一种利用UPLC特征图谱鉴别百部药材基源的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用UPLC特征图谱鉴别百部药材基源的方法，本发明专利技术先建立百部药材的特征图谱，通过对比分析，确定了鉴别百部药材基源的依据，该方法简单，重现性良好，准确可靠，UPLC的线性梯度洗脱的条件简单，便于操作，可用于百部药材基源的鉴别，为临床原料的控制提供了依据。

A Method for Identification of Base Sources of Radix Euphorbiae by UPLC Characteristic Atlas

The invention discloses a method for identifying the base sources of 100 medicinal materials by UPLC characteristic atlas. Firstly, the characteristic Atlas of 100 medicinal materials is established. Through comparative analysis, the basis for identifying the base sources of 100 medicinal materials is determined. The method is simple, reproducible, accurate and reliable. The linear gradient elution conditions of UPLC are simple and easy to operate, and can be used for identifying the base sources of 100 medicinal materials. The control of clinical raw materials provides a basis.

【技术实现步骤摘要】
一种利用UPLC特征图谱鉴别百部药材基源的方法
本专利技术属于药物分析及药物质量控制
，具体涉及一种利用UPLC特征图谱鉴别百部药材基源的方法。
技术介绍
百部为百部科植物直立百部(StemonasessilifoliaMiq.)、蔓生百部(StemonajaponicaMiq.)或对叶百部(StemonatuberosaLour.)的干燥块根。春、秋二季采挖，除去须根，洗净，置沸水中略烫或蒸至无白心，取出，晒干。百部具有润肺下气止咳，杀虫的作用。为治疗肺痨之要药，既能抑制结核杆菌而杀痨虫，以绝其根本，又能化痰止咳，滋阴润肺，肺阴充足，化源有利，使肺恢复宣肃功能，主治百咳、久咳不止、肺结核等。据中国药典2015版收载，百部为常见多基源中药，来源于百部科植物直立百部Stemonasessilifolia(Miq.)Miq.、蔓生百部Stemonajaponica(Bl.)Miq.或对叶百部StemonatuberosaLour.。查阅大量文献发现，百部因品种、产地不同，其主要化学成分的种类和含量有一定的差异。从结构类型的分布来看，对叶百部中以I型和II型生物碱为主，直立百部中II型生物碱较多，I型和IV型次之，蔓生百部中II型和IV型生物碱较多。在生物活性研究方面，I、II、III型生物碱均有止咳作用，但以I型最好。从文献研究结果，对叶百部品种较优。目前文献研究主要集中于百部药材或饮片的化学成分研究方面，而关于百部药材基源鉴别的研究较少。因此，有必要提供一种百部药材基源鉴别的方法。
技术实现思路
为了克服上述现有技术的不足，本专利技术的首要目的在于提供一种利用UPLC特征图谱鉴别百部药材基源的方法。本专利技术是通过以下技术方案实现：一种利用UPLC特征图谱鉴别百部药材基源的方法，包括如下步骤：(a)供试品溶液的制备：分别取对叶百部药材和直立百部药材，研细，取0.25g，精密称定，置10ml量瓶中，加入50-100％甲醇适量，超声处理10-30分钟，取出，放冷，用50-100％甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，即得；(b)参照物溶液的制备：取绿原酸对照品适量，加80％甲醇制成每1ml含绿原酸20μg，即得；再取对叶百部对照药材、直立百部对照药材0.5g，精密称定，置20ml量瓶中，加入80％甲醇适量，超声处理30min，取出，放冷，用80％甲醇定容至刻度，摇匀，用0.22um滤膜滤过，即得；(c)色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸为流动相B，按下表进行梯度洗脱；流速：0.25ml/min；柱温为25℃；检测波长为210nm；(d)特征图谱的建立：分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各1μl，注入超高效液相色谱仪，测定，采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”匹配，建立对叶百部药材和直立百部药材的特征图谱；(e)鉴别依据：将对叶百部药材和直立百部药材的特征图谱进行比较，对叶百部药材中确定具有8个特征峰，以峰3绿原酸峰为参照峰S峰，各特征峰的相对保留时间分别为：峰1：0.82、峰2：0.95、峰3：1.00、峰4：1.04、峰5：1.18、峰6：1.48、峰7：1.52、峰8：1.67，相对保留时间在规定值的±10％之内；直立百部药材中确定具有6个色谱峰，与对叶百部药材相比，缺少峰1和峰2，将峰1和峰2作为鉴别百部药材基源的依据；(f)鉴别：将待测百部样品与对叶百部与直立百部药材的特征图谱进行比较，确定百部药材基源；若待测百部样品色谱中具有峰1和锋2，则为对叶百部；若无峰1和锋2，则为直立百部。作为本专利技术进一步优选的技术方案，所述利用UPLC特征图谱鉴别百部药材基源的方法，还包括步骤(g)峰1和峰2的指认：采用UPLC-Q-TOF/MS方法进行测定，其中，液相条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：A：0.1％磷酸；B：乙腈；柱温：30℃；样品室温度：10℃；流速：0.30mL/min；进样体积：2μL，负离子模式；流动相流动梯度见下表：质谱条件：氮气作为质谱离子源的雾化、锥孔气；电喷雾负离子模式；毛细管电压：2.5KV；锥孔电压：40V；萃取锥孔电压：3V；离子源温度：100℃；脱溶剂气温度：350℃；反向锥孔气流：50L/h；脱溶剂气流速：600L/h；碰撞气流速：0.5mL/min；扫描时间：0.5s；扫描时间间隔：0.02s；质荷比范围：50–1200m/z；。本专利技术通过特征峰的指认，所述峰1的归属为新绿原酸，峰2的归属为3-香豆酰奎宁酸。本法通过对供试品溶液的制备条件进行了优化，对不同提取溶剂、不同提取方式、不同提取时间进行考察，优选的，步骤(a)供试品溶液的制备：分别取对叶百部药材和直立百部药材，研细，取0.25g，精密称定，置10ml量瓶中，加入80％甲醇适量，超声处理10分钟，取出，放冷，用80％甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，即得。作为本专利技术进一步优选的技术方案，所述的一种利用UPLC特征图谱鉴别百部药材基源的方法，还包括步骤(h)绿原酸的含量测定：采用超高液相色谱仪测定，其中，供试品溶液的制备为：取百部药材，研细，取粉末0.25g，精密称定，置10ml量瓶中，加入70％乙醇，超声处理10分钟，取出，放冷，用70％乙醇定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；柱温为25℃以下；流速为0.25ml/min；检测波长为325nm；理论塔板数按绿原酸计算应不低于10000；本专利技术与现有技术相比，具有如下有益效果：本专利技术先建立百部药材的特征图谱，通过对比分析，确定了鉴别百部药材基源的依据，该方法简单，重现性良好，准确可靠，UPLC的线性梯度洗脱的条件简单，便于操作，可用于百部药材基源的鉴别，为临床原料的控制提供了依据。附图说明图1为15批对叶百部药材特征图谱的叠加图；图2为对叶百部及直立百部药材基源鉴别图；具体实施方式下面通过具体实施方式来进一步说明本专利技术，以下实施例为本专利技术具体的实施方式，但本专利技术的实施方式并不受下述实施例的限制。1、仪器与试药仪器见表1、试剂见表2与试药见表3，药材信息见表4。表1仪器信息汇总表表2试剂信息汇总表表3试药信息汇总表表415批对叶百部药材产地信息备注：S1-S6是野生来源。2、色谱条件与供试品溶液的制备2.1供试品溶液的制备分别取对叶百部药材和直立百部药材，研细，取0.25g，精密称定，置10ml量瓶中，加入80％甲醇适量，超声处理10分钟，取出，放冷，用80％甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，即得；2.2参照物溶液的制备取绿原酸对照品适量，加80％甲醇制成每1ml含绿原酸20μg，即得；再分别取对叶百部对照药材、直立百部对照药材0.5g，精密称定，置20ml量瓶中，加入80％甲醇适量，超声处理(功率500W，频率40HKz)30min，取出，放冷，用80％甲醇定容至刻度，摇匀，用0.22um滤膜滤过，即得。2.3色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长为10cm，内径为2.1mm，粒径为1.6μm；)；以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸为流动相B，按下表规定进行梯度洗脱；流速：0.25ml/min；柱温本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种利用UPLC特征图谱鉴别百部药材基源的方法，其特征在于，包括如下步骤：(a) 供试品溶液的制备：分别取对叶百部药材和直立百部药材，研细，取0.25g，精密称定，置10ml量瓶中，加入50‑100%甲醇适量，超声处理10‑30分钟，取出，放冷，用50‑100%甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，即得；(b) 参照物溶液的制备：取绿原酸对照品适量，加80%甲醇制成每1ml含绿原酸20µg，即得；分别再取对叶百部对照药材、直立百部对照药材0.5g，精密称定，置20ml量瓶中，加入80%甲醇适量，超声处理30min，取出，放冷，用80%甲醇定容至刻度，摇匀，用0.22um滤膜滤过，即得；(c) 色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.1%磷酸为流动相B，按下表进行梯度洗脱；流速：0.25ml/min；柱温为25℃；检测波长为210nm；

【技术特征摘要】
1.一种利用UPLC特征图谱鉴别百部药材基源的方法，其特征在于，包括如下步骤：(a)供试品溶液的制备：分别取对叶百部药材和直立百部药材，研细，取0.25g，精密称定，置10ml量瓶中，加入50-100%甲醇适量，超声处理10-30分钟，取出，放冷，用50-100%甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，即得；(b)参照物溶液的制备：取绿原酸对照品适量，加80%甲醇制成每1ml含绿原酸20µg，即得；分别再取对叶百部对照药材、直立百部对照药材0.5g，精密称定，置20ml量瓶中，加入80%甲醇适量，超声处理30min，取出，放冷，用80%甲醇定容至刻度，摇匀，用0.22um滤膜滤过，即得；(c)色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.1%磷酸为流动相B，按下表进行梯度洗脱；流速：0.25ml/min；柱温为25℃；检测波长为210nm；（d）特征图谱的建立：分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各1µl，注入超高效液相色谱仪，测定，采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”匹配，建立对叶百部药材和直立百部药材的特征图谱；（e）鉴别依据：将对叶百部药材和直立百部药材的特征图谱进行比较，对叶百部药材中确定具有8个特征峰，以峰3绿原酸峰为参照峰S峰，各特征峰的相对保留时间分别为：峰1：0.82、峰2：0.95、峰3：1.00、峰4：1.04、峰5：1.18、峰6：1.48、峰7：1.52、峰8：1.67，相对保留时间在规定值的±10%之内；直立百部药材中确定具有6个色谱峰，与对叶百部药材相比，缺少峰1和峰2，将峰1和峰2作为鉴别百部药材基源的依据；（f）鉴别：将待测百部样品与对叶百部与直立百部药材的特征图谱进行比较，确定百部药材基源；若待测百部样品色谱中具有峰1和锋2，则为对叶百部；若无峰1和锋2，则为直立百部。2.根据权利要求1所述的一种利用UPLC特征图谱鉴别百部药材基源的方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：谭吉娇，陈菊英，彭劲源，张文芳，林碧珊，赵淑晶，陈向东，
申请(专利权)人：广东一方制药有限公司，国药集团广东环球制药有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44