快速的特点，适合于在实验外环境中检测，为A型口蹄疫病毒的快速检测提供可靠的技术手段。所述可视化快速检测试剂盒在A型口蹄疫诊断中的应用。

A Visual Rapid Detection Kit for Foot and Mouth Disease Virus Type A and Its Preparation Method

The invention provides a visual rapid detection kit for foot-and-mouth disease virus type A and a preparation method thereof, belonging to the technical field of virus detection. Visual rapid detection kit for foot-and-mouth disease virus type A includes coated enzyme plate, washing liquid, serum diluent, substrate chromogenic liquid, enzyme-labeled second antibody, termination liquid, positive standard and negative standard. The coated enzyme plate contains antibodies against foot-and-mouth disease virus type A; the dilution multiples of antibodies against foot-and-mouth disease virus type A are 1:1000-2000. The kit can realize visual detection at room temperature, and has the characteristics of simple and fast operation. It is suitable for detection in the environment outside the experiment, and provides a reliable technical means for rapid detection of foot and mouth disease virus type A. The application of the visual rapid detection kit in the diagnosis of foot-and-mouth disease type A.

【技术实现步骤摘要】
一种A型口蹄疫病毒的可视化快速检测试剂盒及其制备方法
本专利技术属于病毒检测
，具体涉及一种A型口蹄疫病毒的可视化快速检测试剂盒及其制备方法。
技术介绍
口蹄疫是一种由口蹄疫病毒(FMDV)所致的急性的、热性的、高度接触性传染病，主要侵害偶蹄兽，经常在羊、牛、猪等动物中传播。发病时易感动物的唇和蹄部出现水疱，同时伴有发烧、食欲不振等症状，患病动物体重和产奶量大幅下降。口蹄疫病毒易通过空气传播，传染性强，流行快速，易感动物在抵抗力较弱的情况下也会导致死亡，给养殖户造成巨大的经济损失，严重阻碍了养殖业的发展。目前对于A型口蹄疫病毒的诊断只能在实验室内完成，因为检测过程需依赖大型检测仪器得到检测结果，同时检测方法繁琐，对操作人员要求较高，不能满足基层对A型口蹄疫病毒的快速、简便的要求。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种A型口蹄疫病毒的可视化快速检测试剂盒及其制备方法，所述检测试剂盒能够通过肉眼观察得到A型口蹄疫病毒是否存在的检测结果，实现快速简便的要求。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种A型口蹄疫病毒的可视化快速检测试剂盒，包括包被酶标板、洗涤液、血清稀释液、底物显色液、酶标二抗、终止液、阳性标准品和阴性标准品，所述包被酶标板中包被有A型口蹄疫病毒抗体；所述A型口蹄疫病毒抗体的稀释倍数为1:1000～2000。优选的，所述洗涤液为含体积浓度0.01％～0.05％吐温-20的1mol/L的磷酸盐缓冲液；所述洗涤液的pH值为7.2。优选的，所述血清稀释液含质量浓度为40～50g/L脱脂奶粉的1mol/L磷酸盐缓冲液。优选的，所述底物显色液为含有体积浓度1％～2％过氧化氢的1mol/L四甲基联苯胺溶液。优选的，所述终止液为质量浓度1％的十二烷基硫酸钠(SDS)水溶液。优选的，所述酶标二抗的稀释倍数为1：20000～30000。本专利技术提供了所述可视化快速检测试剂盒的制备方法，包括包被酶标板的制备方法；所述包被酶标板的制备方法，包括以下步骤：1)将A型口蹄疫病毒抗体稀释后得到抗体稀释液；2)将抗体稀释液加入酶标板中的每个孔中，在20～25℃条件下进行一次孵育1～2h；3)将一次孵育后的酶标板洗涤3～4次，加入封闭液封闭，在20～25℃条件进行二次孵育20min；4)将二次孵育的酶标板洗涤3～4次，晾干，得到包被酶标板。优选的，所述抗体稀释液加入酶标板中的每个孔中的体积为100μl。优选的，所述封闭液为质量浓度1～2％的小牛血清蛋白水溶液；所述封闭液的添加体积为100μl/孔。本专利技术提供了一种A型口蹄疫病毒的可视化快速检测试剂盒，包括包被酶标板、洗涤液、血清稀释液、底物显色液、酶标二抗、终止液、阳性标准品和阴性标准品，所述包被酶标板中包被有A型口蹄疫病毒抗体；所述A型口蹄疫病毒抗体的稀释倍数为1:1000～2000。本专利技术提供的试剂盒，具有高效和重复性良好的优点，能实现在室温下可视化检测，不依赖于实验大型检测仪器，具有操作简便、快速的特点，适合于在实验外环境中检测，为A型口蹄疫病毒的快速检测提供可靠的技术手段。同时本专利技术提供的可视化快速检测试剂盒成本低廉，适合多种检测条件的推广。附图说明图1是本专利技术实施例1提供的A型口蹄疫病毒阴阳性血清可视化检测图，其中从左到右依次为1～8，1-6和8阳性血清检测结果呈蓝色，7是阴性血清检测结果呈无色；图2为检测样品的检测结果，其中2和8为阳性对照显色结果；1和3-7为阴性对照显色结果。具体实施方式本专利技术提供了一种A型口蹄疫病毒的可视化快速检测试剂盒，包括包被酶标板、洗涤液、血清稀释液、底物显色液、酶标二抗、终止液、阳性标准品和阴性标准品，所述包被酶标板中包被有A型口蹄疫病毒抗体；所述A型口蹄疫病毒抗体的稀释倍数为1:1000～2000。本专利技术提供的试剂盒包括包被酶标板。在本专利技术中，所述包被酶标板中的酶标板优选为透明酶标板。所述酶标板的规格优选为96孔。本专利技术对所述酶标板的来源没有特殊限制，采用本领域所熟知商品酶标板即可。所述A型口蹄疫病毒抗体的来源优选为口蹄疫感染动物所得抗血清。所述A型口蹄疫病毒抗血清的制备方法，优选包括以下步骤：用0.1mgA型口蹄疫病毒146s首次免疫动物，14d后，用0.1mgA型口蹄疫病毒146s第二次免疫动物，28d后，收集动物血清，得到A型口蹄疫病毒抗血清。本专利技术提供的试剂盒包括洗涤液。在本专利技术中，所述洗涤液优选为含体积浓度0.01％～0.05％吐温-20的1mol/L的磷酸盐缓冲液，更优选为含体积浓度0.02％～0.04％吐温-20的1mol/L的磷酸盐缓冲液，最优选为含体积浓度0.03％吐温-20的1mol/L的磷酸盐缓冲液。所述洗涤液的pH值为7.2。本专利技术对所述洗涤液的配制方法没有特殊限制，采用本领域所熟知的洗涤液的配制方案即可。本专利技术对所述吐温-20和磷酸盐的来源没有特殊限制，采用本领域所熟知的吐温-20和磷酸盐商品即可。本专利技术提供的试剂盒包括血清稀释液。在本专利技术中，所述血清稀释液为含质量浓度为40～50g/L脱脂奶粉的1mol/L磷酸盐缓冲液，更优选为含质量浓度为45g/L脱脂奶粉的1mol/L磷酸盐缓冲液。本专利技术对所述血清稀释液的配制方法没有特殊限制，采用本领域所熟知的血清稀释液的配制方案即可。本专利技术对所述脱脂奶粉和磷酸盐的来源没有特殊限制，采用本领域所熟知的脱脂奶粉和磷酸盐商品即可。本专利技术提供的试剂盒包括底物显色液。在本专利技术中，所述底物显色液优选为含有体积浓度1％～2％过氧化氢的1mol/L四甲基联苯胺溶液，更优选为含有体积浓度1.5％过氧化氢的1mol/L四甲基联苯胺溶液。本专利技术对所述底物显色液的配制方法没有特殊限制，采用本领域所熟知的底物显色液的配制方案即可。为了保证显示效果，所述底物显色液优选现用现配。本专利技术对所述底物显色液的来源没有特殊限制，采用本领域所熟知的过氧化氢和四甲基联苯胺商品即可。本专利技术提供的试剂盒包括终止液。在本专利技术中，所述终止液优选为质量浓度1％的十二烷基硫酸钠水溶液。本专利技术对所述十二烷基硫酸钠的来源没有特殊限制，采用本领域所熟知的十二烷基硫酸钠商品即可。本专利技术提供的试剂盒包括酶标二抗。在本专利技术中，所述酶标二抗的稀释倍数优选为1：20000～30000，更优选为1:25000。所述酶标二抗的酶为辣根过氧化物酶。本专利技术对所述酶标二抗的来源没有特殊限制，采用本领域所熟知的商品购买途径获得即可。在本专利技术实施例中，所述酶标二抗购自Sigma公司。本专利技术提供的试剂盒包括阳性标准品。所述阳性标准品为A型口蹄疫病毒。所述A型口蹄疫病毒用于制备A型口蹄疫病毒抗血清的病毒。本专利技术提供的试剂盒包括阴性标准品。所述阴性标准品为1mol/L磷酸盐缓冲液。本专利技术提供了所述可视化快速检测试剂盒的制备方法，优选包括包被酶标板的制备方法；所述包被酶标板的制备方法，优选包括以下步骤：1)将A型口蹄疫病毒抗体稀释后得到抗体稀释液；2)将抗体稀释液加入酶标板中的每个孔中，在20～25℃条件下进行一次孵育1～2h；3)将一次孵育后的酶标板洗涤3～4次，加入封闭液封闭，在20～25℃条件进行二次孵育20min；4)将二次孵育的酶标板洗涤3～4次，晾干，得到包被酶标板。本专利技术将A型口蹄疫病毒抗体稀释后得到本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种A型口蹄疫病毒的可视化快速检测试剂盒，包括包被酶标板、洗涤液、血清稀释液、底物显色液、酶标二抗、终止液、阳性标准品和阴性标准品，其特征在于，所述包被酶标板中包被有A型口蹄疫病毒抗体；所述A型口蹄疫病毒抗体的稀释倍数为1:1000～2000。

【技术特征摘要】
1.一种A型口蹄疫病毒的可视化快速检测试剂盒，包括包被酶标板、洗涤液、血清稀释液、底物显色液、酶标二抗、终止液、阳性标准品和阴性标准品，其特征在于，所述包被酶标板中包被有A型口蹄疫病毒抗体；所述A型口蹄疫病毒抗体的稀释倍数为1:1000～2000。2.根据权利要求1所述的可视化快速检测试剂盒，其特征在于，所述洗涤液为含体积浓度0.01％～0.05％吐温-20的1mol/L的磷酸盐缓冲液；所述洗涤液的pH值为7.2。3.根据权利要求1所述的可视化快速检测试剂盒，其特征在于，所述血清稀释液含质量浓度为40～50g/L脱脂奶粉的1mol/L磷酸盐缓冲液。4.根据权利要求1所述的可视化快速检测试剂盒，其特征在于，所述底物显色液为含有体积浓度1％～2％过氧化氢的1mol/L四甲基联苯胺水溶液。5.根据权利要求1所述的可视化快速检测试剂盒，其特征在于，所述终止液为质量浓度1％的十二烷基硫酸钠水...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈豪泰，张永光，孙跃峰，祁林林，张杰，潘丽，
申请(专利权)人：中国农业科学院兰州兽医研究所，
类型：发明
国别省市：甘肃,62