一种荧光探针检测肌氨酸、肌氨酸氧化酶及其浓度的方法技术

本发明专利技术提供了一种荧光探针检测肌氨酸、肌氨酸氧化酶及其浓度的方法。采用肌氨酸和肌氨酸氧化酶反应原位制备荧光功能铜纳米簇，利用是否产生荧光的结果检测待测物中是否含有肌氨酸(和/或肌氨酸氧化酶)，利用铜纳米簇的荧光强度可以定量检测肌氨酸(和/或肌氨酸氧化酶)的浓度，实现荧光铜纳米簇在荧光法检测肌氨酸和/或肌氨酸氧化酶中的应用。该方法避免了生物体其他氨基酸的干扰，可以选择性和无创地检测尿液、汗液、血液中肌氨酸的浓度；并利用荧光turn‑on的方法检测肌氨酸的浓度，避免了实验中的假信号可能带来的干扰；生成的铜纳米簇具有优良的荧光性质，在生物医学等领域具有重要的应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种荧光探针检测肌氨酸、肌氨酸氧化酶及其浓度的方法
本专利技术属于肌氨酸检测的应用
，具体涉及一种基于原位制备的铜纳米簇作为荧光探针检测肌氨酸和/或肌氨酸氧化酶的方法。采用铜纳米簇荧光法检测肌氨酸浓度的方法、采用铜纳米簇荧光法检测肌氨酸氧化酶浓度的方法以及采用铜纳米簇荧光法检测样品中是否含有肌氨酸或肌氨酸氧化酶的方法，尤其涉及一种荧光铜纳米簇在荧光法检测肌氨酸和/或肌氨酸氧化酶中的应用。
技术介绍
金属纳米簇是一种特殊材料，尺寸介于金属原子和纳米粒子之间。当金属本体材料的尺寸降到纳米级别甚至接近于电子费米水平，原来连续的能带就会分裂成若干个分立能级，这些分立能级导致了纳米簇具有可调的激发，良好的水溶性，光稳定性和低毒性等特点。因此纳米簇在生物小分子检测领域具有很高的应用价值。肌氨酸又称为肌酸，是一种在肝脏产生的酸性物质，其作用是给人体肌肉群提供能量。肌氨酸最常见于脊椎动物。大多数身体产生的肌氨酸存储在支持骨骼的肌肉里。尿液中肌氨酸浓度的异常通常可以诊断重大疾病，如前列腺癌等，因此，在生命科学和临床医学中肌氨酸检测是十分重要的。目前，文献中记载的检测肌氨酸的方法大多是通过质谱或电本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种荧光探针检测肌氨酸、肌氨酸氧化酶及其浓度的方法，具体步骤如下：(1)取3500～4000μL不同浓度梯度的肌氨酸溶液(100～2000μM)，分别将其与100～500μL浓度为1mg/mL的肌氨酸氧化酶(SOx)共混；然后置于40～45℃水浴锅中温育2～3h；(2)在上述步骤(1)的各种浓度的溶液中，依次加入柠檬酸缓冲溶液(浓度为1mM,pH＝3.0)100～500μL,甲基丙烯酸100～400μL(浓度为40mM)，FeSO4 10～100μL(浓度为50mM)；震荡摇匀，室温下反应10～120min；之后用分子量为500～1500Da的透析袋透析12～24h；(3)取步骤(2)制得...

【技术特征摘要】
1.一种荧光探针检测肌氨酸、肌氨酸氧化酶及其浓度的方法，具体步骤如下：(1)取3500～4000μL不同浓度梯度的肌氨酸溶液(100～2000μM)，分别将其与100～500μL浓度为1mg/mL的肌氨酸氧化酶(SOx)共混；然后置于40～45℃水浴锅中温育2～3h；(2)在上述步骤(1)的各种浓度的溶液中，依次加入柠檬酸缓冲溶液(浓度为1mM,pH＝3.0)100～500μL,甲基丙烯酸100～400μL(浓度为40mM)，FeSO410～100μL(浓度为50mM)；震荡摇匀，室温下反应10～120min；之后用分子量为500～1500Da的透析袋透析12～24h；(3)取步骤(2)制得的溶液500μL，依次加入Cu(NO3)2100～500μL(100mM)，醋酸缓冲溶液50～100μL(pH＝4.0～5.0)，并震荡混合均匀；将样品置于波长为256nm的紫外光下辐照2～10分钟，得到铜纳米簇最终溶液；当最终溶液含有具有荧光强度的铜纳米簇时，所述待测样品中含有肌氨酸；当最终溶液不含有具有荧光强度的铜纳米簇时，所述待测样品中不含有肌氨酸；(4)重复步骤(1)～(3)，测量不同浓度下的肌氨酸，测试铜纳米簇最终溶液的荧光发射光谱；建立铜纳米簇最终溶液的荧光强度的数值与肌氨酸浓度的定量关系曲线，作为铜纳米簇的荧光强度与肌氨酸浓度的工作曲线；将肌氨酸溶液替换为待测样品后，按照步骤(1)～(3)进行，得到具有一定荧光强度的铜纳米簇的待测样品溶液，根据待测样品溶液中铜纳米簇的荧光强度，关...

【专利技术属性】
技术研发人员：林权，赵月，刘厚，陈阳，杨喆，张川，赵玥琪，杨柏，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：吉林,22