植物乳杆菌CQPC02在制备预防糖尿病的食品或药品中的应用制造技术

本发明专利技术公开了保藏编号为CGMCC NO.14491的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CQPC02在制备预防糖尿病的食品或药品中的应用，不仅扩大了植物乳杆菌CQPC02的应用范围，提高了其开发利用价值，而且给糖尿病的预防带来了新的希望。

Application of Lactobacillus plantarum CQPC02 in the preparation of food or medicine for preventing diabetes mellitus

The invention discloses the application of Lactobacillus plantarum CQPC02 with CGMCC NO. 14491 in the preparation of food or medicine for preventing diabetes, which not only enlarges the application scope of Lactobacillus plantarum CQPC02, improves its development and utilization value, but also brings new hope for the prevention of diabetes.

【技术实现步骤摘要】
植物乳杆菌CQPC02在制备预防糖尿病的食品或药品中的应用
本专利技术属于微生物
，涉及一种乳酸菌在制备食品或药品中的应用。
技术介绍
乳酸菌广泛存在于发酵食品、动物和人体体内。研究表明，乳酸菌与机体健康密切相关，具有提高免疫力、预防龋齿、缓解乳糖不耐受症和促进机体消化吸收等功能。此外其在提高食品营养价值、改善食品风味、延长保存时间和改善食品功能特性方面也发挥重要作用。为了更好的利用这些微生物资源，应开展更广泛的分离和鉴定工作，积累丰富的菌种资源，开发出丰富的工业用益生菌种类。四川泡菜的生产过程是将新鲜的泡菜洗净，密封于坛内，在盐水中厌氧发酵浸泡的泡菜。泡菜水中含有丰富的天然乳酸菌，对泡菜风味和品质的形成起着关键作用。其使用可溶性成分(主要是糖和含氮物质)进行增殖，产生酸性物质并代谢出风味成分，使泡菜产生独特的酸脆口味。糖尿病是一种以高血糖为主要特征的代谢性疾病，其发生与许多基因和环境因素有关。目前，随着人们生活方式和饮食结构的变化，其发病率逐年上升。据评估，2017年全球约4.25亿人患有糖尿病，其中，中国、印度和美国的20-79岁糖尿病患者人数最多(中国约1.144亿，印度约7290万，美国约3020万)。此外，如果糖尿病患者的病情未及时加以控制，其可能导致多种并发症，如肾脏病变、神经病变、视网膜病变、抑郁症、糖尿病酮症酸中毒、高血糖性高渗性状态和癌症等。据统计，糖尿病与心血管疾病、癌症、呼吸道疾病一起占据非传染性疾病过早死亡人数的80％以上，严重危害患者健康，给患者带来巨大困扰。因此，寻找能够预防糖尿病的方法具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于考察从泡菜水中分离得到的乳酸菌对糖尿病的作用效果，以开发功能保健制品。经研究，本专利技术提供如下技术方案：保藏编号为CGMCCNO.14491的植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)CQPC02在制备预防糖尿病的食品或药品中的应用。优选的，所述食品为发酵食品。优选的，所述发酵食品为乳酸菌奶饮料、发酵乳、乳粉或乳粉胶囊。植物乳杆菌CQPC02是从泡菜水中分离得到，于2017年8月4日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏编号为CGMCCNO.14491。本专利技术的植物乳杆菌CQPC02具有很好的抗胃酸能力，经pH3.0人工胃液处理3h后的存活率达到92.06％；在0.3％胆盐中该菌也可缓慢生长，生长效率达到无胆盐培养的17.3％。高脂饲料结合链脲佐菌素诱导糖尿病小鼠模型实验结果显示，植物乳杆菌CQPC02能够有效抑制糖尿病小鼠的血糖升高、减轻其肝脏损伤；能够显著降低血清中ALT、AST、MDA、TNF-α、INS、GC和GSP的水平，能够显著降低肝脏中IL-1β和TNF-α基因的表达水平并增加IRS-1、GLUT-4、SREBP-1c和PPARγ基因的表达水平。由此可见，植物乳杆菌CQPC02对糖尿病相关基因和糖尿病相关血清指标都具有明显的调节作用，对糖尿病具有较好的预防作用。本专利技术的有益效果在于：本专利技术提供了植物乳杆菌CQPC02在制备预防糖尿病的食品或药品中的应用，不仅扩大了植物乳杆菌CQPC02的应用范围，提高了其开发利用价值，而且给糖尿病的预防带来了新的希望。附图说明图1为植物乳杆菌CQPC02的菌落形态。图2为植物乳杆菌CQPC02的细胞形态。图3为植物乳杆菌CQPC02的16SrDNAPCR扩增产物的琼脂糖凝胶电泳图，其中M为DNA分子量标准，0为阴性对照，1为植物乳杆菌CQPC02。图4为实验各组小鼠口服葡萄糖耐受量。图5为实验各组小鼠肝脏病理学变化。图6为实验各组小鼠血清中相关因子水平。图7为实验各组小鼠肝脏中相关基因表达水平。图6和图7中，##表示与正常组比较存在显著差异(p<0.05)；**表示与模型组比较存在显著差异(p<0.05)。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本专利技术的优选实施例进行详细的描述。实施例1、植物乳杆菌CQPC02的分离与鉴定1、实验材料采自重庆市南岸区农家自然发酵泡菜水6份，分别吸取40mL泡菜水放入无菌离心管中，置于食品采样箱内，放于实验室4℃冰箱保存备用。2、乳酸菌的分离纯化分别取1mL泡菜水样品，用无菌生理盐水进行10倍梯度稀释至10-6，然后分别取10-4、10-5、10-63个梯度的稀释液100μL进行平板涂布，37℃培养24-48h，观察并记录菌落形态。挑取平板上不同形态的菌落进行划线分离，经37℃培养48h后，再次挑取平板上不同形态的单菌落进行划线分离，如此重复2至3次，直至得到形态一致的纯的单菌落。编号为CQPC02的菌株菌落形态如图1所示，菌落颜色多为白色或乳白色，形状为圆形，边缘整齐，表面湿润光滑。3、乳酸菌的初步鉴定挑取平板上的纯菌落接种于5mLMRS液体培养基中，37℃培养24h。取上述含菌培养基1mL于无菌离心管中，4000r/min离心10min后弃去上层培养基，菌体沉淀重悬于无菌生理盐水并进行革兰氏染色镜检，革兰氏染色镜检为阳性的初步鉴定为乳酸菌。编号为CQPC02的菌株革兰氏染色呈现阳性，在100倍油镜下，菌株细胞形态如图2所示，细胞杆状，成单、成对或者成链，不形成芽孢，两端圆形。4、乳酸菌DNA提取将已纯化的疑似目标菌株接种于MRS肉汤中，37℃培养18-24h后，采用细菌基因组DNA提取试剂盒进行DNA提取。提取的DNA放于-20℃冰柜保藏备用。5、基因组DNAPCR扩增及琼脂糖凝胶电泳检测取提取的DNA，PCR扩增16SrDNA，其中上游引物27F(5'－AGAGTTTGATCCTGGCTCAG－3'，SEQIDNo.1)1μL、下游引物1495R(5'－CTACGGCTACCTTGTTACGA－3'，SEQIDNo.2)1μL，2×TaqplusBuffer12.5μL、模板DNA1μL，用无菌ddH2O将体系补足至25μL。并以无菌超纯水替代模板DNA作为阴性对照。扩增条件为：94℃5min；94℃30s，55℃30s，72℃1min，共29个循环；最后72℃延伸5min。然后取5μL扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，琼脂糖浓度为1.5％，电泳条件为110V，45min。编号为CQPC02的菌株16SrDNA扩增产物的琼脂糖凝胶电泳检测结果如图3所示，阴性对照组的泳道无条带，表明PCR扩增过程中未受到污染；编号为CQPC02的菌株的泳道有一条长度约为1500bp的条带，符合预期扩增片段的长度。将编号为CQPC02的菌株的16SrDNA扩增产物委托北京擎科生物技术有限公司进行测序，测得序列如SEQIDNo.3所示。使用NCBI中的BLAST(BasicLocalAlignmentSearchTool)程序对测得序列进行同源性比对分析，结果显示，编号为CQPC02的菌株为乳酸菌中的植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)，其与GeneBank数据库中已知乳酸菌的同源性均达99％。6、乳酸菌体外抗性筛选(1)耐受0.3％胆盐的能力在MRS-THIO培养基(含0.2％巯基乙酸钠的MRS肉汤)中添加猪胆盐使其浓度为本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.保藏编号为CGMCC NO.14491的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CQPC02在制备预防糖尿病的食品或药品中的应用。

【技术特征摘要】
1.保藏编号为CGMCCNO.14491的植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)CQPC02在制备预防糖尿病的食品或药品中的应用。2.如权利要求1所述的植物乳杆菌CQPC02在制备预防...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵欣，陈孝勇，杜木英，周先容，
申请(专利权)人：重庆第二师范学院，
类型：发明
国别省市：重庆,50