The invention belongs to the field of cancer biological products, in particular, relates to chimeric antigen receptors, their genes and recombinant expression vectors, CD22 CD19 double targeting T cells and their applications. The chimeric antigen receptor is CD22ScFv L CD19ScFv CD8 CD137 CD3, which includes CD22ScFv, conjugated peptide L, CD19ScFv, hinge region and transmembrane region of CD8, intracellular signal domain of CD137 and intracellular signal domain of CD3. In the treatment of B-cell malignant hematological malignancies, the chimeric antigen receptor modified T cells of the present invention can not only specifically recognize the tumor cells expressed only by a single target of CD19 antigen or CD22 antigen, but also recognize the tumor cells co-expressed by two targets of CD19 antigen and CD22 antigen. Compared with single target CAR T and double target CAR T, the chimeric antigen receptor modified T cells of the present invention have stronger anti-tumor activity and avoid. Tumor cells free from low abundance antigens produce immune escape, which reduces the risk of recurrence.
【技术实现步骤摘要】
嵌合抗原受体及其基因和重组表达载体、CD22-CD19双靶向性的T细胞及其应用
本专利技术属于肿瘤生物制品领域，具体地，涉及一种嵌合抗原受体及其基因和重组表达载体、CD22-CD19双靶向性的T细胞及其应用。
技术介绍
以急性淋巴细胞白血病、急性髓系白血病、非霍奇金淋巴瘤等为代表的血液系统恶性肿瘤在我国的发病率有不断增高趋势，并且以中青年为主要患病群体，严重威胁着我国人口的健康与生命。尽管以化疗、放疗、造血干细胞移植、以及分子靶向药物与治疗性抗体为主的治疗手段在很大程度上提高了疾病的缓解率，延长了患者生存期，但20-50％的患者在缓解后复发，同时约有30％左右的患者对目前已有的诱导缓解手段存在原发性抵抗。针对这种情况，需要探索寻找新的有效治疗策略。CD19和CD22均在临床水平被确认为表达在大多数B细胞恶性肿瘤的特异性抗原，而在造血干细胞、血浆细胞和其他正常组织中不表达。CD19和CD22抗原与B细胞的生物特性密切相关，存在于B细胞成熟的各个阶段。在B细胞增殖和分化中起重要的调节作用。而且，CD19和CD22分子在细胞膜上比较暴露，容易接近，与单克隆抗体结合后无显...
【技术保护点】
1.一种嵌合抗原受体，其特征在于，所述嵌合抗原受体为CD22ScFv‑L‑CD19ScFv‑CD8‑CD137‑CD3ζ，包括依次串联的CD22ScFv、连接肽L、CD19ScFv、CD8的铰链区和跨膜区、CD137的胞内信号结构域和CD3ζ的胞内信号结构域。
【技术特征摘要】
1.一种嵌合抗原受体，其特征在于，所述嵌合抗原受体为CD22ScFv-L-CD19ScFv-CD8-CD137-CD3ζ，包括依次串联的CD22ScFv、连接肽L、CD19ScFv、CD8的铰链区和跨膜区、CD137的胞内信号结构域和CD3ζ的胞内信号结构域。2.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其中，所述嵌合抗原受体具有如SEQIDNO.1所示的氨基酸序列。3.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其中，所述连接肽L具有如SEQIDNO.3所示的氨基酸序列。4.编码权利要求1-3中任意一项所述的嵌合抗原受体的基因；优选的，编码所述嵌合抗原受体的基因具有如SEQIDNO.2所示的核苷酸序列。5.含有权利要求4所述的基因的重组表达载体；优选的，所述重组表达载体为慢病毒表达载体；优选的，所述慢病毒表达载体为pRRLsin-CD22ScFv-L-CD19ScFv-CD8-CD137-CD3ζ。6.一种工程化CD19和CD22双靶向性的T细胞，其特征在于，所述T细胞是由权利要求1-3中任意一项所述的嵌合抗原受体修饰的T细胞。7.权利要求6所述的工程化CD19和CD22双靶向性的T细胞的制备方法，其特征在于，所述方法包括：包装携带权利要求5所述的重组表达载体的慢病毒，得到病毒原液；利用得到的病毒原液感染T细胞，使T细胞表达嵌合抗原受体。8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述T细胞的制备方法包括：(1)在CD3单克隆抗体、白介素-2、重组人纤维蛋白和血清的存在下，将单个T细胞进行第一阶段培养；优选地，所述第一阶段培养的方法包括：将单个T细胞与第一T细胞培养液混合，并将得到的混合液在包被有重组人纤维蛋白和CD3单克隆抗体的培养容器中进行培养，所述第一...
【专利技术属性】
技术研发人员：伍志强，韩为东，王瑶，代汉仁，贾鹤静，王晓慧，
申请(专利权)人：中国人民解放军总医院，
类型：发明
国别省市：北京,11
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