抗CD40抗体及其应用制造技术

本申请提供了重组的抗CD40抗体及其用途。本申请的抗CD40抗体能够与CD40特异性结合，具有诱导树突状细胞成熟、活化淋巴细胞等效果，可用于治疗CD40相关疾病，例如CD40相关的肿瘤。

Anti-CD40 antibody and its application

This application provides recombinant anti-CD40 antibody and its use. The anti-CD40 antibody can specifically bind to CD40, induce the maturation of dendritic cells and activate lymphocytes, and can be used to treat CD40-related diseases, such as CD40-related tumors.

【技术实现步骤摘要】
抗CD40抗体及其应用
本申请涉及抗体领域，更具体地，本申请涉及抗CD40的抗体及其应用。
技术介绍
CD40是TNF受体(TNFR)超家族的成员，主要在B细胞和其他抗原呈递细胞(APC)，如树突状细胞和巨噬细胞上表达。CD40配体(CD40L)主要由活化的T细胞表达。CD40和CD40L的相互作用是T细胞活化的共刺激信号。静息B细胞上的CD40-CD40L相互作用能诱导B细胞增殖、免疫球蛋白类别转变和抗体分泌，并且对生发中心的发展和记忆性B细胞的存活都有影响，这些都是体液免疫应答必不可少的(KehryMR.JImmunol1996；156：2345-2348)。树突状细胞上的CD40与CD40L结合可诱导DC的成熟，这表现在共刺激分子，如B7家族(CD80，CD86)的表达增加，以及促炎细胞因子，如白细胞介素12的产生，这将导致显著的T细胞应答(StoutRD,etal.Immunol1996；17：487-492；BrendanO′Sullivan,etal.CriticalReviewsinImmunology2003；23：83-97；CellaM.,etal.JExpMed1996；184:747-452)。CD40信号转导激活多种通路，包括NF-κB(核因子-κB)、MAPK(丝裂原活化蛋白激酶)和STAT3(信号转导子和转录激活子-3)(PypeS，etal.JBiolChem.2000；275(24)：18586-18593)，其通过激活活化蛋白、c-Jun、ATF2(激活转录因子-2)和Rel转录因子(DadgostarH,etal.ProcNatlAcadSciUSA.2002；99(3)：1497-1502)调节基因表达。通过CD40信号应答而激活的基因包括各种细胞因子和趋化因子，如IL-1、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、TNF-α和巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP1α)。在某些细胞类型中，CD40激活可能会导致产生细胞毒性自由基(DadgostarH,etal.ProcNatlAcadSciUSA.2002；99(3)：1497-1502)、COX-2(环氧合酶-2)，并产生NO(一氧化氮)。CD40不但在正常的免疫细胞上表达，还可以在许多恶性细胞上表达。例如，CD40在以下疾病中过表达：B系NHL、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、多毛细胞白血病(HCL)、霍奇金病(UckunFM，etal.Blood1990；76：2449-2456；O’GradyJT，etal.AmJPathol1994；144：21-26)、多发性骨髓瘤(Pellat-DeceunynckC,etal.Blood1994；84(8)：2597-2603)以及膀胱癌、肾癌、卵巢癌、宫颈癌、乳腺癌、肺癌、鼻咽癌、恶性黑色素瘤(YoungLS,etal.ImmunolToday1998；19：502-506；ZieboldJL,etal.ArchImmunolTherExp(Warsz)2000；48：225-233；GladueR,etal.JClinOncol2006；2(18S)：103s)等。在许多情况下，抗体结合了肿瘤细胞表面上CD40分子后，能介导直接的细胞毒作用，通过细胞凋亡和细胞坏死使肿瘤退缩(GrewalIS，etal.AnnuRevImmunol1998；16：111-135；以及vanKootenC，etal.JLeukocBiol2000；67(1)：2-17)。除了直接的肿瘤抑制之外，CD40信号激活还解救了荷瘤宿主中抗原呈递细胞的功能，并触发或恢复了针对肿瘤相关抗原的活化的免疫应答。据报道，CD40激动剂能克服荷瘤小鼠内的T细胞耐受，激起针对肿瘤相关抗原的有效的细胞毒T细胞应答，并增强抗肿瘤疫苗的效力(EliopoulosAG，etal.MolCellBiol2000；20(15)：5503-5515；TongAW，etal.ClinCancerRes2001；7(3)：691-703)。因此开发CD40靶向抗体将有望用于治疗包括肿瘤在内的CD40相关疾病。
技术实现思路
第一方面，本申请提供了一种特异性结合CD40的抗体或其抗原结合部分，其包含重链可变区，所述重链可变区包含HCDR1,HCDR2和/或HCDR3。在一些实施方案中，上述HCDR1序列包含SEQIDNO:1所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，上述HCDR2序列包含SEQIDNO:2或3所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，上述HCDR3序列包含SEQIDNO:4的氨基酸序列。在可选的实施方案中，上述抗原结合部分选自Fab片段、Fab’片段、F(ab’)2片段、Fv片段、scFv片段、Fd片段和单域抗体。在一些实施方案中，特异性结合CD40的抗体或其抗原结合部分还包含轻链可变区，其中所述轻链可变区包含LCDR1、LCDR2和/或LCDR3序列。在某些实施方案中，所述LCDR1序列包含SEQIDNO:5的氨基酸序列。在某些实施方案中，所述LCDR2序列包含SEQIDNO:6的氨基酸序列。在某些实施方案中，所述LCDR3序列包含SEQIDNO:7的氨基酸序列。在一些实施方案中，特异性结合CD40的抗体或其抗原结合部分的重链包含选自SEQIDNOs:20-24任一项的氨基酸序列或者与上述序列具有至少80％同源性的氨基酸序列，优选地，所述重链包含SEQIDNO:23所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，上述抗体或其抗原结合部分的轻链包含SEQIDNOs:25-30任一项的氨基酸序列或者与上述序列具有至少80％同源性的氨基酸序列，优选地，所述轻链包含选自SEQIDNOs:26和30所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，第一方面所述的特异性结合CD40的抗体为单克隆抗体。在一些实施方案中，第一方面所述的特异性结合CD40的抗体为人源化抗体。在优选的实施方案中，所述抗体为抗人IgG4亚型CD40单克隆抗体。在一些实施方案中，本文公开的抗CD40抗体或其抗原结合部分与抗体Hu1D7-11或Hu1D7-15结合CD40上的相同表位，或者与人CD40配体(CD40L，或CD154)竞争结合于CD40。在一些实施方案中，所述抗体的重链序列如SEQIDNO:23所示，以及所述轻链序列如SEQIDNOs:26或30所示。在一些实施方案中，本文公开的抗体或其抗原结合部分能够诱导树突状细胞的成熟。在一些实施方案中，本文公开的抗体或其抗原结合部分能够诱导T淋巴细胞活化。第二方面，本申请提供了核苷酸分子，所述核苷酸分子编码第一方面所述的特异性结合CD40的抗体或其抗原结合部分。第三方面，本申请提供了表达载体，所述表达载体含有第二方面所述的核苷酸分子。第四方面，本申请提供了宿主细胞，所述宿主细胞含有第三方面所述的表达载体。第五方面，本申请提供了药物组合物，所述组合物包含第一方面所述的抗CD40抗体或其抗原结合部分以及药学上可接受的载体。第六方面，本申请提供了疫苗，其包含第一方面所述的抗CD40抗体或其抗原结合部分，以及任选的免疫佐剂。在一些实施方案中，所述组合物或疫苗用于治疗CD40相关的疾病。第七方面，本申请提供了第一方面所述的抗CD4本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.特异性结合CD40的抗体或其抗原结合部分，其包含重链可变区HCDR1,HCDR2和/或HCDR3，其中所述HCDR1序列包含氨基酸序列DYYMY(SEQ ID NO:1)；所述HCDR2序列包含氨基酸序列YINNGGDSTHYPDIVKG(SEQ ID NO:2)或YINNAGDSTHYPDIVKG(SEQ ID NO:3)；和/或所述HCDR3序列包含氨基酸序列LGPGQGGWYFDV(SEQ ID NO:4)；优选地，所述抗原结合部分选自Fab片段、Fab’片段、F(ab’)2片段、Fv片段、scFv片段、Fd片段和单域抗体。

【技术特征摘要】
1.特异性结合CD40的抗体或其抗原结合部分，其包含重链可变区HCDR1,HCDR2和/或HCDR3，其中所述HCDR1序列包含氨基酸序列DYYMY(SEQIDNO:1)；所述HCDR2序列包含氨基酸序列YINNGGDSTHYPDIVKG(SEQIDNO:2)或YINNAGDSTHYPDIVKG(SEQIDNO:3)；和/或所述HCDR3序列包含氨基酸序列LGPGQGGWYFDV(SEQIDNO:4)；优选地，所述抗原结合部分选自Fab片段、Fab’片段、F(ab’)2片段、Fv片段、scFv片段、Fd片段和单域抗体。2.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合部分，其中所述重链包含选自SEQIDNOs:20-24任一项的氨基酸序列或者与上述序列具有至少80％同源性的氨基酸序列，优选地，所述重链包含SEQIDNO:23所示的氨基酸序列。3.如权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合部分，其还包含轻链可变区，所述轻链可变区包含LCDR1、LCDR2和/或LCDR3序列，其中所述LCDR1序列包含氨基酸序列RASQDISYYLN(SEQIDNO:5)；所述LCDR2序列包含氨基酸序列YTSRLKS(SEQIDNO:6)；和/或所述LCDR3序列包含氨基酸序列QQGNTLPWT(SEQIDNO:7)。4.如权利要求3所述的抗体或其抗原结合部分，其中所述轻链包含选自SEQIDNOs:25-30任一项的氨基酸序列或者与上述序列具有至少80％同源性的氨基酸序列，优选地，所述轻链包含选自SEQIDNOs:26和3...

【专利技术属性】
技术研发人员：高新，王敏，史丽滨，刘玉杰，徐桂利，刘蕴慧，刘晶莹，窦晓倩，张春青，万德有，李宏杰，潘秀颉，徐勤枝，刘荷中，
申请(专利权)人：北京免疫方舟医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11