miR-31及其类似物在制备预防或治疗血管内皮损伤的药物中的应用制造技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，具体是miR‑31及其类似物在制备预防或治疗血管内皮损伤的药物中的应用。本发明专利技术还提供了RASA1抑制剂的用途，以及筛选防治血管内皮损伤的潜在物质的方法。本发明专利技术首次揭示了血管内皮细胞miR‑31的表达与血管内皮损伤密切相关，并且首次揭示了miR‑31及其类似物可通过抑制RASA1基因的表达进而抑制由血管紧张素II引起的血管内皮细胞损伤，从而为血管内皮损伤的防治提供了新的靶点。

Application of miR-31 and its analogues in the preparation of drugs for the prevention or treatment of vascular endothelial injury

The invention relates to the field of biotechnology, in particular to the application of microRNA31 and its analogues in the preparation of drugs for preventing or treating vascular endothelial injury. The invention also provides the use of RASA1 inhibitors and a method for screening potential substances for preventing and treating vascular endothelial injury. The present invention reveals for the first time that the expression of microRNA31 in vascular endothelial cells is closely related to vascular endothelial injury, and that microRNA31 and its analogues can inhibit the injury of vascular endothelial cells caused by angiotensin II by inhibiting the expression of RASA1 gene, thus providing a new target for the prevention and treatment of vascular endothelial injury.

【技术实现步骤摘要】
miR-31及其类似物在制备预防或治疗血管内皮损伤的药物中的应用
本专利技术涉及生物
，具体地说，是一种miR-31及其类似物在制备预防或治疗血管内皮损伤的药物中的应用。
技术介绍
微小RNA(microRNA，miRNA)是近年来发现的一类具有转录后调节活性的小分子非编码RNA。大部分miRNAs位于基因的内含子中，随宿主基因的转录而转录，与宿主基因具有相似的表达谱；另一部分聚簇存在的miRNAs，能够单独转录。miRNAs基因经RNA聚合酶Ⅱ转录，形成Pri-miRNA，再经Drosha剪切，形成了具有发卡结构的Pre-miRNA；Exportin5将其从胞核转运至胞浆后，经Dicer酶剪切，成双链miRNA分子；最后，双链分离，一条被降解，另一条成为成熟miRNAs，并与其它分子一起形成了RNA诱导的沉默复合体(RISC)，RISC通过与靶mRNA的3′端非编码区(3'untranslationregion，3'UTR)相互作用，使其翻译过程阻断或引起靶mRNA的降解，从而在转录后水平负性调节蛋白质的表达。当前随着测序技术的发展和miRNAcDNA文库的构建，人类已经掌握了大量miRNA的序列信息，通过对这些序列进行生物信息学比对分析，发现大部分miRNA在物种间高度保守，在进化上高度同源。近年来已有大量文献报道了miRNA可通过影响细胞的凋亡、增殖、代谢、分化等生物学过程，参与调节心血管疾病的发生发展。既往研究证明了miRNA可通过影响细胞的凋亡、增殖、代谢、分化等生物学过程以此调控多种疾病的发生发展。miR-31在众多癌症疾病中发挥了重要作用。有研究证明miR-31在乳腺癌和卵巢癌中调控了细胞增殖，迁移和侵袭的生物学过程。也有研究表明miR-31参与调控了肺癌和结肠癌的上皮细胞增殖和肿瘤发生从而发挥了致癌作用。miR-31不仅是公认的肿瘤发生发展的重要调节剂，在其他疾病方面也发挥着不小的作用。据研究报道在肝硬化形成和皮肤创伤愈合的过程中miR-31的表达促进了纤维化的发展。在心血管疾病方面，已有研究发现miR-31在心肌纤维化，血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecells，VSMCs)表型转化，以及心肌缺血/再灌注损伤具有调节作用。而miR-31在内皮功能障碍的作用和机制尚未阐明。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种miR-31及其类似物的用途，同时提供一种筛选预防或治疗血管内皮损伤的潜在物质的方法，以及一种预防或治疗哺乳动物血管内皮损伤的方法。本专利技术首次揭示了miR-31在血管内皮损伤的作用和和机制，从而为各种原因导致的血管内皮损伤，乃至大多数血管内皮损伤参与的疾病的预防或治疗提供行之有效的途径。本专利技术的第一方面，提供miR-31及其类似物在制备预防或治疗血管内皮损伤的药物中的应用。进一步的，所述的miR-31具有如AGGCAAGATGCTGGCATAGCT(SEQIDNO.1)所示的序列。进一步的，所述的miR-31类似物包括了体外合成的短链核苷酸等。进一步的，所述的miR-31的类似物也可以是经过修饰的形式。作为本专利技术的优选方式，所述的miR-31类似物是体外合成的核苷酸序列；或是序列与其核苷酸序列具有80％以上的相同性(较佳地具有85％以上的相同性，更佳地具有90％以上的相同性，最佳地具有95％以上的相同性，如具有96％、97％、98％或99％以上的相同性)；它们均具有miR-31核苷酸序列相同的功能。在本专利技术的另一优选例中，所述的miR-31及其类似物在制备调控RASA1基因的表达的药物中的应用。在本专利技术的另一优选例中，所述的miR-31及其类似物减小血管内皮细胞的损伤。在本专利技术的另一优选例中，所述的血管内皮损伤选自血管内皮细胞损伤。在本专利技术的另一优选例中，所述的血管内皮损伤选自由血管紧张素II的刺激引发的血管内皮细胞损伤。本专利技术的第二方面，提供一种RASA1抑制剂在制备预防或治疗血管内皮损伤的药物中的应用。在本专利技术的一个优选例中，所述的RASA1抑制剂为miR-31及其类似物。进一步的，所述的miR-31与RASA13’UTR区域的种子序列直接结合。本专利技术的第三方面，提供增加miR-31的表达或活性的试剂在制备预防或治疗血管内皮损伤的药物中的应用。进一步的，所述的增加miR-31的表达或活性的试剂包括以下任一：可增加miR-31的活性、增强miR-31稳定性、促进miR-31的表达、增加miR-31的有效作用时间、或促进miR-31的转录和加工的物质。本专利技术的第四方面，提供一种药物组合物，所述的药物组合物含有有效量的所述的miR-31或其类似物，以及药学上可接受的载体。本专利技术的第五方面，提供一种筛选预防或治疗血管内皮损伤的潜在物质的方法，所述的方法包括：(A)用候选物质处理表达miR-31的体系；和(B)检测所述体系中miR-31的表达或活性；其中，若所述候选物质可增加miR-31的表达或活性，表明该候选物质是预防或治疗血管内皮损伤的潜在物质。在本专利技术一个优选例中，步骤(A)包括：在测试组中，将候选物质加入到表达或抑制miR-31的体系中；和/或步骤(B)包括：检测测试组的体系中miR-31的表达或活性，并与对照组比较，其中所述的对照组是不添加所述候选物质的表达或抑制miR-31的体系；如果测试组中miR-31的表达或活性在统计学上高于(优选显著高于，如高1倍以上)对照组，就表明该候选物是预防或治疗血管内皮损伤的潜在物质。在本专利技术的另一优选例中，所述的方法还包括：对获得的潜在物质进行进一步的细胞实验和/或动物试验，以从候选物质中进一步选择和确定对于预防或治疗血管内皮损伤有用的物质。本专利技术的第六方面，提供一种预防或治疗哺乳动物血管内皮损伤的方法，所述方法包括：上调所述哺乳动物体内miR-31的表达水平以抑制血管内皮损伤的发生。本专利技术中：MiR-31miRNA-31(miR-31)为一种本领域已知的miRNA小分子，其对于调控RNA是有用的。然而，现有技术中对于miR-31在血管内皮细胞中的具体生物学功能目前并不清楚。miR-31具有如AGGCAAGATGCTGGCATAGCT(SEQIDNO.1)所示的序列。其可以来自被分离细胞，或者可通过人工合成的方式获得。在得知了miR-31的序列后，本领域人员可以方便地制备获得miR-31及其类似物。MiR-31的用途研究发现miR-31通过胰岛素-1参与心脏的应激反应，调节心外膜间皮上皮向间充质转变以产生促纤维化发展的肌成纤维细胞样细胞；miR-31可直接与E1A刺激基因(CREG)的细胞阻遏物结合，以此将细胞分化保留在成熟的表型状态，从而在调节血管平滑肌细胞(VSMC)表型中起着至关重要的作用，冠状动脉疾病患者经皮冠状动脉介入治疗后冠脉再狭窄的发生与VSMC表型转化有关，此时的VSMC在血管损伤后由收缩型向合成型转化，PCI术后患者血清中miR-31水平升高；近期研究发现通过靶向结合蛋白激酶Cε(PKCε)，miR-31表达下调在局部缺血/再灌注损伤期间具有心脏保护作用。然而miR-31在血管内皮细胞损伤方面的作用和机制未见报道。本专利技术采用AngII诱导培养基培养HUVECs来建立血管内皮细胞损伤的细本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.miR‑31及其类似物在制备预防或治疗血管内皮损伤的药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.miR-31及其类似物在制备预防或治疗血管内皮损伤的药物中的应用。2.根据权利要求1所述的miR-31及其类似物在制备预防或治疗血管内皮损伤的药物中的应用，其特征在于，所述的miR-31具有如SEQIDNO.1所示的序列。3.根据权利要求1所述的miR-31及其类似物在制备预防或治疗血管内皮损伤的药物中的应用，其特征在于，所述的miR-31及其类似物在制备调控RASA1基因的表达的药物中的应用。4.根据权利要求1所述的miR-31及其类似物在制备预防或治疗血管内皮损伤的药物中的应用，其特征在于，所述的miR-31及其类似物减小血管内皮细胞的损伤。5.根据权利要求1所述的miR-31及其类似物在制备预防或治疗血管内皮损伤的药物中的应用，其特征在于，所述的血管内皮损伤选自由血管紧张素II的刺激引发的血管内皮细胞损伤。6.一种RASA1抑制剂在制备预防或治疗血管内皮损伤的药物中的应用，所述的RASA1抑制剂为miR-31及其类...

【专利技术属性】
技术研发人员：王国坤，褚恒，吴峰，袁瑞军，韩林，
申请(专利权)人：上海长海医院，
类型：发明
国别省市：上海,31