一种唾液酸电化学试纸制造技术

本实用新型专利技术公开了一种唾液酸电化学试纸，包括绝缘基片、导电电极、绝缘隔离层、反应层、前处理层、虹吸导样槽和粘合隔片，反应层为唾液酸反应膜，所述唾液酸反应膜为一酶反应膜，酶反应膜覆盖于反应区的参比电极及工作电极表面，位于绝缘隔离层的反应区端；所述前处理层为唾液酸水解处理层，前处理层设置在反应层的前端，覆盖于反应区的参比电极及工作电极表面；反应层和前处理层设置在虹吸导样槽内；虹吸导样槽的前端为采样口。本实用新型专利技术使用直接电化学生物传感器原理检测唾液酸方法，通过设置样品前处理结构，结合酶层中的酶对血液中结合唾液酸快速完全分解成游离唾液酸，提高唾液酸测试灵敏度，实现准确、快速、简单、低成本检测唾液酸。

【技术实现步骤摘要】
一种唾液酸电化学试纸
本技术涉及电化学试纸及电化学检测领域，具体是一种唾液酸电化学试纸。
技术介绍
唾液酸(Sialicacid，SA)，是一类含9个碳原子的羧基化单糖酰化衍生物的总称，在人体的唾液酸主要为N-乙酰神经氨酸和N-羟乙酰神经氨酸两种，大多由葡萄糖代谢生成。血清唾液酸来源于细胞表面，以糖结合唾液酸和脂结合唾液酸两种形式存在。机体发育阶段各种组织唾液酸表达水平均较高，而在成年人的组织中则为低表达，如成人组织中出现唾液酸化水平升高，则提示发生病变的可能。上世纪七十年代，国外学者们通过动物实验及人体肿瘤研究，证实了一些恶性肿瘤个体血清唾液酸水平异常升高。到上世纪九十年代，唾液酸开始作为血清肿瘤标志物应用于临床。众多的研究提示恶性肿瘤患者血清唾液酸升高程度较非肿瘤性病变的大，所以尽管血清唾液酸对恶性肿瘤的诊断并非特异性，但具有较高的敏感性，联合检测血清唾液酸及其他肿瘤标记物对恶性肿瘤的筛查、早期诊断有很大的临床意义。有文献报道，血清唾液酸水平与肿瘤恶性程度、肿瘤临床分期相关,分化越低，分期越晚血清SA水平越高；作有效治疗后血清唾液酸可下降，肿瘤复发、转移后又上升，提示血清唾液酸不但可作为恶性肿瘤辅助诊断的指标，还可作为病情发展、肿瘤消长的监测指标。目前，检验血液唾液酸的主要方法有：高效液相色谱法、化学发光法、光化学比色法。在这些方法中，高效液相色谱法和化学发光法检测过程繁琐，获得分析结果所需时间较长；光化学比色法取血量大，并且需要专用的生化分析仪，价格昂贵。未见能家用或床旁使用的快速检测唾液酸电化学法及产品报道。检测血液唾液酸，需要一种测试灵敏度高、结果准确、抗干扰能力强、成本低、操作简单的方法。
技术实现思路
本技术解决目前唾液酸检测方法的技术不足，提供一种唾液酸电化学试纸，使用直接电化学生物传感器原理检测唾液酸方法，通过设置样品前处理结构，结合酶层中的酶对血液中结合唾液酸快速完全分解成游离唾液酸，提高唾液酸测试灵敏度，实现准确、快速、简单、低成本检测唾液酸。实现本技术目的的技术方案是：一种唾液酸电化学试纸，包括绝缘基片；导电电极，所述导电电极包括设置在绝缘基片上的三条条状导电电极，分别为工作电极、参比电极和短路电极，其中设置在导电电极传导区一端的短路电极与工作电极或参比电极相接；绝缘隔离层，所述绝缘隔离层局部覆盖于导电电极上，绝缘隔离层的一端露出导电电极的反应区，另一端露出导电电极的传导区；反应层，所述反应层为唾液酸反应膜，所述唾液酸反应膜为一酶反应膜，所述酶反应膜覆盖于反应区的参比电极及工作电极表面，位于绝缘隔离层的反应区端；前处理层，所述前处理层为唾液酸水解处理层，所述前处理层设置在反应层的前端，覆盖于反应区的参比电极及工作电极表面；虹吸导样槽，所述反应层和前处理层设置在虹吸导样槽内；虹吸导样槽的前端为采样口；粘合隔片，所述粘合隔片与绝缘隔离层、前处理层、反应层和虹吸导样槽的上端面叠接；所述酶反应膜包括与唾液酸反应的酶和一种电子传递介体，所述酶为神经氨酸苷酶、神经氨酸醛缩酶、酮胺氧化酶或过氧化物酶中的一种或组合，其中，神经氨酸苷酶含量为1％-3％、神经氨酸醛缩酶含量为0.1％-1％、酮胺氧化酶含量为0.5％-2％，过氧化物酶0.5％-2％；所述电子传递介体为亚铁氰化钾，含量为3％(m/m)-10％(m/m)；所述前处理层的浆液中含有唾液酸水解剂，所述唾液酸水解剂含量为2.0％-8.5％。所述虹吸导样槽的后端与绝缘隔离层之间形成与外界相通的导气孔，所述的采样口、虹吸导样槽和导气孔三者相互连通。所述酶反应膜还包括缓冲液、粘合剂及表面活性剂，所述缓冲液为磷酸缓冲液、MES缓冲液或柠檬酸缓冲液；所述粘合剂采用淀粉、糊精、明胶、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、海藻酸钠中的一种或几种；所述表面活性剂为TritonX-100或TW-20。所述唾液酸水解剂为pH值低于2的非挥发性酸，所述非挥发性酸包括磺基水杨酸、3-羧基苯磺酸中的一种或组合。所述前处理层的浆液纵还包括粘合剂及表面活性剂，所述粘合剂包括羧甲基纤维素，其重量百分比为1％；所述表面活性剂包括TritonX-100，其重量百分比为0.1％。上述唾液酸电化学试纸的制备方法，包括如下步骤：1)采用丝网印刷技术在0.25mm厚PET塑料基片上制作工作电极、参比电极和短路电极，工作电极、参比电极和短路电极，采用由Acheson公司购买的导电碳墨制作。通过丝网印刷将导电油墨在PET塑料基片上铺上分散均匀的油墨薄层后，放到80℃烘箱中烘干60min；2)采用丝网印刷技术在印好电极系统的基片上印刷绝缘漆作为电绝缘隔离层，绝缘漆由Acheson公司购买。通过丝网印刷将绝缘漆在PET塑料基片上铺上分散均匀的油墨薄层后，放到紫外烘干机一分钟烘干。3)用点酶机在电极表面固定酶反应膜用于血液唾液酸的检测。所取酶反应液的各组分及其重量百分比见表1：表1材料重量(w/v)神经氨酸苷酶1.5％神经氨酸醛缩酶0.5％酮胺氧化酶1.0％过氧化物酶0.8％亚铁氰化钾5.0％羧甲基纤维素1.0％柠檬酸缓冲液(pH＝6.0)90.0％吐温-200.2％取4μL酶反应液滴加到电极表面，50℃烘干20min，备用。4)用点酶机在前处理区表面固定前处理层用于对样品中的结合唾液酸进行水解。所取前处理层浆液的各组分及其重量百分比见表2：表2材料重量(w/v)磺基水杨酸3.5％羧甲基纤维素1％NA3-羧基苯磺酸3％TritonX-1000.1％水92.4％取4μL前处理层浆液滴加到前处理区绝缘基片表面，50℃烘干20min，备用。5)前处理层浆液固定后，用粘合隔片将表面封装片、PET基片粘合，粘合隔片上设有开槽，对应于电极反应区域，及暴露电极上有酶反应试剂的一端，以及参比电极和短路电极。PET基片、粘合隔片和表面封装片组成虹吸导样槽及采样口。一种唾液酸电化学检测方法，包括上述的唾液酸电化学试纸，所述方法包括如下步骤：一、制作线性曲线图：收集压积比为45％的新鲜血液，配制唾液酸浓度为0.5，1.0，1.5，3.0，5.0和7.0mmol/L的血液样品；将唾液酸电化学试纸，置于多参数分析仪中并在唾液酸电化学试纸的工作电极和参比电极两端施加300mV工作电压；用吸管取血液样品接触所述唾液酸电化学试纸的采样口，血液通过虹吸导样槽自动吸取约2μL样品，经过前处理区水解部分结合唾液酸，到达反应区与酶反应膜中试剂反应形成电流，在多参数分析仪上可快速检测出与唾液酸浓度相对应的电流值；以唾液酸的浓度值为横坐标，电流值为纵坐标，绘制出唾液酸浓度与电流值的线性关系图；二、测量被测样品的唾液酸浓度值：将唾液酸电化学试纸，置于多参数分析仪中并在唾液酸电化学试纸的工作电极和参比电极两端施加300mV工作电压；用吸管取被测样品接触所述唾液酸电化学试纸的采样口，被测样品血液通过虹吸导样槽自动吸取约2μL样品，在多参数分析仪上检测出与被测样品唾液酸浓度相对应的电流值；该电流值对应的唾液酸浓度可直接从上述线性关系图上得出，从而得到被测样品的唾液酸浓度值。用上述步骤定标后，将得到的线性曲线输入到多参数分析仪的存储设备中；被测样品的唾液酸浓度可以直接从多参数分析仪中读出。本技术电化学生物传感器检测唾液酸原理如下本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种唾液酸电化学试纸，其特征在于，包括绝缘基片；导电电极，所述导电电极包括设置在绝缘基片上的三条条状导电电极，分别为工作电极、参比电极和短路电极，其中设置在导电电极传导区一端的短路电极与工作电极或参比电极相接；绝缘隔离层，所述绝缘隔离层局部覆盖于导电电极上，绝缘隔离层的一端露出导电电极的反应区，另一端露出导电电极的传导区；反应层，所述反应层为唾液酸反应膜，所述唾液酸反应膜为一酶反应膜，所述酶反应膜覆盖于反应区的参比电极及工作电极表面，位于绝缘隔离层的反应区端；前处理层，所述前处理层为唾液酸水解处理层，所述前处理层设置在反应层的前端，覆盖于反应区的参比电极及工作电极表面；虹吸导样槽，所述反应层和前处理层设置在虹吸导样槽内；虹吸导样槽的前端为采样口；粘合隔片，所述粘合隔片与绝缘隔离层、前处理层、反应层和虹吸导样槽的上端面叠接。

【技术特征摘要】
1.一种唾液酸电化学试纸，其特征在于，包括绝缘基片；导电电极，所述导电电极包括设置在绝缘基片上的三条条状导电电极，分别为工作电极、参比电极和短路电极，其中设置在导电电极传导区一端的短路电极与工作电极或参比电极相接；绝缘隔离层，所述绝缘隔离层局部覆盖于导电电极上，绝缘隔离层的一端露出导电电极的反应区，另一端露出导电电极的传导区；反应层，所述反应层为唾液酸反应膜，所述唾液酸反应膜为一酶反应膜，所述酶反应膜覆盖于反应区的参比电极及工作电极表面，位于绝...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁明龙，刘勤，伍寿胜，李中，廖姗，
申请(专利权)人：桂林中辉科技发展有限公司，桂林乐尔医疗器械有限公司，
类型：新型
国别省市：广西,45