巢式PCR特异性引物对、试剂盒及其制备方法和在辅助鉴定Ln基因编辑材料中的应用技术

本发明专利技术公开了一种基因编辑创制大豆窄叶型种质的方法及相关鉴定方法，包括向目的大豆中导入大豆基因组编辑的载体，在W82的基因组上对Ln(Glyma.20g25000)基因进行编辑，在Ln基因的编码区敲除了4个碱基，使Ln基因发生隐性突变为ln得到窄叶大豆，将其命名为ZH609；大豆基因组编辑的载体含有Cas蛋白基因、sgRNA编码基因。采用上述方法能够实现对大豆定点基因编辑，获得具有窄叶性状的大豆，具有较高育种价值。本发明专利技术还公开了一种巢式PCR特异性引物对和具有其的试剂盒及其制备方法和应用，利用特异性PCR引物扩增的方法，简便快捷地进行鉴定，从而达到了简便易行且经济实用地鉴定Ln基因编辑材料和W82、ZP661等含Ln基因的常规品种，或检测Ln基因编辑材料后代纯杂合情况的目的。

【技术实现步骤摘要】
巢式PCR特异性引物对、试剂盒及其制备方法和在辅助鉴定Ln基因编辑材料中的应用
本专利技术涉及巢式PCR特异性引物对和具有其的试剂盒及其制备方法和在辅助鉴定Ln基因编辑材料中的应用，属于生物

技术介绍
大豆是我国仅次于玉米、小麦和水稻的第四大作物，是我国主要的粮食和油料作物之一。由于大豆具有极高营养价值、高生理活性和广泛工业用途，世界对大豆的需求日益增加。大豆产业的发展对解决世界性植物蛋白短缺，改善食物结构，发展有机农业，减少能源消耗和环境污染，具有战略意义。过去一个多世纪，虽然全球大豆的产量保持持续增长的趋势，但仍然无法满足人类对大豆日益增长的需求，提高大豆产量潜力一直是大豆育种的重要任务。大豆的产量是由单位面积株数、每株荚数、每荚粒数和粒重构成。以上四个产量构成因素中任何一个因素发生变化都会引起产量的增减。周新安等研究发现在一定范围内增加每荚粒数，是提高大豆单产的一条有效途径(周新安等，Relationofthree-seedandfour-seedpodswithyieldofRILinsoybeans)。大豆是短日照植物，对反应较敏感，边际大豆植株透光性好，单株产量本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种巢式PCR特异性引物对，其特征在于，所述巢式PCR特异性引物对为Ln‑F9/Ln‑R4或Ln‑F4/Ln‑R2；序列为：Ln‑F9：GCCCGATGAGTACTCTAGAG；Ln‑R4：TCCAAACGATCCTGTGCACCTG；Ln‑F4：CCATGCAGCGATTCTCTTCC；Ln‑R2：CCTTGTGCTCTCTCCTCCAA。

【技术特征摘要】
1.一种巢式PCR特异性引物对，其特征在于，所述巢式PCR特异性引物对为Ln-F9/Ln-R4或Ln-F4/Ln-R2；序列为：Ln-F9：GCCCGATGAGTACTCTAGAG；Ln-R4：TCCAAACGATCCTGTGCACCTG；Ln-F4：CCATGCAGCGATTCTCTTCC；Ln-R2：CCTTGTGCTCTCTCCTCCAA。2.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的巢式PCR特异性引物对。3.根据权利要求2所述试剂盒，其特征在于，所述巢式PCR特异性引物对中各条引物独立设置。4.一种权利要求1所述的巢式PCR特异性引物对在辅助鉴定Ln基因编辑材料ZH609和野生型材料W82、ZP661，或，辅助鉴定Ln基因编辑材料后代纯杂合情况中的应用。5.一种辅助鉴定Ln基因编辑材料ZH609和野生型材料W82、ZP661的方法，其特征在于，包括以下步骤：以待测大豆的基因组DNA为模板，将DNA浓度稀释成80ng/uL，用权利要求2所述的试剂盒对待测大豆进行巢式PCR第一轮扩增；取第一轮PCR产物1uL进行巢式PCR第二轮扩增，用HphI酶对巢式PCR产物进行酶切，扩增产物为475bp片段，以HphI酶对巢式PCR产物进行酶切，野生型材料W82、ZP661分别被切割成355bp和120bp片段，Ln基因编辑材料ZH609不能被切开，以此鉴定Ln基因编辑材料ZH609和野生型材料W82、ZP661。6.根据权利要求5所述的一种辅助鉴定Ln基因编辑材料ZH609和W82、ZP661的方法，其特征在于，所述巢式PCR第一轮扩增的条件为：DNA2uL，KODplusNeo0.5u...

【专利技术属性】
技术研发人员：邱丽娟，文静，郭勇，郭兵福，
申请(专利权)人：中国农业科学院作物科学研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11