一种HPV病毒的引物体系及其检测方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种HPV病毒的引物体系及其检测方法和应用，该HPV病毒具有如SED ID NO.1所示的核苷酸序列，该引物体系包含：具有如SED ID NO.5所示的核苷酸序列的上游内引物FIP、具有如SED ID NO.6所示的核苷酸序列的下游内引物BIP、具有如SED ID NO.7所示的核苷酸序列的上游外引物F3、具有如SED ID NO.8所示的核苷酸序列的下游外引物B3、具有如SED ID NO.9所示的核苷酸序列的环引物LF、具有如SED ID NO.10所示的核苷酸序列的环引物LB、具有如SED ID NO.11所示的核苷酸序列的探针一和具有如SED ID NO.12所示的核苷酸序列的探针二。本发明专利技术的方法采用荧光检测，对HPV病毒进行精确评估和鉴定，能够快速检测HPV病毒。

【技术实现步骤摘要】
一种HPV病毒的引物体系及其检测方法和应用
本专利技术涉及HPV病毒检测方法，具体涉及一种HPV病毒的引物体系及其检测方法和应用。
技术介绍
HPV病毒是多种疾病的病原体，尤其是宫颈癌恶性肿瘤的病原体，是宫颈癌的最直接诱因。全世界范围内HPV感染十分普遍，HPV亚型已超过100种，HPV是威胁全球的病毒，全球总感染率达到10％。我国HPV病毒流行率在世界范围内属于较高水平，中国HPV病毒总感染率已经超过10％，中国高危型HPV病毒流行率在30％左右。高危型HPV病毒造成宫颈癌以及其它疾病，在中国高危型HPV携带者有几千万人口，甚至感染人数仍在逐年上升。HPV病毒在中国造成的包括宫颈癌在内的各种疾病严重威胁着中国人(尤其是中国妇女们)的健康和生命，目前有近千万之多疾病患者。从最初HaraldzurHausen博士(2008年诺贝尔生理学或医学奖获得者)在宫颈癌中发现16型和18型人类乳头状瘤病毒(HPV)开始，目前已经被定义分类的HPV亚型已超过100种，世界各地流行的亚型存在差异。HPV已经被明确为宫颈癌的病原体。对宫颈癌的防治已基本形成了共识：(1)病因明确的癌症：HPV病毒感染所致；(2)能通过早期检测发现HPV病毒，能预防和治疗的癌症；(3)唯一有望通过免疫接种的方法来全面预防和根除的第一个恶性肿瘤。从高危型HPV的持续感染到一般的宫颈癌前病变并最终发展成为宫颈癌大约需要5-10年，且这段时间内患者没有明显的症状，一旦发现症状时，可能已经发生了浸润性癌变。因此，进行HPV的检测对于宫颈癌以及其它疾病的预防和早期诊断以及治疗有重要意义。目前，国内采用的病毒诊断方法主要包括：杂交捕获、基因芯片、荧光PCR。以上方法存在对医院和第三方检测实验室条件要求较高，从病人取样不方便，检测操作复杂和价格较高的缺点，限制了对HPV病毒的健康普遍筛查。从对HPV病毒预防性和治疗性诊断角度讲，仅中国国内现有的诊断市场就已经超过1000亿人民币。美国市场研究机构MarketsandMarkets发布的最新研究报告显示，2020年全球HPV病毒致病以及宫颈癌筛查市场将达到几百亿美元。综上所述，家庭个性化HPV病毒检测尚难以实现，主要是由于现有技术(例如，杂交捕获、基因芯片、荧光PCR)的限制和存在的问题，例如样品容易污染，检测条件要求高，检测操作复杂，仪器和试剂耗材昂贵。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种HPV病毒的引物体系及其检测方法和应用，该方法解决了现有的方法检测条件要求高且耗时长的问题，能够快速、高效检测HPV病毒。为了达到上述目的，本专利技术提供了一种HPV病毒的引物体系，该HPV病毒具有如SEDIDNO.1所示的核苷酸序列，该引物体系包含：具有如SEDIDNO.5所示的核苷酸序列的上游内引物FIP、具有如SEDIDNO.6所示的核苷酸序列的下游内引物BIP、具有如SEDIDNO.7所示的核苷酸序列的上游外引物F3、具有如SEDIDNO.8所示的核苷酸序列的下游外引物B3、具有如SEDIDNO.9所示的核苷酸序列的环引物LF、具有如SEDIDNO.10所示的核苷酸序列的环引物LB、具有如SEDIDNO.11所示的核苷酸序列的探针一和具有如SEDIDNO.12所示的核苷酸序列的探针二。其中，所述探针一的5’端连接有淬灭基团，该淬灭基团包含：IABkFQ；所述探针二的3’端连接有荧光基团，该荧光基团包含：6-FAM。本专利技术还提供了一种HPV病毒的引物体系，该HPV病毒具有如SEDIDNO.2所示的核苷酸序列，该引物体系包含：具有如SEDIDNO.13所示的核苷酸序列的上游内引物FIP、具有如SEDIDNO.14所示的核苷酸序列的下游内引物BIP、具有如SEDIDNO.15所示的核苷酸序列的上游外引物F3、具有如SEDIDNO.16所示的核苷酸序列的下游外引物B3、具有如SEDIDNO.17所示的核苷酸序列的环引物LF、具有如SEDIDNO.18所示的核苷酸序列的环引物LB、具有如SEDIDNO.19所示的核苷酸序列的探针一和具有如SEDIDNO.12所示的核苷酸序列的探针二。其中，所述探针一的5’端连接有淬灭基团，该淬灭基团包含：IABkFQ；所述探针二的3’端连接有荧光基团，该荧光基团包含：6-FAM。本专利技术还提供了一种HPV病毒的引物体系，该HPV病毒具有如SEDIDNO.3所示的核苷酸序列，该引物体系包含：具有如SEDIDNO.20所示的核苷酸序列的上游内引物FIP、具有如SEDIDNO.21所示的核苷酸序列的下游内引物BIP、具有如SEDIDNO.22所示的核苷酸序列的上游外引物F3、具有如SEDIDNO.23所示的核苷酸序列的下游外引物B3、具有如SEDIDNO.24所示的核苷酸序列的环引物LF、具有如SEDIDNO.25所示的核苷酸序列的环引物LB、具有如SEDIDNO.26所示的核苷酸序列的探针一和具有如SEDIDNO.27所示的核苷酸序列的探针二。其中，所述探针一的5’端连接有淬灭基团，该淬灭基团包含：IABkFQ；所述探针二的3’端连接有荧光基团，该荧光基团包含：6-FAM。本专利技术还提供了一种HPV病毒的引物体系，该HPV病毒具有如SEDIDNO.4所示的核苷酸序列，该引物体系包含：具有如SEDIDNO.28所示的核苷酸序列的上游内引物FIP、具有如SEDIDNO.29所示的核苷酸序列的下游内引物BIP、具有如SEDIDNO.30所示的核苷酸序列的上游外引物F3、具有如SEDIDNO.31所示的核苷酸序列的下游外引物B3、具有如SEDIDNO.32所示的核苷酸序列的环引物LF、具有如SEDIDNO.33所示的核苷酸序列的环引物LB、具有如SEDIDNO.34所示的核苷酸序列的探针一和具有如SEDIDNO.27所示的核苷酸序列的探针二。其中，所述探针一的5’端连接有淬灭基团，该淬灭基团包含：IABkFQ；所述探针二的3’端连接有荧光基团，该荧光基团包含：6-FAM。本专利技术还提供了一种HPV病毒的检测试剂盒，该试剂盒包含：如所述的引物体系。本专利技术还提供了一种HPV病毒的检测方法，该方法包含：将HPV病毒的引物体系、待检测的HPV样品、等温扩增缓冲液和MgSO4预混合，将混合物加热孵育，待孵育结束后冷却；将dNTPs、dUTP、DNA聚合酶、AntarcticThermolabileUDG、D-(+)-海藻糖和无核酸酶水混合，得到酶混合物；向所述的混合物中加入酶混合物，加热进行反应，检测荧光信号；若有荧光，则待检测的HPV样品中含有HPV病毒；若无荧光，则待检测的HPV样品中不含有HPV病毒。其中，检测具有如SEDIDNO.1所示的核苷酸序列的HPV病毒时，所述HPV病毒的引物体系包含：具有SEDIDNO.5～SEDIDNO.12所示的核苷酸序列的引物体系；检测具有如SEDIDNO.2所示的核苷酸序列的HPV病毒时，所述HPV病毒的引物体系包含：具有SEDIDNO.12～SEDIDNO.19所示的核苷酸序列的引物体系；检测具有如SEDIDNO.3所示的核苷酸序列的HPV病毒时，所述HPV病毒的引物体系包含：具有SEDIDNO.20～SEDIDNO.27所示的核苷酸序列的引物体系；检测具有如SEDI本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种HPV病毒的引物体系，其特征在于，该HPV病毒具有如SED ID NO.1所示的核苷酸序列，该引物体系包含：具有如SED ID NO.5所示的核苷酸序列的上游内引物FIP、具有如SED ID NO.6所示的核苷酸序列的下游内引物BIP、具有如SED ID NO.7所示的核苷酸序列的上游外引物F3、具有如SED ID NO.8所示的核苷酸序列的下游外引物B3、具有如SED ID NO.9所示的核苷酸序列的环引物LF、具有如SED ID NO.10所示的核苷酸序列的环引物LB、具有如SED ID NO.11所示的核苷酸序列的探针一和具有如SED ID NO.12所示的核苷酸序列的探针二；其中，所述探针一的5’端连接有淬灭基团，该淬灭基团包含：IABkFQ；所述探针二的3’端连接有荧光基团，该荧光基团包含：6‑FAM。

【技术特征摘要】
1.一种HPV病毒的引物体系，其特征在于，该HPV病毒具有如SEDIDNO.1所示的核苷酸序列，该引物体系包含：具有如SEDIDNO.5所示的核苷酸序列的上游内引物FIP、具有如SEDIDNO.6所示的核苷酸序列的下游内引物BIP、具有如SEDIDNO.7所示的核苷酸序列的上游外引物F3、具有如SEDIDNO.8所示的核苷酸序列的下游外引物B3、具有如SEDIDNO.9所示的核苷酸序列的环引物LF、具有如SEDIDNO.10所示的核苷酸序列的环引物LB、具有如SEDIDNO.11所示的核苷酸序列的探针一和具有如SEDIDNO.12所示的核苷酸序列的探针二；其中，所述探针一的5’端连接有淬灭基团，该淬灭基团包含：IABkFQ；所述探针二的3’端连接有荧光基团，该荧光基团包含：6-FAM。2.一种HPV病毒的引物体系，其特征在于，该HPV病毒具有如SEDIDNO.2所示的核苷酸序列，该引物体系包含：具有如SEDIDNO.13所示的核苷酸序列的上游内引物FIP、具有如SEDIDNO.14所示的核苷酸序列的下游内引物BIP、具有如SEDIDNO.15所示的核苷酸序列的上游外引物F3、具有如SEDIDNO.16所示的核苷酸序列的下游外引物B3、具有如SEDIDNO.17所示的核苷酸序列的环引物LF、具有如SEDIDNO.18所示的核苷酸序列的环引物LB、具有如SEDIDNO.19所示的核苷酸序列的探针一和具有如SEDIDNO.12所示的核苷酸序列的探针二；其中，所述探针一的5’端连接有淬灭基团，该淬灭基团包含：IABkFQ；所述探针二的3’端连接有荧光基团，该荧光基团包含：6-FAM。3.一种HPV病毒的引物体系，其特征在于，该HPV病毒具有如SEDIDNO.3所示的核苷酸序列，该引物体系包含：具有如SEDIDNO.20所示的核苷酸序列的上游内引物FIP、具有如SEDIDNO.21所示的核苷酸序列的下游内引物BIP、具有如SEDIDNO.22所示的核苷酸序列的上游外引物F3、具有如SEDIDNO.23所示的核苷酸序列的下游外引物B3、具有如SEDIDNO.24所示的核苷酸序列的环引物LF、具有如SEDIDNO.25所示的核苷酸序列的环引物LB、具有如SEDIDNO.26所示的核苷酸序列的探针一和具有如SEDIDNO.27所示的核苷酸序列的探针二；其中，所述探针一的5’端连接有淬灭基团，该淬灭基团包含：IABkFQ；所述探针二的3’端连接有荧光基团，该荧光基团包含：6-FAM。4.一种HPV病毒的引物体系，其特征在于，该HPV病毒具有如SEDIDNO.4所示的核苷酸序列，该引物体系包含：具有如SEDIDNO.28所示的核苷酸序列的上游内引物FIP、具有如SEDIDNO.29所示的核苷酸序列的下游内引物BIP、具有如SEDIDNO.30所示的核苷酸序列的上游外引物F3、具有如SEDIDNO.31所示的核苷酸序列的下游外引物B3、具有如SEDIDNO.32所示的核苷酸序列的环引物LF、具有如SEDIDNO.33所示的核苷酸序列的环引物LB、具有如SEDIDNO...

【专利技术属性】
技术研发人员：史蒂福·伯纳，杨尊义，黄震，
申请(专利权)人：纽奥维特成都生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51