检测嵌合抗原受体基因的通用型PCR引物组合及应用制造技术

本申请公开了一种检测嵌合抗原受体基因的通用型PCR引物组合及应用。所述引物组合包括特异检测嵌合抗原受体基因的引物对，其序列如SEQ ID No.1—2所示，所述嵌合抗原受体含有共刺激信号分子配体CD3ζ，所述引物对的靶点位于所述共刺激信号分子配体CD3ζ的编码基因上。本申请提供的引物对具有特异性好、灵敏度高和准确性高的优点，可广泛应用于一种或多种嵌合抗原受体基因的定性和定量检测，在CAR‑T细胞的质量控制、临床病人使用一种或多种CAR‑T治疗过程中血液中CAR‑T的伴随诊断和检测等T细胞免疫疗法领域具有重要应用价值。

Combination and Application of Universal PCR Primers for Detecting Chimeric Antigen Receptor Genes

This application discloses a universal combination of PCR primers for detecting chimeric antigen receptor genes and its application. The primer combination includes a pair of primers specifically detecting the chimeric antigen receptor gene, whose sequence is shown as SEQ ID No.1-2. The chimeric antigen receptor contains a costimulatory signal molecule ligand CD3, and the target of the primer pair is located on the coding gene of the costimulatory signal molecule ligand CD3. The primers provided in this application have the advantages of good specificity, high sensitivity and high accuracy. They can be widely used in the qualitative and quantitative detection of one or more chimeric antigen receptor genes. They have important application value in the field of T cell immunotherapy, such as quality control of CAR T cells, concomitant diagnosis and detection of blood CAR T during the treatment of clinical patients with one or more kinds of CAR T cells. Value.

【技术实现步骤摘要】
检测嵌合抗原受体基因的通用型PCR引物组合及应用
本专利技术涉及T细胞免疫疗法领域，具体涉及一种检测嵌合抗原受体基因的通用型PCR引物组合及应用。
技术介绍
嵌合抗原受体T细胞免疫疗法(CAR-T)细胞，是一种嵌合抗原受体的T细胞，通过基因修饰使T淋巴细胞表达特定的CAR，CAR主要由细胞膜外抗原结合区和细胞内信号转导区通过铰链区及跨膜区构成。目前，CAR-T细胞中CAR的设计已从仅包含单一CD3ζ信号传递结构域的第一代CAR发展为加入了CD28和CD137(4-1BB)等共刺激分子信号传递结构域的第二代和第三代CAR。众所周知，T细胞的完全激活需要来自TCR(T细胞抗原受体)与呈递了抗原的MHC(主要组织相容性复合物)结合所传递的第一信号，以及来自于共刺激分子受体与其配体结合后传递的第二信号，而肿瘤细胞表面常常不表达这些共刺激分子的配体，从而导致一代CAR-T细胞缺少必要的共刺激信号，表现为失能及体内扩增不良。因此，为了保证CAR-T细胞能够完全激活，第二代及第三代CAR-T细胞引入了一个或两个共刺激信号的细胞内信号传递结构域。对于靶向肿瘤细胞特定抗原如BCMA或者CD19等的CA本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测嵌合抗原受体基因的PCR引物组合，其特征在于：所述引物组合包括特异检测嵌合抗原受体基因的引物对；所述特异检测嵌合抗原受体基因的引物对的上游引物如SEQ ID No.1所示，下游引物如SEQ ID No.2所示。

【技术特征摘要】
1.一种用于检测嵌合抗原受体基因的PCR引物组合，其特征在于：所述引物组合包括特异检测嵌合抗原受体基因的引物对；所述特异检测嵌合抗原受体基因的引物对的上游引物如SEQIDNo.1所示，下游引物如SEQIDNo.2所示。2.如权利要求1所述的引物组合，其特征在于：所述引物组合还包括特异检测内参基因Actin的引物对；优选的，所述特异检测内参基因的引物对的上游引物如SEQIDNo.4所示，下游引物如SEQIDNo.5所示。3.如权利要求1或2所述的引物组合，其特征在于：所述引物组合还包括特异检测嵌合抗原受体基因的探针；优选的，所述特异检测嵌合抗原受体基因的探针的序列为SEQIDNo.3或其互补序列；和/或，所述引物组合还包括特异检测内参基因Actin的探针；优选的，所述特异检测内参基因Actin的探针的序列为SEQIDNo.6或其互补序列；优选的，所述探针为Taqman探针；更优选的，所述探针的5’端使用报告荧光基团FAM、HEX、TexasRed或CY5进行修饰，所述探针的3’端使用淬灭基团BHQ1、BHQ2、BHQ3、或TAMRA进行修饰。4.权利要求1—3中任一所述的引物组合在检测嵌合抗原受体基因中的应用；优选的，所述应用为检测细胞中所述嵌合抗原受体基因的表...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙耀光，暴佳芳，姚连琦，张亮，席在喜，
申请(专利权)人：上海邦耀生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31