一种总胆汁酸检测试剂、试纸及检测方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种总胆汁酸检测试剂、试纸及检测方法与应用，所述总胆汁酸检测试纸包括绝缘基片，位于绝缘基片上的电极系统，所述电极系统包括三条导电电极，分别为工作电极、参比电极和短路电极，其中的短路电极与工作电极或参比电极相接；一局部覆盖于电极系统上的绝缘隔离层，使得在未覆盖绝缘隔离层所裸露出的电极系统区域，形成一容纳样品溶液空间的电化学电极反应区；一位于电化学电极反应区的酶反应膜，所述酶反应膜包括至少一种电子介体、至少一种总胆汁酸吸附剂。本发明专利技术通过总胆汁酸吸附剂，可使样品中的总胆汁酸快速被吸附浓缩，从而使总胆汁酸试纸检测总胆汁酸含量的灵敏度大大提高，因而提高了检测的准确度及可靠性。

【技术实现步骤摘要】
一种总胆汁酸检测试剂、试纸及检测方法与应用
本专利技术涉及一种胆汁酸电化学生物传感器检测方法，以及在快速检测中的应用，尤其是一种总胆汁酸检测试剂、试纸及检测方法与应用。
技术介绍
总胆汁酸是胆汁中的主要成分，是胆固醇经肝组织代谢的最终产物，当肠肝循环被破坏，则总胆汁酸不能重复利用。血清总胆汁酸测定可以反映肝细胞的合成代谢、摄取和排泌状态；总胆汁酸的生成和代谢与肝脏关系十分密切，肝细胞发生病变，血清总胆汁酸会跟随变化。总胆汁酸（TotalBileAcids，简称TBA）是一种敏感的肝功能试验，肝细胞仅有轻微坏死时，即可升高，其变化早于丙氨酸转氨基酶（Alaninetransaminase，简称ALT）和胆红素，甚至可早于肝组织学活检所见。TBA升高主要见于急慢性肝炎、肝硬化、阻塞性黄疸、原发性肝癌、急性肝内胆汁淤积、原发性胆汁性肝硬化和肝外梗阻性黄疸等。餐后2hTBA测定可较空腹时更敏感，用餐后胆囊收缩，大量胆汁排入肠中，再经肝肠循环回到肝脏，肝细胞轻度损害时，总胆汁酸清除率即可下降，餐后2h血中总胆汁酸仍维持高水平，从而可观察肝细胞微小变化，对早期肝病的诊断极有价值。目前，检验总胆汁酸的主要方法有：高效液相色谱法、化学发光法、光化学比色法。在这些方法中，高效液相色谱法和化学发光法检测过程繁琐，获得分析结果所需时间较长；光化学比色法取血量大，并且需要专用的生化分析仪，价格昂贵。未见能家用或床旁使用的快速检测总胆汁酸方法及产品报道。相关研究表明，血清与尿液中总胆汁酸浓度具有显著正相关，相关系数达到0.9964，血清中总胆汁酸处于正常参考值范围（0-10μmol/L）时,排泄入尿液中的总胆汁酸浓度不超过20μmol/L，随着血清中总胆汁酸浓度的增加，尿液中总胆汁酸浓度也增加，即尿液中的总胆汁酸浓度是随着血清中总胆汁酸浓度的增加而增加。由于尿液中总胆汁酸浓度与血液中总胆汁酸浓度具有非常强的相关性，因此，检测尿液中的总胆汁酸浓度即可以知道血液中的总胆汁酸浓度，尿液总胆汁酸浓度可以用作实时监测肝胆疾病的指标。尿液检测属于无创检测，可以避免使用者取样疼痛。检测总胆汁酸，需要一种测试灵敏度高、结果准确、抗干扰能力强、成本低、操作简单的方法。
技术实现思路
本专利技术解决目前总胆汁酸检测方法的技术不足，提供一种总胆汁酸检测试剂、试纸及检测方法与应用，本专利技术使用直接电化学生物传感器原理检测总胆汁酸方法，可以在样品中总胆汁酸含量很低的情况下，提高总胆汁酸测试灵敏度，实现准确、快速、简单、低成本检测总胆汁酸。实现本专利技术目的的技术方案是：一种总胆汁酸检测试剂，包括酶反应液，所述酶反应液包括如下重量百分比的组分：3α-羟基类固醇脱氢酶1.0%-2.2%；铁氰化钾3.0%-20.0%；羧甲基纤维素1.0%-6.0%；AD+，氧化态的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸0.5%-3.0%；pH值为7.0的磷酸钾缓冲液65%-80%；医药级蒙脱石钙1.0%-10.0%。一种总胆汁酸检测试纸，包括一绝缘基片；一位于绝缘基片上的电极系统，所述电极系统包括三条导电电极，分别为工作电极、参比电极和短路电极，其中的短路电极与工作电极或参比电极相接；一局部覆盖于电极系统上的绝缘隔离层，使得在未覆盖绝缘隔离层所裸露出的电极系统区域，形成一容纳样品溶液空间的电化学电极反应区；一位于电化学电极反应区的酶反应膜，所述酶反应膜包括至少一种电子介体、至少一种总胆汁酸吸附剂、还包括缓冲液、粘合剂及表面活性剂；在所述的绝缘隔离层的上方设有一粘合隔片，所述粘合隔片上开设有相互连通的采样口和虹吸导样槽，其中采样口设置于远离绝缘基片上电极传导部的一端，虹吸导样槽的开设位置与绝缘隔离层上电化学电极反应区的位置相对应。所述绝缘隔离层的电化学电极反应区设有反应窗口，反应窗口的跨度为同时覆盖工作电极和参比电极；所述酶反应膜与反应窗口相对应。所述酶反应膜包括酶，为3α-羟基类固醇脱氢酶；电子介体，为铁氰化钾、二茂铁及其衍生物、钌的络合物或苯醌类化合物中的一种或几种；缓冲液，为磷酸缓冲液、MES缓冲液、柠檬酸缓冲液中的一种；总胆汁酸吸附剂，为蒙脱石。所述总胆汁酸吸附剂干重含量为1%-10%。所述总胆汁酸吸附剂直径为0.5μm-7μm。所述酶反应膜中的总胆汁酸检测试剂包括如下重量百分比的组分：3α-羟基类固醇脱氢酶1.0%-2.2%；铁氰化钾3.0%-20.0%；羧甲基纤维素1.0%-3.0%；AD+，氧化态的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸0.5%-3.0%；pH值为7.0的磷酸钾缓冲液65%-80%；医药级蒙脱石钙或医药级蒙脱石钠1%-10%。上述的总胆汁酸检测试纸在制备总胆汁酸检测试纸中的应用。上述的总胆汁酸检测试剂在制备总胆汁酸检测试纸中的应用。利用上述的总胆汁酸检测试纸进行总胆汁酸检测的方法，包括如下步骤：一、制作线性曲线图：收集比重为1.018的新鲜尿液，配制尿液胆汁酸浓度为0，10,25,50,100,200,300μmol/L的尿样；将总胆汁酸检测试纸置于配套的多参数分析仪中并在工作电极和参比电极两端施加300mV工作电压；取尿样10-100µL加到总胆汁酸检测试纸的采样口，尿液通过虹吸导样槽自动吸取2µL样品，进入电化学电极反应区与酶反应膜中的总胆汁酸检测试剂反应形成电流，在多参数分析仪上可检测出与总胆汁酸浓度相对应的电流值；以总胆汁酸的浓度为横坐标，电流值为纵坐标，绘制出总胆汁酸浓度与电流值的线性关系图；二、测量被测样品的总胆汁酸浓度值：将总胆汁酸检测试纸置于多参数分析仪中并在总胆汁酸检测试纸的工作电极和参比电极两端施加300mV工作电压；取被测样品尿样10-100µL加到总胆汁酸检测试纸的采样口，尿液通过虹吸导样槽自动吸取2µL样品，在多参数分析仪上检测出与取被测样品总胆汁酸浓度相对应的电流值；该电流值对应的总胆汁酸浓度可直接从上述线性关系图上得出，从而得到被测样品的总胆汁酸浓度值。用这种方法定标后，将得到的总胆汁酸浓度与电流的线性关系的线性曲线输入到配套多参数分析仪的存储设备中；被检测样品的总胆汁酸浓度可以直接从配套多参数分析仪中读出。本专利技术电化学生物传感器检测总胆汁酸原理如下：其中，NAD+：烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，氧化态，氧化型辅酶ⅠNADH：烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，还原态，还原型辅酶Ⅰ本专利技术所采用的总胆汁酸试纸，是一种利用电子介体及酶反应系统分析液体中总胆汁酸浓度的电流型电化学生物传感器。该生物传感器（即总胆汁酸试纸）具有较高的灵敏度及较宽的线性范围，因此能快速的检测生物液体比如尿液中总胆汁酸浓度值。它对总胆汁酸的高敏感性使总胆汁酸分析可以应用较低的工作电压，避免一些干扰物质造成错误的分析结果。同时，本专利技术的总胆汁酸试纸在酶反应膜中加入了总胆汁酸吸附剂蒙脱石。蒙脱石对葡萄糖、尿酸、胆固醇等无吸附作用，但蒙脱石能大量快速吸附总胆汁酸，使样品中的总胆汁酸快速浓缩到酶试剂层里的酶及其它生化试剂附近，一方面提高了反应速度，另一方面使酶及介体附近的总胆汁酸浓度迅速增大，从而使总胆汁酸测试灵敏度得以提高，因此用本专利技术的总胆汁酸试纸定量分析总胆汁酸浓度，即使血液中总胆汁酸浓度很低，也能快速、准确获得检测结果。本专利技术提高总胆汁酸测量准确度和实现快速检测的方法在于，样品经虹吸导样槽进入反应区与反应膜本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种总胆汁酸检测试剂，其特征在于，包括酶反应液，所述酶反应液包括如下重量百分比的组分：3α‑羟基类固醇脱氢酶1.0%‑2.2%；铁氰化钾3.0%‑20.0%；羧甲基纤维素1.0%‑6.0%；AD+，氧化态的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 0.5%‑3.0%；pH值为7.0的磷酸钾缓冲液65%‑80%；医药级蒙脱石钙1.0%‑10.0%。

【技术特征摘要】
1.一种总胆汁酸检测试剂，其特征在于，包括酶反应液，所述酶反应液包括如下重量百分比的组分：3α-羟基类固醇脱氢酶1.0%-2.2%；铁氰化钾3.0%-20.0%；羧甲基纤维素1.0%-6.0%；AD+，氧化态的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸0.5%-3.0%；pH值为7.0的磷酸钾缓冲液65%-80%；医药级蒙脱石钙1.0%-10.0%。2.一种总胆汁酸检测试纸，其特征在于，包括一绝缘基片；一位于绝缘基片上的电极系统，所述电极系统包括三条导电电极，分别为工作电极、参比电极和短路电极，其中的短路电极与工作电极或参比电极相接；一局部覆盖于电极系统上的绝缘隔离层，使得在未覆盖绝缘隔离层所裸露出的电极系统区域，形成一容纳样品溶液空间的电化学电极反应区；一位于电化学电极反应区的酶反应膜，所述酶反应膜包括至少一种电子介体、至少一种总胆汁酸吸附剂、还包括缓冲液、粘合剂及表面活性剂；在所述的绝缘隔离层的上方设有一粘合隔片，所述粘合隔片上开设有相互连通的采样口和虹吸导样槽，其中采样口设置于远离绝缘基片上电极传导部的一端，虹吸导样槽的开设位置与绝缘隔离层上电化学电极反应区的位置相对应。3.根据权利要求2所述的总胆汁酸检测试纸，其特征在于，所述绝缘隔离层的电化学电极反应区设有反应窗口，反应窗口的跨度为同时覆盖工作电极和参比电极；所述酶反应膜与反应窗口相对应。4.根据权利要求2所述的总胆汁酸检测试纸，其特征在于，所述酶反应膜包括酶，为3α-羟基类固醇脱氢酶；电子介体，为铁氰化钾、二茂铁及其衍生物、钌的络合物或苯醌类化合物中的一种或几种；缓冲液，为磷酸缓冲液、MES缓冲液、柠檬酸缓冲液中的一种；总胆汁酸吸附剂，为蒙脱石。5.根据权利要求2或4所述的总胆汁酸检测试纸，其特征在于，所述总胆汁酸吸附剂干重含量为1%-10%。6.根据权利要求2或4所...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘勤，梁明龙，伍寿胜，李中，廖姗，
申请(专利权)人：桂林中辉科技发展有限公司，桂林乐尔医疗器械有限公司，
类型：发明
国别省市：广西,45