The invention belongs to the field of biomedicine and relates to a method for culturing oligodendrocyte precursor cells, in particular to a method for obtaining and purifying oligodendrocyte precursor cells from the brain of newborn mice. In this method, the oligodendrocyte precursor cells of primary mice can quickly adhere to the polylysine-coated substrates. By temporarily placing the pure mechanically dissociated cell suspension on the substrate of polylysine-coated culture, oligodendrocyte precursor cells can adhere to and enrich rapidly, and be cultured in serum-free medium to form a large number of clones. After 6-8 days of culture, small amount of oligodendrocyte precursor cells can be used. Mouse oligodendrocyte precursor cells with low adhesion to polylysine-coated substrates were separated selectively by mechanical blowing to obtain further purified mouse oligodendrocyte precursor cells. The obtained cells can maintain the ability of continuous proliferation, maintain the precursor status and high purity, and have the ability to differentiate into mature oligodendrocytes.
【技术实现步骤摘要】
一种获取和纯化新生小鼠少突胶质前体细胞的方法
本专利技术属于生物医学领域,涉及少突胶质前体细胞培养的方法,具体涉及一种从新生小鼠大脑皮质获取并纯化培养少突胶质前体细胞的方法。
技术介绍
少突胶质前体细胞在中枢神经系统内发挥着多种重要功能,它们不仅能够分化为成熟的少突胶质细胞,维持神经纤维电冲动的正常传导,而且能够与神经元形成突触联系,并且可以产生多种营养因子以支持和保护神经元(LinSC,BerglesDE.SynapticsignalingbetweenGABAergicinterneuronsandoligodendrocyteprecursorcellsinthehippocampus.NatNeurosci2004;7:24-32.)(LeeY,MorrisonBM,LiY,LengacherS,FarahMH,HoffmanPN,etal.Oligodendrogliametabolicallysupportaxonsandcontributetoneurodegeneration.Nature2012;487:443-8.)。在体外获取并纯化少突胶质前 ...
【技术保护点】
1.一种从新生小鼠大脑皮质获取和纯化培养少突胶质前体细胞的方法,其特征在于,利用原代小鼠少突胶质前体细胞能够快速粘附于多聚赖氨酸包被底物的特性,通过将纯机械解离的新生小鼠皮质细胞悬液短暂置于多聚赖氨酸包被的培养底面上,使小鼠少突胶质前体细胞快速贴壁、富集,并在添加PDGF的无血清培养基中培养,形成大量增殖克隆;培养6~8天后,利用小鼠少突胶质前体细胞与多聚赖氨酸包被底物粘附强度较低的特性,通过机械吹打方式,选择性分离小鼠少突胶质前体细胞,获得进一步纯化的小鼠少突胶质前体细胞;获得的细胞能够维持连续增殖能力,保持前体状态和较高纯度,具有分化为成熟少突胶质细胞的能力;包括步骤: ...
【技术特征摘要】
1.一种从新生小鼠大脑皮质获取和纯化培养少突胶质前体细胞的方法,其特征在于,利用原代小鼠少突胶质前体细胞能够快速粘附于多聚赖氨酸包被底物的特性,通过将纯机械解离的新生小鼠皮质细胞悬液短暂置于多聚赖氨酸包被的培养底面上,使小鼠少突胶质前体细胞快速贴壁、富集,并在添加PDGF的无血清培养基中培养,形成大量增殖克隆;培养6~8天后,利用小鼠少突胶质前体细胞与多聚赖氨酸包被底物粘附强度较低的特性,通过机械吹打方式,选择性分离小鼠少突胶质前体细胞,获得进一步纯化的小鼠少突胶质前体细胞;获得的细胞能够维持连续增殖能力,保持前体状态和较高纯度,具有分化为成熟少突胶质细胞的能力;包括步骤:(1)新生小鼠大脑皮质原代细胞的获取和机械解离:无菌状态分离新生小鼠大脑皮质,通过纯机械解离方法制备细胞悬液并过滤;(2)细胞悬液中细胞的快速粘附:将细胞悬液混匀后,种植在涂布多聚赖氨酸的细胞培养瓶及培养板内;静置贴壁5~30分钟(室温25℃左右),静置过程避免震动;静置结束后,轻轻倾斜培养瓶及培养板,吸除全部液体;(3)富含小鼠少突胶质前体细胞的贴壁细胞的培养:将添加PDGF的无血清培养基沿着培养瓶壁及板壁轻轻加入;将细胞置于37℃、5%CO2条件下静置培养;培养基每2天完全换液一次,换液前,适度手工摇晃震荡培养细胞,促使一些细胞碎片团块及死亡细胞脱壁;(4)利用机械分离方法...
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