融合蛋白，其包含IL2和IL2Rβ(例如CIRB)，包含IL2、IL2Rβ和IL21R(例如CIRB21)，和/或包含IL2、IL2Rβ、和CD28(例如CIRB28)；表达这些融合蛋白的自然杀伤(NK)细胞以及使用这些自然杀伤细胞例如治疗患有癌症的受试者的方法；以及表达包含IL2、L2Rβ、和CD28的融合蛋白的调节性T细胞(T‑reg)以及使用这些调节性T细胞例如治疗患有自身免疫性疾病或GVHD的受试者的方法。
Interleukin-2 binding to its receptor IL-2Rbeta serves as a platform for enhancing the activity of natural killer cells and regulatory T cells
Fusion proteins, which contain IL2 and IL2Rbeta (e.g. CIRB), IL2, IL2Rbeta and IL21R (e.g. CIRB21), and/or IL2, IL2Rbeta, and CD28 (e.g. CIRB28); natural killer (NK) cells expressing these fusion proteins and methods of using these natural killer cells, e.g. to treat cancer patients; and regulatory T-cells expressing fusion proteins containing IL2, L2Rbeta, and CD28 Cells (T_reg) and the use of these regulatory T cells, such as in the treatment of subjects with autoimmune diseases or GVHD.
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】与其受体IL-2Rβ结合的白细胞介素-2作为用来增强自然杀伤细胞和调节性T细胞活性的平台优先权要求本申请要求于2016年5月19日提交的美国临时申请序列号62/338,757、以及于2017年3月15日提交的美国临时申请序列号62/471,456的权益。以上文献的全部内容通过引用结合在此。
本文描述了表达包含IL2、IL2Rβ和IL21R的嵌合蛋白(例如CIRB21)和/或包含IL2、IL2Rβ、和CD28的嵌合体(例如CIRB28)的自然杀伤(NK)细胞，以及使用这些自然杀伤细胞例如治疗患有癌症、GVHD、和自身免疫性疾病的受试者的方法。
技术介绍
自然杀伤(NK)细胞是在先前没有暴露于特异性抗原(1-3)时被赋予攻击恶性的和病毒感染的细胞的天生能力的淋巴细胞。若干白细胞介素，并且特别是IL2激活并且扩增关键免疫细胞，例如T细胞和NK细胞(4)。因此，在范围从癌症到病毒感染的多种疾病中，全身性IL2补充可以增强免疫力。然而，在癌症患者中，肿瘤细胞及其微环境(TME)通常通过协调多种逃逸机制，抑制NK细胞抗肿瘤活性(5)。使用高剂量IL2输注的临床试验已经取得了有限的成功，这是由于像脓毒症的严重副作用(6-8)；而因体内IL2的短半衰期(小于10min)(9)并且由于低IL2剂量被T-reg和其他淋巴样细胞耗尽(10)，低剂量IL2功效受限。基于IL2的多种策略旨在增强NK细胞毒性，同时减小患者中的毒性，具有有限的功效。可以将离体培养的NK细胞通过在体内转移之前暴露于IL2来激活并且诱导增殖。与来自同种异体供体的NK细胞相比(12)，离体激活的自体NK细胞显示了更小的抗肿瘤功效(11)，这是因为自身I类HLA信号传导抑制了NK细胞毒性和细胞因子释放(13)。然而，为了使同种异体供体NK细胞是有效的，需要转移前淋巴细胞清除，用来减小对生长因子和细胞因子的竞争(14，15)。此外，在体内转移后，需要全身性IL2给予来维持NK细胞毒性，使患者暴露于全身性副作用。在过去使用微转移模型用来在NK细胞中表达内源IL2的治疗努力显示了有限的成功，并且并不像用外源IL2刺激的NK细胞那样有效(16)。类似地，用来表达膜结合的内源IL2的努力并未显示高于亲本NK92细胞的任何优势(17)。使用NK细胞的若干免疫疗法策略的成功有限可以通过如下来解释：在宿主中对于细胞因子而言激活的NK细胞不能超过T-reg，并且诱导髓源性抑制细胞(MDSC)的TME有免疫抑制作用。MDSC和T-reg二者通过直接接触或通过TGFβ1的分泌来介导NK细胞功能抑制(18,19)。
技术实现思路
白细胞介素-2(IL2)是用于关键免疫细胞(包括T细胞和自然杀伤(NK)细胞)的免疫刺激性细胞因子。全身性IL2补充可以在多种疾病(范围从赘生物到病毒感染)中增强NK介导的免疫力。然而，其全身性应用受限于其严重的副作用，并且其功效也受限于调节性T细胞(T-reg)的激活。通过与包含IL2Rα、IL2Rβ和IL2Rγ的高亲和性多亚基受体复合物的相互作用介导IL2信号传导。成人NK细胞可以仅表达IL2Rβ和IL2Rγ亚基并且因此对于IL2是相对不敏感的。为了克服这些限制，我们创造了经由肽接头连接的IL2及其受体IL2Rβ的新型嵌合IL2-IL2Rβ(CIRB)融合蛋白。在没有外源IL2的情况下，表达CIRB的NK92细胞(NK92CIRB)被高度激活并且无限扩增。它们是高度细胞毒性的，并且对TGF-β1和地塞米松具有抗性。此外，CIRB诱导自然细胞毒性受体NKP44、NKP46和NKP30连同CD16的大量表达，CD16经由针对HER2阳性细胞的抗体依赖性途径与曲妥珠单抗增强了NK细胞毒性。当与分泌IL2的NK92细胞系(NK92IL2)相比时，NK92CIRB细胞显示了优越的体内抗肿瘤作用以及小鼠中的生存期(至少3周)。此新型嵌合体消除了对IL2Rα和IL2Rβ二者表达的需要，并且提供了对外源IL2刺激的替代方案。总而言之，本专利技术数据显示，使IL2与其受体IL2Rβ结合提供了新的平台，该平台在选择性激活并且增强免疫疗法方面会是有用的。因此，本文提供了融合蛋白，这些融合蛋白包含用其间的间插接头融合至白细胞介素2受体β(IL2Rβ)的N末端的白细胞介素2(IL2)。在一些实施例中，IL2包含SEQIDNO:34，和/或IL2Rβ包含SEQIDNO:35的氨基酸27-551。在一些实施例中，IL2和IL2Rβ的N末端之间的间插接头包含IL2Rα的细胞外结构域。在一些实施例中，IL2Rα的细胞外结构域包含SEQIDNO:28。在一些实施例中，融合蛋白还包括在IL2Rβ的C末端处的IL21R的细胞质结构域，任选地其间具有间插接头。在一些实施例中，IL21R的细胞质结构域包含SEQIDNO:36的氨基酸254-538。在一些实施例中，融合蛋白还包括在IL2Rβ部分的C末端处的CD28的激活结构域，任选地其间具有间插接头。在一些实施例中，CD28的激活结构域包含SEQIDNO:38的氨基酸180至220。本文还提供了编码本文描述的融合蛋白的核酸、连同包含这些核酸的表达载体，这些表达载体优选地具有一个或多个调节区，用于表达本文描述的融合蛋白。另外，本文提供了表达如本文描述的融合蛋白的分离的自然杀伤(NK)细胞(例如CD3-CD56+淋巴细胞)，优选地，其中该NK细胞是CD3-CD56+淋巴细胞，还表达CD16和任选地NKP44、NKP46和NKP30；并且提供了这些分离的自然杀伤细胞在治疗癌症中的用途。还提供了表达融合蛋白的调节性T细胞(T-reg)，这些融合蛋白包含融合至白细胞介素2受体β(IL2Rβ)的N末端的白细胞介素2(IL2)(其间具有间插接头)、以及在IL2Rβ部分的C末端处的CD28的激活结构域(任选地其间具有间插接头)。优选地，Treg是CD4+CD25+，例如CD4+CD25+CD127-Treg(例如，对于特应性Treg是CD4+CD25高CD127-ICOS，或对于GVHD是CD4+CD25+CD127-CD62L+)，并且任选地也是FOXP3+。还提供了其在治疗GVHD和自身免疫性疾病中的用途，例如用于耗尽同种异体反应性T细胞。另外，本文提供了用于治疗患有癌症(例如，已经诊断为患有癌症)的受试者的方法，该受试者优选地是人类受试者，这些方法包括给予治疗有效量的表达如本文描述的融合蛋白的自然杀伤(NK)细胞，优选地其中这些NK细胞是CD3-CD56+淋巴细胞，还表达CD16以及任选地NKP44、NKP46和NKP30。可以在生理学上可接受的组合物中配制和/或给予NK细胞，例如，如本文描述，例如配制成用于静脉内给予。在一些实施例中，该受试者患有实体瘤。在一些实施例中，这些方法包括给予一种或多种抗肿瘤单克隆抗体或检查点抑制剂。在一些实施例中，静脉内给予NK细胞。在一些实施例中，在给予之前，NK细胞经历500至1000cGy的γ辐射。本文还提供了用于治疗患有GVHD或自身免疫性疾病的受试者的方法，这些方法包括给予治疗有效量的表达融合蛋白的调节性T(T-reg)细胞，这些融合蛋白包含融合至白细胞介素2受体β(IL2Rβ)的N末端的白细胞介素2(IL本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种融合蛋白，该融合蛋白包含用间插接头融合至白细胞介素2受体β(IL2Rβ)的N末端的白细胞介素2(IL2)。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.05.19 US 62/338,757;2017.03.15 US 62/471,4561.一种融合蛋白，该融合蛋白包含用间插接头融合至白细胞介素2受体β(IL2Rβ)的N末端的白细胞介素2(IL2)。2.如权利要求1所述的融合蛋白，其中：该IL2包含SEQIDNO:34，和/或该IL2Rβ包含SEQIDNO:35的氨基酸27-551。3.如权利要求1所述的融合蛋白，其中在IL2与IL2Rβ的N末端之间的该间插接头包含IL2Rα的细胞外结构域。4.如权利要求3所述的融合蛋白，其中IL2Rα的该细胞外结构域包含SEQIDNO:28。5.如权利要求1所述的融合蛋白，还包含在IL2Rβ的C末端处的IL21R的细胞质结构域，任选地其间具有间插接头。6.如权利要求5所述的融合蛋白，其中IL21R的该细胞质结构域包含SEQIDNO:36的氨基酸254-538。7.如权利要求1所述的融合蛋白，还包含在IL2Rβ部分的C末端处的CD28的激活结构域，任选地其间具有间插接头。8.如权利要求7所述的融合蛋白，其中CD28的该激活结构域包含SEQIDNO:38的氨基酸180至220。9.一种编码如权利要求1-8所述的融合蛋白的核酸。10.一种包含如权利要求9所述的核酸的表达载体，该表达载体具有一个或多个调节区，用于表达如权利要求1-8所述的融合蛋白。11.一种表达如权利要求1-8所述的融合蛋白的分离的自然杀伤(NK)细胞，优选地其中该NK细胞还表达CD16，以及任选地NKP44、NKP46和NKP30。12.一种治疗患有癌症的受试者的方法，该受试者...
【专利技术属性】
技术研发人员：Y·由耐第，S·福曼，K·米勒，J·F·考特恩，
申请(专利权)人：通用医疗公司，
类型：发明
国别省市：美国,US
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