The present invention discloses a universal RPA primer, RPA probe, reagent kit and nucleic acid detection method for detecting canine, cat and mink parvovirus. The RPA primer includes a forward primer, PVRPAF, whose sequence is CCATCTCATACTGGAACTAGTGGCACCAAC, and a reverse primer, PVRPAB, whose sequence is Bio_CTCAAAA GAATAATAGTGCACCAAC, which is designed based on RPA primer amplification region. The needle was PVRPAP, and its sequence was FAM CTCCTTCAGCTTGAGCAAAGAATTTAGAAATGGGHAAGCCCAATGCTC C3s pacer. The invention combines simple sample processing, recombinant enzyme amplification technology and side-flow chromatography technology, can detect without any equipment at the onset site, can get the test results within one hour, can take measures to treat at the first time, and is very suitable for field use.
【技术实现步骤摘要】
一种用于检测犬、猫、貂细小病毒的通用的RPA引物、RPA探针、试剂盒及核酸检测方法
本专利技术属于病毒检测生物
,具体涉及一种用于检测犬、猫、貂细小病毒的通用的RPA引物、RPA探针、试剂盒及核酸检测方法。
技术介绍
犬、猫、貂细小病毒可分别引起相应宿主发生严重的病毒性腹泻,具有很高的致死性和传染性。猫细小病毒(FPV)引起的猫泛白细胞减少症以高热、呕吐、白细胞严重减少和肠炎为特征。在自然条件下感染猫科和鼬科多种动物,如虎、豹、狮子和浣熊,但以体型较小的猫科动物,包括水貂最为易感。FPV是目前本属病毒中感染范围最宽,致病性最强的一种。因此也是本属中的主要病毒之一。猫泛白细胞减少症是一种主要侵害幼猫的高度接触性传染病,潜伏期2~9天,平均4天。本病的临床表现甚为多样,分为特急性型、急性型、亚急性型和不显型。特急性型不待发现临床症状即突然死亡,畜主往往怀疑为中毒,急性型可于24小时内死亡,亚急性型可持续数日到一周,呈双相热,第一期发热时病畜体温升高40℃左右,持续约一天,发热平息后数天第二次发热,体温40℃以上,同时出现厌食、呕吐、沉郁、出血性肠炎和脱水等症状,病猫多于5~6天死亡,死亡率一般为60%~70%。犬细小病毒(CanineParvovirus,CPV)主要感染犬,其他犬科动物,如郊狼、丛林犬、食蟹狐和鬣狗等也可以感染。随着病毒抗原漂移,病毒已经可以感染猫、小熊、貉等动物。该病潜伏期3-5天,多数呈现肠炎综合症,少数呈现心肌炎综合症。肠炎病犬初期精神沉郁,厌食,偶见发热,软便或轻微呕吐,随后发展成为频繁呕吐和剧烈腹泻。起初粪便呈灰色,黄色或乳白 ...
【技术保护点】
1.一种用于检测犬、猫、貂细小病毒的通用的RPA引物和RPA探针,其特征在于,所述的RPA引物包括正向引物为PVRPAF,其序列为:CCATCTCATACTGGAACTAGTGGCACACCAAC,反向引物为PVRPAB,其序列为:Bio‑CTCAAAAGAATAATATGGTGCACTATAACCAAC,其中基于RPA引物扩增区域设计的RPA探针为PVRPAP,其序列为:FAM‑CTCCTTCAGCTTGAGGCAAAGAATTTAGAAATGGTGGHAAGCCCAATGCTC‑C3spacer。
【技术特征摘要】
1.一种用于检测犬、猫、貂细小病毒的通用的RPA引物和RPA探针,其特征在于,所述的RPA引物包括正向引物为PVRPAF,其序列为:CCATCTCATACTGGAACTAGTGGCACACCAAC,反向引物为PVRPAB,其序列为:Bio-CTCAAAAGAATAATATGGTGCACTATAACCAAC,其中基于RPA引物扩增区域设计的RPA探针为PVRPAP,其序列为:FAM-CTCCTTCAGCTTGAGGCAAAGAATTTAGAAATGGTGGHAAGCCCAATGCTC-C3spacer。2.一种用于检测犬、猫、貂细小病毒的RPA试剂盒,其特征在于,其包括权利要求1所述的RPA引物和RPA探针。3.根据权利要求2所述的一种用于检测犬、猫、貂细小病毒的RPA试剂盒,其特征在于,还包括:(1)样品处理液:0.2MKOH溶液;(2)检测反应液:50mMpH7.9的Tris-HCl;100mM的乙酸钾;2mM的二硫苏糖醇;3mM的腺嘌呤核苷三磷酸;20mM的磷酸肌酸;5μg的肌酸激酶;5%质量分数的聚乙二醇,200μM的脱氧核糖核苷三磷酸,RPA引物,14mM的醋酸镁;(3)干粉管:3.75μg冻干的重组酶uvsX、750ng冻干的重组酶uvsY、30μg的单链结合蛋白、...
【专利技术属性】
技术研发人员:刘宝山,姚龙泉,张文奎,吴长德,
申请(专利权)人:沈阳农业大学,
类型:发明
国别省市:辽宁,21
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