一种快速、特异、灵敏、抗降解的微流控RNA芯片及方法技术

本发明专利技术公开了一种快速、特异、灵敏、抗降解和直接检测RNA的微流控RNA芯片及方法，该微流控RNA芯片使用的RNA探针为：5'

【技术实现步骤摘要】
一种快速、特异、灵敏、抗降解的微流控RNA芯片及方法


[0001]本专利技术涉及一种微流控RNA芯片，具体涉及一种具有快速、特异、灵敏、抗降解和直接检测RNA能力的微流控RNA芯片及方法。

技术介绍

[0002]RNA在生命中很重要，主要作为mRNA、tRNA和遗传物质等。RNA分析(例如基因表达分析和miRNA分析)可以提供有关转录调控和翻译调控的各种生物学过程的信息。据报道，mRNA的异常表达与许多人类疾病密切相关，因此可作为疾病早期筛查和诊断的潜在生物标志物。此外，RNA作为许多传染性RNA病毒的遗传物质。RNA病毒包括大多数植物病毒和流感病毒，以及具有致命感染能力的病毒，例如SARS和CVIOD
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19病毒。此外，RNA可以是致病性的标志物，由于它们具有揭示病原体生存能力的能力，因此比DNA更好。
[0003]RNA直接检测对于疾病诊断和功能基因组学至关重要。传统地，首先将RNA反转录为cDNA，然后通过PCR扩增cDNA，然后进行荧光分析，测序或微阵列分析。由于这些步骤，RNA检测是间接的，扩增偏好的，耗时且本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种快速、特异、灵敏、抗降解的微流控RNA芯片，其特征在于，该微流控RNA芯片使用RNA探针，若干RNA探针以点阵的布局和化学键连接的形式被固定在芯片上，并作为特异性序列来引导水解酶对靶标RNA进行导向性切割，以及作为模板来引导聚合酶对靶标RNA进行特异性和标记性延伸以将被标记的靶标RNA检测。2.根据权利要求1所述的微流控RNA芯片，其特征在于，所述RNA探针为：5'
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DNA
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RNA
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DNA
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Z
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3'、5'
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DNA
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RNA
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Z
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3'、5'
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DNA
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(2'
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X
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RNA)
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DNA
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Z
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3'，或5'
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DNA
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(2'
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X
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RNA)
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Z
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3'；Z选自氨基、巯基、醛基、酮基、羧基或含有任何链接基团的链；X选自甲氧基、乙氧基、氨基、氟、氯、溴、锁核酸基团，或其它2
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不影响延伸的取代基团。3.根据权利要求1或2所述的微流控RNA芯片，所述靶标RNA为全长序列的靶标RNA或部分降解的靶标RNA。4.根据权利要求1或2所述的微流控RNA芯片，其特征在于，所述RNA探针被固定的数量为2个到10万亿个。5.根据权利要求1或2所述的微流控RNA芯片，其特征在于，所述化学键为化学共价键，包括：酰胺键、碳氮键、碳碳键、硫醚键或二硫键。6.根据权利要求1或2所述的微流控RNA芯片，其特征在于，所述水解酶为RNase H；延伸靶标RNA的酶选自Klenow(exo
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)、Bst、Taq、Bsm、Sau或N9 DNA聚合酶，或以DNA为模板的RNA聚合酶。7.根据权利要求1或2所述的微流控RNA芯片，其特征在于，所述嵌合探针印在带有醛基、氨基、羧基、巯基或其它偶联基团的微芯片上，在37℃水浴中孵育，最后在该微芯片上覆盖微通道板，从而获得微流控RNA芯片。8.基于如权利要求1
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7中任意一项所述的微流控RNA芯片对RNA检测的方法，其特征在于，该方法包含：将微流控RNA芯片上的嵌合探针与待检测的靶标RNA进行杂交，然后用水解酶对靶标RNA进行导向切割，进而通过聚合酶将修饰标记的三磷酸苷延伸到切割后的RNA末端；其中，所述修饰标记的三磷酸苷，依照标记基团的类型，标记物用于化学发光、荧光或其它信号检测。9.根据权利要求8所述的微流控RNA芯片，其特征在于，所述修饰标记的三磷酸苷为Biotin
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dNTP、Fluoro
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dNTP或其它标记的三磷酸酐；其中，所述Fluoro
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dNTP选自FAM
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dNTP、Cy3
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dNTP或Cy5
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dNTP；当所述修饰标记的三磷酸苷为Biotin
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dNTP时，所述靶标RNA的标记可为化学发光标记，将带有Biotin标记的RNA经链霉亲和素
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辣根过氧化物酶HRP偶联物处理，通过辣根过氧化物酶HRP与HRP底物作用发光，检测并分析来自微流控RNA芯片的化学发光信号；当所述修饰标记的三磷酸苷为Fluoro
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dNTP时，所述靶标RNA的标记可为荧光基团标记，将带有荧光标记的RNA进行荧光检测，并分析来自微流控RNA芯片的荧光信号。10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，水解靶标RNA的水解酶为RNase H；所述Biotin
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【专利技术属性】
技术研发人员：黄震，张顺，
申请(专利权)人：纽奥维特成都生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：