检测肠道病毒的核酸组合物、试剂盒及试剂盒的使用方法技术

本发明专利技术涉及一种检测肠道病毒的核酸组合物、试剂盒及试剂盒的使用方法。该检测肠道病毒的核酸组合物包括扩增引物对及与扩增引物对应的检测探针。上述检测肠道病毒的核酸组合物能够同时检测肠道病毒、肠道病毒71型、柯萨奇病毒A组16型、柯萨奇病毒A组4型、柯萨奇病毒A组6型、柯萨奇病毒A组10型、肠道病毒70型、柯萨奇病毒A组24型和埃可病毒中的三种，并且检测灵敏度高、特异性好。

Method of using nucleic acid composition, kit and kit for detection of enterovirus

The invention relates to a nucleic acid composition for detecting enterovirus, a kit and a method for using the kit. The nucleic acid composition for detecting enterovirus comprises an amplified primer pair and a detection probe corresponding to the amplified primer. The nucleic acid composition for detecting enterovirus can simultaneously detect three types of enterovirus, enterovirus 71, coxsackievirus A group 16, coxsackievirus A group 4, coxsackievirus A group 6, coxsackievirus A group 10, enterovirus 70, coxsackievirus A group 24 and coxovirus, with high sensitivity and specificity.

【技术实现步骤摘要】
检测肠道病毒的核酸组合物、试剂盒及试剂盒的使用方法
本专利技术涉及生物
，特别是涉及一种检测肠道病毒的核酸组合物、试剂盒及试剂盒的使用方法。
技术介绍
肠道病毒(enterovirus，EV)属于小RNA病毒科肠道病毒属，包括埃可病毒(Echovirus)、柯萨奇病毒、新型肠道病毒、脊髓灰质炎病毒(polio-virus,PV)等共106个血清型。肠道病毒可引发众多疾病，并可暴发流行，导致死亡，严重危害人类健康。传统的肠道病毒检测方法主要细胞培养法，该方法分离病毒耗时长，细胞培养技术要求高，操作复杂，检测结果受主观因素干扰较大，有些病毒无法进行细胞培养或者不出现明显的细胞病变，进而也无法确定病毒的类型。近年也出现使用Taqman探针法检测柯萨奇病毒A组6型(CA6)、柯萨奇病毒A组10型(CA10)、肠道病毒70型(EV70)、柯萨奇病毒A组24型(CA24)和埃可病毒(Echovirus)等的单重、双重或者三重荧光定量PCR方法，但该方法中将肠道病毒的多种引物混合同时检测时，肠道病毒的多种引物之间容易产生干扰，因而特异性差，灵敏度也不高。
技术实现思路
基于此，有必要提供一种特异性好和灵敏度高的检测肠道病毒的核酸组合物。此外，还提供一种特异性好和灵敏度高的检测肠道病毒的试剂盒及一种简捷的检测肠道病毒的试剂盒的使用方法。一种检测肠道病毒的核酸组合物，包括扩增引物对及与所述扩增引物对应的检测探针，所述扩增引物对包括如下引物对中的至少三种：序列如SEQIDNo.1及SEQIDNo.2所示的肠道病毒扩增引物对、序列如SEQIDNo.3及SEQIDNo.4所示的肠道病毒71型扩增引物对、序列如SEQIDNo.5及SEQIDNo.6所示的柯萨奇病毒CA16扩增引物对、序列如SEQIDNo.7及SEQIDNo.8所示的柯萨奇病毒CA4扩增引物对、序列如SEQIDNo.9及SEQIDNo.10所示的柯萨奇病毒CA6扩增引物对、序列如SEQIDNo.11及SEQIDNo.12所示的柯萨奇病毒CA10扩增引物对、序列如SEQIDNo.13及SEQIDNo.14所示的肠道病毒70型扩增引物对、序列如SEQIDNo.15及SEQIDNo.16所示的柯萨奇病毒CA24扩增引物对、和序列如SEQIDNo.17及SEQIDNo.18所示的埃可病毒扩增引物对；与所述扩增引物对对应的检测探针的序列分别序列如SEQIDNo.19～SEQIDNo.27所示；或与所述扩增引物对对应的检测探针的序列分别为序列如SEQIDNo.19～SEQIDNo.27所示的序列的反向互补序列；检测探针上有荧光基团。上述检测肠道病毒的核酸组合物，通过扩增引物对及对应检测探针的精心设计，至少能够同时检测肠道病毒、肠道病毒71型、柯萨奇病毒A组16型、柯萨奇病毒A组4型、柯萨奇病毒A组6型、柯萨奇病毒A组10型、肠道病毒70型、柯萨奇病毒A组24型和埃可病毒中的三种。使用上述检测肠道病毒的核酸组合物进行实时荧光检测的结果显示，上述检测肠道病毒的核酸组合物的特异性高，各个病毒对应的扩增引物和对应的检测探针之间相互影响小，并且检测的灵敏度高，能够达到102copies/mL。一种检测肠道病毒的试剂盒，包括上述检测肠道病毒的核酸组合物。一种检测肠道病毒的试剂盒的使用方法，包括以下步骤：提取待测样本的核酸，得到核酸样本；以所述核酸样本为模板，加入上述检测肠道病毒的试剂盒中的扩增引物对和对应的检测探针，进行实时荧光PCR扩增反应；及在实时荧光PCR扩增反应过程检测荧光信号，得到检测结果。附图说明图1实施例1的第一组反应液的扩增曲线图；图2为实施例1的第二组反应液的扩增曲线图；图3为实施例1的第三组反应液的扩增曲线图。具体实施方式为了便于理解本专利技术，下面将参照相关附图对本专利技术进行更全面的描述。附图中给出了本专利技术的部分实施例。但是，本专利技术可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使本专利技术公开内容更加透彻全面。除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本专利技术。本专利技术一实施方式提供了一种检测肠道病毒的核酸组合物，其能够同时检测肠道病毒、肠道病毒71型、柯萨奇病毒A组16型、柯萨奇病毒A组4型、柯萨奇病毒A组6型、柯萨奇病毒A组10型、肠道病毒70型、柯萨奇病毒A组24型和埃可病毒中的三种。使用上述检测肠道病毒的核酸组合物进行实时荧光检测的结果显示，上述检测肠道病毒的核酸组合物的特异性高，各个病毒对应的扩增引物和对应的检测探针之间相互影响小，并且检测的灵敏度高，能够达到102copies/mL。该检测肠道病毒的核酸组合物包括扩增引物对及与扩增引物对应的检测探针。扩增引物对包括如下扩增引物对中的至少三种：序列如SEQIDNo.1及SEQIDNo.2所示的肠道病毒扩增引物对、序列如SEQIDNo.3及SEQIDNo.4所示的肠道病毒71型扩增引物对、序列如SEQIDNo.5及SEQIDNo.6所示的柯萨奇病毒CA16扩增引物对、序列如SEQIDNo.7及SEQIDNo.8所示的柯萨奇病毒CA4扩增引物对、序列如SEQIDNo.9及SEQIDNo.10所示的柯萨奇病毒CA6扩增引物对、序列如SEQIDNo.11及SEQIDNo.12所示的柯萨奇病毒CA10扩增引物对、序列如SEQIDNo.13及SEQIDNo.14所示的肠道病毒70型扩增引物对、序列如SEQIDNo.15及SEQIDNo.16所示的柯萨奇病毒CA24扩增引物对、和序列如SEQIDNo.17及SEQIDNo.18所示的埃可病毒扩增引物对。SEQIDNO.1的序列为：5’-AATCCTCCGGCCCCTGA-3’；SEQIDNO.2的序列为：5’-ATTGTCACCATAAGCAGCCA-3’；SEQIDNO.3的序列为：5’-TTCATGGCTACCGGCAAGAT-3’；SEQIDNO.4的序列为：5’-CAGATAACGTGCGTACCCAACA-3’；SEQIDNO.5的序列为：5’-AGACACGGTGCGAAGAGTCTATT-3’；SEQIDNo.6的序列为：5’-GCGCGCTCCGCAGTTA-3’；SEQIDNo.7的序列为：5’-GCACCCAGCTCTCATAGTTTGA-3’；SEQIDNo.8的序列为：5’-GCTGTGGATGAAGCTCCTGTCT-3’；SEQIDNo.9的序列为：5’-CATACAGCCAAACAATATCCAATACTG-3’；SEQIDNo.10的序列为：5’-CTCTGCGGGTTTGCTGGTA-3’；SEQIDNo.11的序列为：5’-CCTCACCCGGGATTTAATACC-3’；SEQIDNo.12的序列为：5’-CGTACGGGTCGTTGAAGGA-3’；SEQIDNo.13的序列为：5’-TCTGTGGCGGAACCGACTA-3’；SEQIDNo.14的序列为：5’-CCGGATGGCTAATCCAATAGC-3’；SEQIDNo.15的序列为：5’-GTAT本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测肠道病毒的核酸组合物，其特征在于，包括扩增引物对及与所述扩增引物对应的检测探针；所述扩增引物对包括如下扩增引物对中的至少三种：序列如SEQ ID No.1及SEQ ID No.2所示的肠道病毒扩增引物对、序列如SEQ ID No.3及SEQ ID No.4所示的肠道病毒71型扩增引物对、序列如SEQ ID No.5及SEQ ID No.6所示的柯萨奇病毒CA16扩增引物对、序列如SEQ ID No.7及SEQ ID No.8所示的柯萨奇病毒CA4扩增引物对、序列如SEQ ID No.9及SEQ ID No.10所示的柯萨奇病毒CA6扩增引物对、序列如SEQ ID No.11及SEQ ID No.12所示的柯萨奇病毒CA10扩增引物对、序列如SEQ ID No.13及SEQ ID No.14所示的肠道病毒70型扩增引物对、序列如SEQ ID No.15及SEQ ID No.16所示的柯萨奇病毒CA24扩增引物对、和序列如SEQ ID No.17及SEQ ID No.18所示的埃可病毒扩增引物对；与所述扩增引物对对应的检测探针的序列或其互补序列分别如SEQ ID No.19～SEQ ID No.27所示；所述检测探针上连接有荧光基团。...

【技术特征摘要】
1.一种检测肠道病毒的核酸组合物，其特征在于，包括扩增引物对及与所述扩增引物对应的检测探针；所述扩增引物对包括如下扩增引物对中的至少三种：序列如SEQIDNo.1及SEQIDNo.2所示的肠道病毒扩增引物对、序列如SEQIDNo.3及SEQIDNo.4所示的肠道病毒71型扩增引物对、序列如SEQIDNo.5及SEQIDNo.6所示的柯萨奇病毒CA16扩增引物对、序列如SEQIDNo.7及SEQIDNo.8所示的柯萨奇病毒CA4扩增引物对、序列如SEQIDNo.9及SEQIDNo.10所示的柯萨奇病毒CA6扩增引物对、序列如SEQIDNo.11及SEQIDNo.12所示的柯萨奇病毒CA10扩增引物对、序列如SEQIDNo.13及SEQIDNo.14所示的肠道病毒70型扩增引物对、序列如SEQIDNo.15及SEQIDNo.16所示的柯萨奇病毒CA24扩增引物对、和序列如SEQIDNo.17及SEQIDNo.18所示的埃可病毒扩增引物对；与所述扩增引物对对应的检测探针的序列或其互补序列分别如SEQIDNo.19～SEQIDNo.27所示；所述检测探针上连接有荧光基团。2.根据权利要求1所述的检测肠道病毒的核酸组合物，其特征在于，所述扩增引物对包括所述肠道病毒扩增引物对、所述肠道病毒71型扩增引物对、所述柯萨奇病毒CA16扩增引物对、所述柯萨奇病毒CA4扩增引物对、所述柯萨奇病毒CA6扩增引物对、所述柯萨奇病毒CA10扩增引物对、所述肠道病毒70型扩增引物对、所述柯萨奇病毒CA24扩增引物对、和所述埃可病毒扩增引物对；所述扩增引物对为多组，同一组内的不同扩增引物对的检测探针上的荧光基团不同。3.根据权利要求2所述的检测肠道病毒的核酸组合物，其特征在于，所述扩增引物对为三组；其中，第一组包括所述肠道病毒扩增引物对、所述肠道病毒71型扩增引物对和所述柯萨奇病毒CA16扩增引物对；第二组包括所述柯萨奇病毒CA4扩增引物对、所述柯萨奇病毒CA6扩增引...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗成，
申请(专利权)人：深圳市刚竹医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44