circARHGAP12在制备鼻咽癌治疗制剂中的应用和治疗制剂制造技术

本发明专利技术属于肿瘤分子生物学技术领域，具体涉及circARHGAP12在制备鼻咽癌治疗制剂中的应用和治疗制剂。我们首次发现circARHGAP12可能成为鼻咽癌治疗的潜在靶点。由于siRNA具有良好的沉默效果，本发明专利技术采用针对环状RNA头尾相接处的拼接位点设计siRNA对circARHGAP12进行干扰，在鼻咽癌细胞系HONE1、HNE2和CNE2中进行划痕愈合实验、基质胶侵袭实验，相对于对照组，siRNA敲低circARHGAP12组细胞的侵袭和迁移能力明显减弱，即沉默circARHGAP12抑制了鼻咽癌细胞的侵袭转移。表明抑制circARHGAP12能治疗鼻咽癌，具有深远的临床意义和重要的推广应用前景。

Application and treatment of circARHGAP12 in preparation of nasopharyngeal carcinoma therapeutic preparations

The invention belongs to the technical field of tumor molecular biology, in particular to the application of circARHGAP12 in the preparation of nasopharyngeal cancer therapeutic preparations and therapeutic preparations. For the first time, we found that circARHGAP12 may be a potential target for nasopharyngeal carcinoma treatment. Because siRNA has good silencing effect, the invention uses siRNA to interfere with circARHGAP12 by designing the splicing sites at the head-tail junction of circular RNA. Scratch healing experiments and matrix gel invasion experiments are carried out in nasopharyngeal carcinoma cell lines HONE1, HNE2 and CNE2. Compared with the control group, the invasion and migration ability of cells in the circARHGAP12 group knocked down by siRNA is significantly weakened, that is, the silencing of circARHGAP12 cells. Inhibition of invasion and metastasis of nasopharyngeal carcinoma cells. It shows that inhibiting circARHGAP12 can treat nasopharyngeal carcinoma, which has far-reaching clinical significance and important application prospects.

【技术实现步骤摘要】
circARHGAP12在制备鼻咽癌治疗制剂中的应用和治疗制剂
本专利技术属于肿瘤分子生物学
，具体涉及一种抑制环状RNAcircARHGAP12表达的试剂及其在制备鼻咽癌治疗制剂中的应用。
技术介绍
鼻咽癌(Nasopharyngealcarcinoma,NPC)是一种高转移的恶性肿瘤，具有不同的发病机制和组织病理学表现。遗传易感性，表观遗传，种族衍生，地理分布，环境因素和EBV病毒感染导致NPC的恶性。鼻咽癌的发生有明显的区域特征，东南亚特别是华南和北非的病例占多数。NPC的治疗策略主要是放疗辅以化疗。虽然早期NPC患者的5年总生存率高达95％，但鼻咽和颈淋巴结复发率为8.6％～23.7％。这是由于NPC的发生和发展涉及复杂的基因调控和多阶段过程，其分子机制尚不清楚，加之肿瘤异质性和放疗抵抗引起的个体差异，传统放疗的治疗效果不是非常的理想。因此，研究治疗鼻咽癌的治疗靶标和诊断的分子标记物至关重要。环状RNA(CircularRNA)主要来源于蛋白质编码基因的外显子区，也可以由内含子区、UTR区、基因间区、非编码RNA位点及已知转录物的反义位点形成。CircRNA是由前体mRNA(precursormessengerRNA,pre-mRNA)反向拼接而形成的一类不具有5‘末端帽子和3’末端poly(A)尾巴并以共价键形成环状套索结构的非编码RNA分子。CircRNA形成过程可以分为两大类，即外显子环化(exoncircularization)和内含子环化(introncircularization)两大机制。Jeck等提出外显子来源的circRNA(exoniccircRNA,ecircRNA)可以分为套索驱动环化(lariat-drivencircularization)和内含子配对驱动环化(intron-pairing-drivencircularization)两种形成方式，套索驱动环化是外显子3’端作为剪接供体(splicedonor)攻击5’端剪接受体(splicereceptor),Alu区共价结合而形成套索结构，套索结构进行内部拼接后切除内含子形成circRNA；内含子配对驱动环化是两个内含子碱基互补配对形成环状结构后，剪除内含子形成circRNA。其实内含子本身也可以环化，可以形成内含子来源circRNA(circularintronicRNA,ciRNA)。CircRNA是由前体mRNA反向拼接而形成的一类不具有5‘末端帽子和3’末端poly(A)尾巴并以共价键形式形成的封闭环形结构的非编码RNA分子。有着高度的稳定性、保守性、特异性，并且含量高的特点。CircRNA最早在1976年于RNA病毒中首次发现，随后HsuMT等人使用电子显微镜技术在猴的肾细胞质中发现了circRNA的存在。近年来越来越多的circRNA被发现，目前为止已知的circRNA数目已经达到三万多个。CircRNA也不再被认为是错误的RNA转录本，而是作为非编码RNA研究中的耀眼之星冉冉升起。发现更多的新型circRNA作为肿瘤诊断和预后的生物标志物及其应用，并能尽早在专利领域得到好的保护，能显著提升我国在该
的国际竞争力。我们检测到一个长度为794bp的circARHGAP12。通过实验发现该环状RNA在鼻咽癌中高表达且能促进鼻咽癌的侵袭转移，有可能作为鼻咽癌诊断标记物，以及治疗的靶点。
技术实现思路
本专利技术发现了一个大小794bp的circARHGAP12，并发现了它与鼻咽癌之间存在的关系，有可能作为鼻咽癌诊断标记物和治疗的靶点。本专利技术的第一个目的是提供一种抑制环状RNAcircARHGAP12表达的试剂在制备治疗鼻咽癌制剂中的应用，所述的环状RNAcircARHGAP12序列如SEQIDNO.1所示。进一步的，所述的抑制环状RNAcircARHGAP12表达的试剂包括但不限于siRNA。进一步的，所述的siRNA优选如下：正义链(5'-3')UGAACAGAUAAGGGUUUAAUU反义链(5'-3')UUAAACCCUUAUCUGUUCAUU；但不限于上述具体的siRNA。进一步的，所述的抑制circARHGAP12表达的试剂还包括阴性对照：正义链(5'-3')UGAACAGAUAUGAGCAUCGUU反义链(5'-3')CGAUGCUCAUAUCUGUUCAUU，但不限于上述具体的阴性对照。本专利技术的第二个目的是提供一种治疗鼻咽癌的制剂，包括抑制环状RNAcircARHGAP12表达的试剂，所述的环状RNAcircARHGAP12序列如SEQIDNO.1所示。进一步的，所述的抑制环状RNAcircARHGAP12表达的试剂包括但不限于siRNA。进一步的，所述的siRNA优选如下：正义链(5'-3')UGAACAGAUAUGAGCAUCGUU反义链(5'-3')UUAAACCCUUAUCUGUUCAUU；但不限于上述具体的siRNA。进一步的，所述的抑制circARHGAP12的试剂还包括阴性对照：正义链(5'-3')UGAACAGAUAUGAGCAUCGUU反义链(5'-3')CGAUGCUCAUAUCUGUUCAUU。但不限于上述具体的阴性对照。本专利技术鼻咽癌治疗制剂还包括转染siRNA所需的试剂。目前，siRNA已发展成为基因功能研究的重要工具。为了探究circARHGAP12在肿瘤发生发展中的作用，本专利技术根据circARHGAP12的拼接位点设计了一对siRNA，利用Hiperfect试剂将siRNA和siNC(对照)瞬时转染到HONE1、HNE2和CNE2细胞系中沉默circARHGAP12的表达。转染后继续培养36小时收集细胞，利用实时荧光定量PCR技术检测circARHGAP12的表达水平以检测siRNA的转染效率，发现设计的siRNA能显著抑制circARHGAP12的表达水平。本专利技术通过大量的试验证实上述结论：即抑制circARHGAP12表达的试剂能够用于制备鼻咽癌治疗制剂。这些试验包括：体外过表达circARHGAP12试验发现能促进鼻咽癌细胞侵袭和迁移，体外沉默circARHGAP12则抑制鼻咽癌细胞的侵袭和迁移。由于siRNA具有良好的沉默效果，本专利技术采用针对环状RNA头尾相接处的拼接位点设计siRNA对circARHGAP12进行干扰(只沉默circRNA，对线性的RNA无影响)，在鼻咽癌细胞系HONE1、HNE2和CNE2中进行划痕愈合实验、基质胶侵袭实验，相对于NC(对照)组，siRNA组细胞的侵袭和迁移能力明显减弱，即沉默circARHGAP12抑制了鼻咽癌细胞的侵袭转移。即抑制circARHGAP12能治疗鼻咽癌，具有深远的临床意义和重要的推广应用前景。附图说明图1为qRT-RCR检测鼻咽癌组织和非肿瘤鼻咽上皮组织以及鼻咽癌细胞系中circARHGAP12的表达水平；左图circARHGAP12的表达水平以β-actin作为参照，N为非肿瘤鼻咽上皮组织，样本数为15例；T为鼻咽癌组织，样本数为27例，n为样本数量，均采用t检验，P<0.05具有统计学意义；右图中检测circARHGAP12在鼻咽癌细胞系中的表达，NP69是永生化的正常鼻咽上皮细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.抑制环状RNA circARHGAP12表达的试剂在制备治疗鼻咽癌制剂中的应用，所述的环状RNA circARHGAP12序列如SEQ ID NO.1所示。

【技术特征摘要】
1.抑制环状RNAcircARHGAP12表达的试剂在制备治疗鼻咽癌制剂中的应用，所述的环状RNAcircARHGAP12序列如SEQIDNO.1所示。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的抑制环状RNAcircARHGAP12表达的试剂包括siRNA。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的siRNA如下：正义链(5'-3')UGAACAGAUAAGGGUUUAAUU反义链(5'-3')UUAAACCCUUAUCUGUUCAUU。4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的抑制circARHGAP12表达的试剂还包括阴性对照：正义链(5'-3')UGAACAGAUAUGAGCAUCGUU反义链(5'-3')CGAUGCUCAUAUCUGUUCAUU。5.一种治疗鼻咽癌的制...

【专利技术属性】
技术研发人员：熊芳，曾朝阳，郭灿，熊炜，范春梅，莫勇真，王裕民，邓湘赢，张文玲，向波，李小玲，李桂源，
申请(专利权)人：中南大学，
类型：发明
国别省市：湖南,43