一种检测糖化白蛋白及其浓度的方法、检测糖化氨基酸氧化酶-酮胺氧化酶及其浓度的方法技术

本发明专利技术提供了一种荧光铜纳米簇在荧光法检测糖化白蛋白和/或糖化氨基酸氧化酶‑酮胺氧化酶中的应用。本发明专利技术将荧光铜纳米簇探针用于检测糖化白蛋白和/或糖化氨基酸氧化酶‑酮胺氧化酶，具有灵敏度高，良好的选择性，线性范围较宽等特点。本发明专利技术建立的通过荧光纳米簇发射荧光方法来检测糖化白蛋白，避免了其他因素的干扰，选择性的检测血液和尿液中糖化白蛋白的浓度，可以无创地检测；而且使用荧光发射的方法检测糖化白蛋白的浓度，而不是使用事先制备好的荧光铜属纳米簇，最大限度地避免了实验中的假信号可能带来的干扰；同时检测过程中同时生成的荧光铜纳米簇具有优良的荧光性质，在光学材料、生物医学等领域上的应用具有重要的意义。

【技术实现步骤摘要】
一种检测糖化白蛋白及其浓度的方法、检测糖化氨基酸氧化酶-酮胺氧化酶及其浓度的方法
本专利技术涉及糖化白蛋白检测
，具体涉及一种荧光铜纳米簇在荧光法检测糖化白蛋白和/或糖化氨基酸氧化酶-酮胺氧化酶中的应用、采用荧光铜纳米簇荧光法检测糖化白蛋白浓度的方法、采用荧光铜纳米簇荧光法检测糖化氨基酸氧化酶-酮胺氧化酶浓度的方法以及采用荧光铜纳米簇荧光法检测样品中是否含有糖化白蛋白或糖化氨基酸氧化酶-酮胺氧化酶的方法，尤其涉及一种荧光铜纳米簇在荧光法检测糖化白蛋白和/或糖化氨基酸氧化酶-酮胺氧化酶中的应用、检测糖化白蛋白及其浓度的方法、检测糖化氨基酸氧化酶-酮胺氧化酶及其浓度的方法以及检测样品中是否含有糖化白蛋白或糖化氨基酸氧化酶-酮胺氧化酶的方法。
技术介绍
近年来随着科技的发展，荧光纳米材料由于在量子尺寸效应、等离子共振效应及最子隧道效应等方丽的特性，展现出与众不同的光学、化学、也学以及催化性能，使其在科学界备受关注。目前已研究发现的荧光纳米材料主要有有机染料、碳量子点、聚合物点、半导体量子点、荧光铜属纳米簇(FMNCs)等。这其中，铜属纳米簇是一种特殊材料，在20世纪六十年代，已有研究者发现金、银、铜等铜属有较弱的荧光，但其荧光产率特别低，随着技术的发展和社会的需要，荧光铜属纳米簇的研究越来越受科研工作者的关注。FMNCs是由保护剂同一些(几个、数十个或者上百个)铜属原子，如(Cu、Ag、Au、Pt)结合而成的粒径小于2nm的荧光纳米材料。铜属纳米簇的尺寸介于铜属原子和纳米粒子之间，当铜属本体材料的尺寸降到纳米级别甚至接近于电子费米水平，原来连续的能带就会分裂成若干个分立能级，电子的运动将不再受空间的限制，而跃迁于各个能级之间；连续能级将被分裂成各种离散能级，从而使FMNCs具有独特的较强荧光性能。这些分立能级导致了纳米簇具有可调的激发，良好的水溶性，光稳定性和低毒性等特点。铜属粒子的物理化学性能与其尺寸大小密切相关，并对其有依赖性。目前，研究发现的荧光铜属纳米簇已有多种，例如铂纳米簇、金纳米簇、银纳米簇、铜纳米簇以及各种合金纳米簇等。正是由于荧光铜属纳米簇荧光强度较强，同生物分子具有良好的相容性且稳定性较好，而且合成方法较为简单，使其在环境监测、生物成像、疾病监测、催化、光电学等多个领域具有广阔的前景，特别是在生物小分子检测领域具有很高的应用价值。糖化白蛋白(GA)是糖化蛋白中的一种，为血清白蛋白和葡糖糖非酶促形成的糖基化产物，其生成的量和血糖浓度及白蛋白半衰期有关，白蛋白的半衰期为17～19d，因此GA反映的是2～3周的平均血糖水平；对短期内血糖变化敏感，特别是对处于治疗方案调整期、初发糖尿病、应激状态血糖波动变化较大的患者具有一定的优势。同时，GA的应用领域逐渐拓展至筛查糖尿病、预测慢性并发症风险、辅助鉴别应激性高血糖、辅助诊断暴发性1型糖尿病等方面，已成为一个具有临床应用价值的血糖新指标。因此，建立简便、灵敏、准确的检测分析糖化白蛋白的方法是十分必要的。目前，现有文献中记载检测糖化白蛋白的方法主要有高效液相色谱法、免疫法、固体酶法等，但存在复杂的预处理，操作复杂等缺点，这类方法有的还需要大型仪器，而且操作比较复杂，设备昂贵、耗时长、灵敏度低等缺点，难以满足日常检测要求，大大限制了这些检测方法的推广和应用，也增加了使用方的成本。因此，如何找到一种更加合适的检测糖化白蛋白的方法，克服现有检测糖化白蛋白的方法存在的上述缺陷，已成为诸多具有前瞻性的研究人员广为关注的焦点之一。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术要解决的技术问题在于提供一种荧光铜纳米簇在荧光法检测糖化白蛋白和/或糖化氨基酸氧化酶-酮胺氧化酶中的应用，特别是采用荧光铜纳米簇荧光法检测糖化白蛋白浓度的方法、采用荧光铜纳米簇荧光法检测糖化氨基酸氧化酶-酮胺氧化酶浓度的方法以及采用荧光铜纳米簇荧光法检测样品中是否含有糖化白蛋白或糖化氨基酸氧化酶-酮胺氧化酶的方法。本专利技术将荧光铜纳米簇用于检测糖化白蛋白和/或糖化氨基酸氧化酶-酮胺氧化酶中，不仅具有灵敏度高，良好的选择性，线性范围较宽等特点。而且不容易受到外界环境的影响，检测结果准确。本专利技术提供了一种荧光铜纳米簇在荧光法检测糖化白蛋白和/或糖化氨基酸氧化酶-酮胺氧化酶中的应用。优选的，所述荧光法检测糖化白蛋白还包括荧光法检测糖化白蛋白的浓度；所述荧光法检测糖化白蛋白的过程中，同时原位制备荧光铜纳米簇，所述原位制备的原料包括糖化白蛋白和糖化氨基酸氧化酶-酮胺氧化酶；所述荧光铜纳米簇的荧光发射强度与糖化白蛋白的浓度成正比；所述糖化白蛋白的浓度为50～4000μM；所述荧光铜纳米簇包括铜纳米簇和配体；所述荧光铜纳米簇的粒径为1～3nm；所述荧光法为非荧光淬灭法。优选的，所述荧光法检测糖化氨基酸氧化酶-酮胺氧化酶还包括荧光法检测糖化氨基酸氧化酶-酮胺氧化酶的浓度；所述荧光法检测糖化氨基酸氧化酶-酮胺氧化酶的过程中，同时原位制备荧光铜纳米簇，所述原位制备的原料包括糖化氨基酸氧化酶-酮胺氧化酶和糖化白蛋白；所述荧光铜纳米簇的荧光发射强度与糖化氨基酸氧化酶-酮胺氧化酶的浓度成正比；所述糖化氨基酸氧化酶-酮胺氧化酶的浓度为50～4000μM；所述配体为聚甲基丙烯酸二甲氨基乙酯；所述铜纳米簇和配体的摩尔比为1：(0.1～2.5)。本专利技术提供了一种采用荧光铜纳米簇荧光法检测糖化白蛋白浓度的方法，包括以下步骤：1)将糖化白蛋白溶液和糖化氨基酸氧化酶-酮胺氧化酶溶液混合温育后，得到混合溶液；2)将上述步骤得到的混合溶液、酸性缓冲液、甲基丙烯酸二甲氨基乙酯和还原剂进行反应后，得到反应液；3)将上述步骤得到的反应液、第二酸性缓冲液和可溶性铜源进行微波反应后，得到具有荧光强度的铜纳米簇溶液；4)采用不同浓度的糖化白蛋白溶液重复上述步骤1)～3)，得到具有不同荧光强度的铜纳米簇溶液；5)建立铜纳米簇的荧光强度的数值与糖化白蛋白浓度的定量关系，用于检测待测样品中的糖化白蛋白浓度。优选的，所述糖化氨基酸氧化酶-酮胺氧化酶溶液的浓度为0.5～2mg/mL；所述糖化白蛋白溶液与所述糖化氨基酸氧化酶-酮胺氧化酶溶液的体积比为(35～40)：(1～5)；所述温育的温度为40～45℃；所述温育的时间为2～3h；所述酸性缓冲液包括磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、柠檬酸-氢氧化钠-盐酸缓冲液、乙酸-乙酸钠缓冲溶液和磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液一种或多种；所述酸性缓冲液的pH值为3.2～6.0；所述酸性缓冲液的浓度为0.5～2mM；所述糖化白蛋白溶液与所述酸性缓冲液的体积比为(35～40)：(1～5)。优选的，所述糖化白蛋白溶液与所述甲基丙烯酸二甲氨基乙酯的体积比为(35～40)：(0.5～2)；所述甲基丙烯酸二甲氨基乙酯的浓度为10～35mM；所述还原剂包括亚铜溶液、NaHSO3溶液、Na2SO3溶液、Na2S2O3溶液、草酸、葡萄糖溶液、醇溶液和胺溶液中的一种或多种；所述还原剂的浓度为30～70mM；所述糖化白蛋白溶液与所述还原剂的体积比为(35～40)：(0.1～1)；所述反应的时间为10～120min；所述反应后还包括透析步骤；所述透析的透析膜的分子量为500～1500Da；所述透析的时间为12～24h。优选的，所述第二酸性缓冲液包括磷酸氢二钠-本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种荧光铜纳米簇在荧光法检测糖化白蛋白和/或糖化氨基酸氧化酶‑酮胺氧化酶中的应用。

【技术特征摘要】
1.一种荧光铜纳米簇在荧光法检测糖化白蛋白和/或糖化氨基酸氧化酶-酮胺氧化酶中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述荧光法检测糖化白蛋白还包括荧光法检测糖化白蛋白的浓度；所述荧光法检测糖化白蛋白的过程中，同时原位制备荧光铜纳米簇，所述原位制备的原料包括糖化白蛋白和糖化氨基酸氧化酶-酮胺氧化酶；所述荧光铜纳米簇的荧光发射强度与糖化白蛋白的浓度成正比；所述糖化白蛋白的浓度为50～4000μM；所述荧光铜纳米簇包括铜纳米簇和配体；所述荧光铜纳米簇的粒径为1～3nm；所述荧光法为非荧光淬灭法。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述荧光法检测糖化氨基酸氧化酶-酮胺氧化酶还包括荧光法检测糖化氨基酸氧化酶-酮胺氧化酶的浓度；所述荧光法检测糖化氨基酸氧化酶-酮胺氧化酶的过程中，同时原位制备荧光铜纳米簇，所述原位制备的原料包括糖化氨基酸氧化酶-酮胺氧化酶和糖化白蛋白；所述荧光铜纳米簇的荧光发射强度与糖化氨基酸氧化酶-酮胺氧化酶的浓度成正比；所述糖化氨基酸氧化酶-酮胺氧化酶的浓度为50～4000μM；所述配体为聚甲基丙烯酸二甲氨基乙酯；所述铜纳米簇和配体的摩尔比为1：(0.1～2.5)。4.一种采用荧光铜纳米簇荧光法检测糖化白蛋白浓度的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将糖化白蛋白溶液和糖化氨基酸氧化酶-酮胺氧化酶溶液混合温育后，得到混合溶液；2)将上述步骤得到的混合溶液、酸性缓冲液、甲基丙烯酸二甲氨基乙酯和还原剂进行反应后，得到反应液；3)将上述步骤得到的反应液、第二酸性缓冲液和可溶性铜源进行微波反应后，得到具有荧光强度的铜纳米簇溶液；4)采用不同浓度的糖化白蛋白溶液重复上述步骤1)～3)，得到具有不同荧光强度的铜纳米簇溶液；5)建立铜纳米簇的荧光强度的数值与糖化白蛋白浓度的定量关系，用于检测待测样品中的糖化白蛋白浓度。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述糖化氨基酸氧化酶-酮胺氧化酶溶液的浓度为0.5～2mg/mL；所述糖化白蛋白溶液与所述糖化氨基酸氧化酶-酮胺氧化酶溶液的体积比为(35～40)：(1～5)；所述温育的温度为40～45℃；所述温育的时间为2～3h；所述酸性缓冲液包括磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、柠檬酸-氢氧化钠-盐酸缓冲液、乙酸-乙酸钠缓冲溶液和磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液一种或多种；所述酸性缓冲液的pH值为3.2～6.0；所述酸性缓冲液的浓度为0.5～2mM；所述糖化白蛋白溶液与所述酸性缓冲液的体积比为(35～40)：(1～5)。6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述糖化白蛋白溶液与所述甲基丙烯酸二甲氨基乙酯的体积比为(35～40)：(0.5～2)；所述甲基丙烯酸二甲氨基乙酯的浓度为10～35mM；所述还原剂包括NaHSO3溶液、Na2SO3溶液、Na2S2O3溶液、草酸、葡萄糖溶液、醇溶液和胺溶液中的一种或多种；所述还原剂的浓度为30～70mM；所述糖化白蛋白溶液与所述还原剂的体积比为(35～40)：(0.1～1)；所述反应的时间为10～120min；所述反应后还包括透析步骤；所述透析的透析膜的分子量为500～1500Da；所述透析的时间为12～24h。7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：辛精卫，贾云霄，张晓杰，阴春霞，李凯，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：吉林,22