鼠抗曲霉菌多糖杂交瘤细胞株，单克隆抗体及应用制造技术

本发明专利技术提供一种鼠抗曲霉菌多糖杂交瘤细胞株，曲霉菌多糖单克隆抗体及在试剂盒中的应用。本发明专利技术的有益效果是：本发明专利技术通过小鼠杂交瘤单克隆抗体筛选及RT‑PCR法克隆Ig可变区基因，获得稳定分泌抗曲霉菌多糖抗体的杂交瘤及其可变区序列，并用ELISA方式对抗体结合特异性进行了鉴定，为抗曲霉菌多糖基因工程抗体的研发奠定了基础；该鼠源性曲霉菌多糖单克隆抗体与曲霉菌多糖具有高效价，且结合特异性强，可用于曲霉菌多糖的检测。

【技术实现步骤摘要】
鼠抗曲霉菌多糖杂交瘤细胞株，单克隆抗体及应用
本专利技术属于抗体的制备及序列测定领域，尤其是涉及一种鼠抗曲霉菌多糖杂交瘤细胞株，单克隆抗体及应用。
技术介绍
真菌感染尤其是深部真菌感染所引起的疾病称为真菌病。自然界真菌种类很多，与细菌相比，对人致病者相对较少。但是近年来由于广谱抗生素、肾上腺皮质激素和免疫抑制剂的大量临床应用，真菌感染有明显增长趋势。而目前作为诊断真菌病的基本方法包括：临床表现，真菌学、免疫学和病理学。最直接的方法是能够证明真菌存在于组织中，或在渗出物中可分离培养。但是由于大量广谱抗生素的广泛使用，其培养阳性率也是很低。烟曲霉(Aspergillufumigatus，A.fumigatus)在自然界中广泛分布，其分生孢子漂浮在空气中，通过呼吸道进入人体，主要引起肺部感染，其次是颅内感染、外耳病、鼻窦炎，偶有通过皮肤、腹膜、肾、骨、眼睛及消化道感染的报道。其中，曲霉特别是烟曲霉已经逐渐成为临床上一种重要的致病真菌。侵入性曲霉致病的两个主要风险因素为中性粒细胞的减少和皮质激素的使用。感染所致侵袭性肺曲霉菌病是引起高危患者(如中性粒细胞减少症、造血干细胞移植、长期高剂量使用激素和血液恶性肿瘤等免疫力低下患者)致死性感染的主要原因。十多年前，一项大规模前瞻性临床试验，依照欧洲癌症研究和治疗组织和真菌病研究组(EORTC/MSG)的推荐诊断标准，通过连续检测血清GM抗原诊断成人中性粒细胞减少患者中侵袭性曲霉菌的发病情况，第一次验证了GM试验是成人IA发病检测指标的金标准。GM试验是帮助早期发现侵袭性曲霉菌感染的有效检测手段，是特异性检测血清中或组织液中的曲霉菌半乳甘露聚糖抗原，由于GM量的多少与组织中真菌含量密切相关，因此检测GM抗原不仅可以帮助临床早期发现IA并早期进行干预，还可以对治疗效果进行监测和评估，同时对患者的临床结局起到提示作用。
技术实现思路
为解决上述技术问题，本专利技术提供一种鼠抗曲霉菌多糖杂交瘤细胞株，单克隆抗体及应用。本专利技术采用的技术方案是：鼠抗曲霉菌多糖杂交瘤细胞株，命名为3G3，其微生物保藏编号是CGMCCNo.16813。鼠抗曲霉菌多糖单克隆抗体，包含重链可变区序列和轻链可变区序列；重链可变区序列的CDR区中包含三个序列，分别为：SEQIDNO:1GFDFSRYWMS(CDRH1)SEQIDNO:2EINPDSSTINYTPSLKD(CDRH2)SEQIDNO:3NSYGTLDY(CDRH3)轻链可变区序列的CDR区中包含三个序列，分别为：SEQIDNO:4WASQSISNSLH(CDRL1)SEQIDNO:5FASQSIS(CDRL2)SEQIDNO:6QQGHTWPHT(CDRL3)优选地，由保藏编号是CGMCCNo.16813的鼠抗曲霉菌多糖杂交瘤细胞株产生。优选地，重链可变区序列如SEQIDNO:7所示，轻链可变区序列如SEQIDNO:8所示。SEQIDNO:7QVELQESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFDFSRYWMSWVRQAPGKGLEWIGEINPDSSTINYTPSLKDKFIISRDNAKHTLYLQMSKVRSEDTALYYCARNSYGTLDYWGQGTALTVSSSEQIDNO:8DIVLTQSPATLSVTPGDSVSLSCWASQSISNSLHWYQQKSHESPRLLIKFASQSISGIPSRFSGSGSGTDFTLSIDSVETEDFGMYFCQQGHTWPHTFGAGTKLELKRA一种核苷酸分子，核苷酸分子包含编码曲霉菌多糖单克隆抗体的核苷酸序列。优选地，核苷酸分子编码曲霉菌多糖单克隆抗体的重链可变区的核苷酸序列如SEQIDNO:9所示，核苷酸分子编码曲霉菌多糖单克隆抗体的轻链可变区的核苷酸序列如SEQIDNO:10所示。SEQIDNO:9GGAGGTGGCCTGGTGCAGCCTGGAGGATCCCTGAAACTCTCCTGTGCAGCCTCAGGATTCGATTTTAGTAGATACTGGATGAGTTGGGTCCGGCAGGCTCCAGGGAAAGGGCTAGAATGGATTGGAGAAATTAATCCAGATAGCAGTACGATAAACTATACGCCTTCTCTAAAGGATAAATTCATCATCTCCAGAGACAACGCCAAACATACGCTGTACCTGCAAATGAGCAAAGTGAGATCTGAGGACACAGCCCTTTATTACTGTGCAAGAAATTCCTACGGTACCCTGGACTACTGGGGCCAAGGCACCGCTCTCACAGTCTCCTCASEQIDNO:10GATATTGTGCTAACTCAGTCTCCAGCCACCCTGTCTGTGACTCCAGGAGATAGCGTCAGTCTTTCCTGCTGGGCCAGCCAAAGTATTAGCAACAGCCTACACTGGTATCAACAAAAATCACATGAGTCTCCAAGGCTTCTCATCAAGTTTGCTTCCCAGTCCATCTCTGGGATCCCCTCCAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACTCTCAGTATCGACAGTGTGGAGACTGAAGATTTTGGAATGTATTTCTGTCAACAGGGTCACACCTGGCCTCACACGTTCGGTGCTGGGACCAAGCTGGAGCTGAAACGGGCT一种检测曲霉菌抗原试剂盒，包含鼠抗曲霉菌多糖单克隆抗体。本专利技术具有的优点和积极效果是：1、本专利技术通过小鼠杂交瘤单克隆抗体筛选及RT-PCR法克隆Ig可变区基因，获得稳定分泌抗曲霉菌多糖抗体的杂交瘤及其可变区序列，并用ELISA方式对抗体结合特异性进行了鉴定，为抗曲霉菌多糖基因工程抗体的研发奠定了基础。2、本专利技术提供的鼠源性曲霉菌多糖单克隆抗体，其腹水与曲霉菌多糖反应效价高达1×106，且结合特异性强，不与荚膜多糖、甘露聚糖、肽聚糖、脂多糖、1，3-β-葡聚糖产生交叉反应，基于这些特性此单克隆抗体可用于曲霉菌多糖的检测。附图说明图1为抗体3G3的效价测定图；图2为抗体3G3的交叉反应图。具体实施方式下面结合附图对本专利技术的一个实施例做出说明。本专利技术涉及鼠抗曲霉菌多糖杂交瘤细胞株，生物材料命名为3G3，属杂交瘤细胞，其微生物保藏编号是CGMCCNo.16813，保藏地为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏日期为2018年11月22日，检测为存活。1鼠抗曲霉菌多糖单克隆抗体由鼠抗曲霉菌多糖杂交瘤细胞株产生的鼠抗曲霉菌多糖单克隆抗体，包含重链可变区序列和轻链可变区序列；其中，重链可变区序列的CDR区中包含三个序列，分别为：SEQIDNO:1GFDFSRYWMS(CDRH1)SEQIDNO:2EINPDSSTINYTPSLKD(CDRH2)SEQIDNO:3NSYGTLDY(CDRH3)轻链可变区序列的CDR区中包含三个序列，分别为：SEQIDNO:4WASQSISNSLH(CDRL1)SEQIDNO:5FASQSIS(CDRL2)SEQIDNO:6QQGHTWPHT(CDRL3)具体地，重链可变区序列如SEQIDNO:7所示，轻链可变区序列如SEQIDNO:8所示。SE本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.鼠抗曲霉菌多糖杂交瘤细胞株，其特征在于：命名为3G3，其微生物保藏编号是CGMCC No.16813。

【技术特征摘要】
1.鼠抗曲霉菌多糖杂交瘤细胞株，其特征在于：命名为3G3，其微生物保藏编号是CGMCCNo.16813。2.一种鼠抗曲霉菌多糖单克隆抗体，其特征在于：包含重链可变区序列和轻链可变区序列；所述重链可变区序列的CDR区中包含三个序列，分别如SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3所示；所述轻链可变区序列的CDR区中包含三个序列，分别如SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6所示。3.根据权利要求2所述的鼠抗曲霉菌多糖单克隆抗体，其特征在于：由保藏编号是CGMCCNo.16813的鼠抗曲霉菌多糖杂交瘤细胞株产生。4.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：苑庆华，何永胜，张桐嘉，樊琳琳，王玉芳，臧丹戎，黄炎彬，王兴，
申请(专利权)人：天津一瑞生物科技股份有限公司，天津喜诺生物医药有限公司，北京金山川科技发展有限公司，北海市兴龙生物制品有限公司，一瑞上海生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：天津,12