本发明专利技术提供了一种分泌鸡白痢沙门菌IpaJ单克隆抗体的杂交瘤细胞株、其单克隆抗体及其应用。本发明专利技术的分泌鸡白痢沙门菌IpaJ单克隆抗体的杂交瘤细胞株保藏在中国典型培养物保藏中心。本发明专利技术的杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体具有效价高、特异性好、与天然抗原亲和力强的优势，基于此建立的鸡白痢沙门菌IpaJ单克隆抗体竞争ELISA检测方法具有较好的灵敏度和特异性，用作鸡机体免疫状态的评价及感染性疾病相关的研究。
【技术实现步骤摘要】
分泌鸡白痢沙门菌IpaJ单克隆抗体的杂交瘤细胞株、其单克隆抗体及其应用
本专利技术涉及分泌鸡白痢沙门菌IpaJ单抗的杂交瘤细胞株、其分泌的单克隆抗体及其在免疫检测领域的应用。
技术介绍
鸡白痢沙门菌是一种重要的宿主特异性沙门菌，感染雏鸡可引起鸡白痢，对家禽养殖产业造成严重的经济损失。该病原菌的特点是在雏鸡中死亡率最高，而被感染的成年鸡虽不表现出明显的临床症状，但可表现出体重减轻、产蛋量下降、痢疾、生殖系统损伤和畸形等，且细菌可长期持续存在于康复的宿主体内。截止目前，尚无简单、快速、特异性强和低成本检测鸡白痢沙门菌的有效方法。酶联免疫吸附试验(Enzyme-linkedImmunosorbentAssay，简称ELISA)技术具有高度的敏感性和应用广泛性，已成为近年来最吸引人的免疫检测方法之一，在疫苗的研发、临床诊断以及基础研究等方面得到广泛应用。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种分泌鸡白痢沙门菌IpaJ单克隆抗体的杂交瘤细胞株，该杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体，以及该杂交瘤细胞株及其分泌的单克隆抗体在免疫检测领域的应用。本专利技术一方面提供了一种分泌鸡白痢沙门菌IpaJ单克隆抗体的杂交瘤细胞株，于2018.6.13保藏于中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏编号为CCTCCNO:C2018145，保藏地址为中国.武汉.武汉大学，分类命名为：杂交瘤细胞株SP-4G6。本专利技术第二方面提供了一种鸡白痢沙门菌IpaJ单克隆抗体，由前述的杂交瘤细胞株或其传代细胞株分泌产生。一种鸡白痢沙门菌IpaJ单克隆抗体，包括抗体重链和抗体轻链；抗体重链中，HCDR1氨基酸序列为：GYYIH(SEQIDNO.5)，HCDR2氨基酸序列为：WIVPENGDTEYAPKFQG(SEQIDNO.6)，HCDR3氨基酸序列为：YGRGYAL(SEQIDNO.7)；抗体轻链中，LCDR1氨基酸序列为：RSSQSIVHSNGNTYLQ(SEQIDNO.8)，LCDR2氨基酸序列为：KVSNRFS(SEQIDNO.9)，LCDR3氨基酸序列为：FQGSHVPRT(SEQIDNO.10)。本专利技术第三方面提供了前述分泌鸡白痢沙门菌IpaJ单克隆抗体的杂交瘤细胞株及前述鸡白痢沙门菌IpaJ单克隆抗体在制备鸡机体免疫状态的检测试剂中的应用。本专利技术第四方面提供了一种鸡白痢沙门菌IpaJ的竞争ELISA检测试剂，所述试剂包括：1、酶标板、酶标抗体、包被抗原和鸡血清；所述竞争抗体杂交瘤细胞株SP-4G6或其传代细胞株分泌产生。2、生物素标记鸡白痢沙门菌IpaJ单克隆抗体所述检测方法中，酶标板可以预先包被有检测抗原，也可以提供空白酶标板与检测抗原，在检测前由操作者自行采用常规方法在酶标板上包被检测抗原。所述酶标板可为各种常见规格的酶标板，如96孔酶标板。所述生物素标记鸡白痢沙门菌IpaJ单克隆抗体中的鸡白痢沙门菌IpaJ单克隆抗体可以不同于前述竞争抗体。生物素标记鸡白痢沙门菌IpaJ单克隆抗体的制备方法采用常规技术。进一步优选的，所述生物素标记鸡白痢沙门菌IpaJ单克隆抗体中的鸡白痢沙门菌IpaJ单克隆抗体由杂交瘤细胞株SP-4G6或其传代细胞株分泌产生。进一步的，所述试剂还包括下列试剂中的一种或多种：1)亲和素-辣根过氧化物酶结合物；2)显色底物液；3)洗涤液。上述试剂均为ELISA检测中的通用试剂，不受具体检测项目的限制，因此即可根据需要有选择地选用。所述底物液可为ELISA检测试剂盒中常用的通用底物液，如3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)底物液。所述洗涤液可为ELISA检测试剂盒中常用的洗涤液，如磷酸盐缓冲液等。可以根据需要选用浓缩或未浓缩的洗涤液。所述封闭液可为包被酶标板常用的封闭液，如FBS、BSA等。通常情况下，本专利技术的试剂中，各试剂分别隔离储存。本专利技术进一步基于上述鸡白痢沙门菌IpaJELISA检测方法，建立了具有较好特异性和灵敏度的鸡白痢沙门菌IpaJ的ELISA检测方法，用于检测感染鸡体内鸡白痢沙门菌的IpaJ含量，从而进行机体免疫状态评价。利用本专利技术的检测方法检测鸡血清中IpaJ抗体的检测方法包括以下步骤：1)检测抗原包被酶标板；①PBST洗涤酶标板3次，3-5min/次；②2％BSA200μL/孔，37℃孵育2h；③PBST洗涤酶标板3次，3-5min/次；2)样品孵育及检测①在上述检测抗原包被的酶标板中加入HRP酶标抗体和鸡血清，各100μL/孔，37℃孵育2h；②弃去样品反应液，PBST洗涤7次，每次30s-1min，③加入显色底物TMB，100μL/孔，37℃孵育10min。④加入终止液2MH2SO4，50μL/孔，使用酶标仪于OD450波长下测定吸光值。相对于现有技术，本专利技术的有益效果为：本专利技术的杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体具有效价高、特异性好、与天然抗原亲和力较强的优势，基于此建立的鸡白痢沙门菌IpaJ单抗竞争ELISA检测方法，在检测鸡白痢沙门菌接种的鸡血清时，阳性样品的OD值显著低于对照样品，表明该检测方法可以有效检测到天然鸡白痢沙门菌IpaJ单克隆抗体，具有较好的灵敏度和特异性。此外，基于此建立鸡白痢沙门菌IpaJ单抗检测方法，在检测鸡血清时，鸡白痢沙门菌阳性样品孔OD值显著低于其他血清沙门菌，表明该检测方法具有较好的灵敏度和特异性。本专利技术的检测方法操作简便，极大缩短了检测时间，可以应用于免疫学研究，用作鸡机体免疫状态的评价及感染性疾病诊断相关的研究。Westernblot分析单克隆抗体分析表明单克隆抗体与天然抗原具有良好特异性和性反应，而与其他血清型沙门菌和大肠杆菌无交叉反应。附图说明图1单克隆抗体的WesternBlot分析图；图2方阵实验确定抗原及SP-4G6抗体最佳工作浓度；图3血清最佳工作浓度的确定(SP-4G6)；图4ROC曲线(SP-4G6)；菌种保藏信息：泌鸡白痢沙门菌IpaJ单克隆抗体的杂交瘤细胞株SP-4G6，保藏于中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏编号为CCTCCNO:C2018145，保藏地址为中国.武汉.武汉大学，分类命名为：杂交瘤细胞株SP-4G6，保藏日期2018.6.13。具体实施方式以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本专利技术，但实施例并不对本专利技术做任何形式的限定。除非特别说明，本专利技术采用的试剂、方法和设备为本
常规试剂、方法和设备。实施例1:杂交瘤细胞株SP-4G6的获得保藏号为CCTCCNO：C2018145。1.动物免疫具体免疫程序如下：首次免疫，腹腔注射割胶纯化蛋白，且以适量胶沫作为佐剂与100μg重组rHis-SP-IpaJ蛋白混匀免疫小鼠，2周后腹腔注射割胶纯化蛋白，且以适量胶沫作为佐剂与100μg蛋白混匀进行二次免疫，间隔2周后腹腔注射100μg不加佐剂的纯化蛋白进行第三次免疫，第二次免疫7天后眼眶采血测定血清抗体效价，选取效价较高的小鼠进行细胞融合。2.细胞融合具体步骤如下：尾静脉加强免疫3d后，采集少量血液，分离血清-20℃冻存，作为筛选时的阳性对照。按生物安全方法处死免疫鼠，75％酒精浸泡消毒5min，无菌取脾细胞与处于对数生长期的骨髓瘤细胞SP2/0在PEG(MW1450)作用下融合，用ICR小鼠腹腔巨噬细胞作为饲养细胞，融合好的细胞及本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种分泌鸡白痢沙门菌 IpaJ 单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于，所述杂交瘤细胞株于2018.6.13保藏于中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏编号为CCTCC NO:C2018145，保藏地址为中国.武汉.武汉大学，分类命名为：杂交瘤细胞株 SP‑4G6。
【技术特征摘要】
1.一种分泌鸡白痢沙门菌IpaJ单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于，所述杂交瘤细胞株于2018.6.13保藏于中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏编号为CCTCCNO:C2018145，保藏地址为中国.武汉.武汉大学，分类命名为：杂交瘤细胞株SP-4G6。2.一种鸡白痢沙门菌IpaJ单克隆抗体，其特征在于，由权利要求1所述的杂交瘤细胞株或其传代细胞株分泌产生。3.一种鸡白痢沙门菌IpaJ单克隆抗体，其特征在于，所述的鸡白痢沙门菌IpaJ单克隆抗体包括抗体重链和抗体轻链；抗体重链中，HCDR1氨基酸序列为：GYYIH，HCDR2氨基酸序列为：WIVPENGDTEYAPKFQG，HCDR3氨基酸序列为：YGRGYAL；抗体轻链中，LCDR1氨基酸序列为：RSSQSIVHSNGNTYLQ，LCDR2氨基酸序列为：KVSNRFS，LCDR3氨基酸序列为：FQGSHVPRT。4.权利要求1所...
【专利技术属性】
技术研发人员：焦新安，李求春，尹克全，朱悦，徐黎娟，王鑫，李扬，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32
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