一种快速测量淀粉酶的电化学试纸及其制备与检测方法技术

本发明专利技术公开了一种快速测量淀粉酶的电化学试纸及其制备与检测方法，所述的电化学试纸包括绝缘基片，以及设置在绝缘基片上的两个相互独立的检测体系，检测体系包括设置在绝缘基片中的导液槽体，导液槽体包括独立的第一导液槽和第二导液槽，第一导液槽设有第一进样口，第二导液槽设有第二进样口；还包括导电膜层、反应膜层和固化层，所述导电膜层设置在绝缘基片上，导电膜层包括相互绝缘的第一参比电极、第一工作电极、第二参比电极和第二工作电极；反应膜层包括至少一种电子介体，至少一种与被检测物质反应的酶。该电化学试纸与多参数分析仪配套使用，能快速定量检测血液或尿液中的淀粉酶活性，具有灵敏度高、测量结果准确、使用方便的优点。

An electrochemical test strip for rapid determination of amylase and its preparation and detection method

The invention discloses an electrochemical test paper for rapid measurement of amylase and its preparation and detection method. The electrochemical test paper comprises an insulating substrate and two independent detection systems arranged on the insulating substrate. The detection system comprises a liquid conducting tank arranged in the insulating substrate, and the liquid conducting tank body comprises an independent section. A liquid conducting tank and a second liquid conducting tank are provided with a first inlet, a second liquid conducting tank with a second inlet, and a conductive film layer, a reaction film layer and a solidifying layer, the conductive film layer is arranged on an insulating substrate, and the conductive film layer comprises a mutually insulated first reference electrode, a first working electrode and a second reference electricity. The electrode and the second working electrode; the reaction film layer comprises at least one electron mediator and at least one enzyme that reacts with the detected substance. The electrochemical test paper can be used in conjunction with a multi-parameter analyzer to rapidly and quantitatively detect amylase activity in blood or urine. It has the advantages of high sensitivity, accurate measurement results and convenient use.

【技术实现步骤摘要】
一种快速测量淀粉酶的电化学试纸及其制备与检测方法
本专利技术涉及一种人体体外诊断试剂的检测领域，具体涉及一种快速测量淀粉酶的电化学试纸及其制备与检测方法。
技术介绍
淀粉酶(AMY或AMS)全称是1，4-α-D-葡聚糖水解酶，催化淀粉及糖原水解，生成葡萄糖、麦芽糖及含有α1，6-糖苷键支链的糊精。淀粉酶主要由胰腺和唾液腺分泌，肺、肝、甲状腺、脂肪等组织亦含有此酶。急性胰腺炎病人胰淀粉酶溢出胰腺外，迅速吸收入血，由尿排出，故血尿淀粉酶大为增加，血清淀粉酶在发病后1～2小时即开始增高，8～12小时标本最有价值，至24小时达最高峰，并持续24～72小时，2～5日逐渐降至正常，而尿淀粉酶在发病后12～24小时开始增高，48小时达高峰，维持5～7天，下降缓慢。故胰腺炎后期测尿淀粉酶更有价值。一般情况下，血清淀粉酶在增高频率以及程度上都不及尿淀粉酶检测，当血清活性淀粉酶回归常态后，尿淀粉酶活性仍然可以持续６天左右，这也是尿淀粉酶检测的敏感度和特异度都高于血淀粉酶检测的原因所在。对于曾经急性胰腺炎发作过的病人，在日常监控淀粉酶十分必要，特别是在喝酒或吃了油腻食品后，及时监测血液或尿液淀粉酶，发现淀粉酶急剧升高，及时到医院就医，可以使病情能及时制止，减轻就医时的病情，减少治疗费用。胰腺炎病人日常监控淀粉酶十分必要，发作时早几个小时到医院就医，病情就完全不一样。血清和尿液淀粉酶活性测定方法有多种，主要有碘化-淀粉比色法、酶速率法，无论是碘化-淀粉比色法还是酶速率法，均需要在半自动多参数分析仪或全自动多参数分析仪检测，患者需要到医疗机构才能获得检测服务，时间长，且不能在家自我监测。因此，为了腹痛病人或胰腺炎病人在家自我监测淀粉酶浓度，需要一种测试灵敏度高、准确、可靠的测试体液淀粉酶的方法和试剂。这样的设备应是价格便宜、方便制造和使用、并且能小型化适合家用的。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是针对现有技术中存在的不足，提供一种快速测量淀粉酶的电化学试纸及其制备与检测方法。该电化学试纸与多参数分析仪配套使用，能快速(30s)定量检测血液或尿液中的淀粉酶活性，具有灵敏度高、测量结果准确、使用方便的优点。为实现本专利技术的目的，本专利技术采用如下技术方案：一种快速测量淀粉酶的电化学试纸，包括绝缘基片，以及设置在绝缘基片上的两个相互独立的检测体系，所述检测体系包括设置在绝缘基片中的导液槽体，所述导液槽体包括独立的第一导液槽和第二导液槽，第一导液槽设有第一进样口，第二导液槽设有第二进样口；还包括导电膜层，所述导电膜层设置在绝缘基片上，所述导电膜层包括相互绝缘的第一参比电极、第一工作电极、第二参比电极和第二工作电极；反应膜层，所述反应膜层包括第一反应膜和第二反应膜，第一反应膜覆盖于第一参比电极、第一工作电极上；第二反应膜覆盖于第二参比电极和第二工作电极上；所述导液槽体设置在导电膜层上，所述导液槽体将第一反应膜和第二反应膜分隔在独立的导液槽内，第一反应膜设置在第一导液槽内，第二反应膜设置在第二导液槽内；固化层，所述固化层覆贴在导液槽体上，露出第一参比电极的第一引脚、第一工作电极的第二引脚、第二参比电极的第三引脚和第二工作电极的第四引脚；所述反应膜层包括至少一种电子介体，至少一种与被检测物质反应的酶；所述电子介体为铁氰化钾、亚铁氰化钾、二茂铁及其衍生物、钌的络合物或苯醌类化合物，电子介体的含量为3%（W/W）-20%（W/W）；酶的重量百分比含量为0.5%-2.0%。所述第一反应膜其中的酶为α-葡萄糖苷酶及葡萄糖氧化酶，电子介体为铁氰化钾；第二反应膜其中的酶为葡萄糖氧化酶，电子介体为铁氰化钾。所述的固化层为浆液中含有亲水材料的亲水膜。所述亲水材料为曲拉通-100或十二烷基硫酸钠或吐温-20。所述亲水膜中含有增稠剂。第一导液槽设有第一排气口，第二导液槽设有第二排气口。上述的快速测量淀粉酶的电化学试纸的制备方法，包括如下步骤：1）采用丝网印刷技术在0.20mm-0.30mm绝缘基片上印刷导电膜层，通过丝网印刷将导电油墨在绝缘基片上铺上分散均匀的油墨薄层后，放到75℃-85℃烘箱中烘干60min；2）通过喷酶机将第一反应膜层酶液喷涂到第一参比电极、第一工作电极上，接着通过喷酶机将反应膜层酶液喷涂到第二参比电极、第二工作电极上，然后，50℃烘干20min，备用，所取第一反应膜层酶液的各组分及其重量百分比见表1：表1第一反应膜层酶液的各组分及其重量百分比材料重量（w/v）淀粉2%α-葡萄糖苷酶0.5%葡萄糖氧化酶1%铁氰化钾10%羧甲基纤维素1%海藻糖1%柠檬酸缓冲液(pH=6.0)84.5%所取第二反应膜层酶液的各组分及其重量百分比见表2：表2第二反应膜层酶液的各组分及其重量百分比材料重量（w/v）葡萄糖氧化酶1%铁氰化钾10%羧甲基纤维素1%海藻糖1%柠檬酸缓冲液(pH=6.0)87%3）把导液槽体粘贴到绝缘基片；4）把含有亲水膜的固化层贴到导液槽体上，制作成淀粉酶试纸。还包括步骤5），将印有商标的上盖粘贴到亲水膜上。一种快速测量淀粉酶的电化学检测方法，包括上述的快速测量淀粉酶的电化学试纸，所述方法包括如下步骤：一、制作线性曲线图：采集新鲜静脉血液，调整红细胞压积比为40%，配制淀粉酶活性为10U/L，25U/L，50U/L，100U/L，250U/L，500U/L，1000U/L的血样；将所述快速测量淀粉酶的电化学试纸置于多参数分析仪中，并在工作电极和参比电极两端施加300mV工作电压；每个血样使用一片所述的快速测量淀粉酶的电化学试纸，分别取上述的血样加到采样口，通过虹吸作用自动吸取约5µL样品分别进入反应区1与第一反应膜、及反应区2与第二反应膜中的试剂反应，测量第一工作电极电流I1，电流I1包括淀粉酶分解底物形成的葡萄糖及样品中葡萄糖反应电流；测量第二工作电极电流I2，所述电流I2包括仅包含样品中葡萄糖反应电流；电流I1减去电流I2得到电流I3，I3即为样品中淀粉酶分解底物形成的葡萄糖反应电流，此电流的大小与样品中淀粉酶活性成正比；以淀粉酶活性为横坐标，电流为纵坐标，绘制出淀粉酶活性与电流I3的线性曲线图；淀粉酶活性与电流I3的线性关系见图2；二、测量未知样品的淀粉酶活性值：将所述快速测量淀粉酶的电化学试纸置于多参数分析仪中，并在工作电极和参比电极两端施加300mV工作电压；取未知样品加到采样口，通过虹吸作用自动吸取约5µL样品分别进入反应区1与第一反应膜、及反应区2与第二反应膜中的试剂反应，通过多参数分析仪测量第一工作电极电流I1，测量第二工作电极电流I2；电流I1减去电流I2得到电流I3；电流I3值对应的淀粉酶活性值可从上述线性曲线图中得出，从而得到未知样品的淀粉酶活性值。用上述方法定标，将得到的线性曲线输入到配套的多参数分析仪的存储设备中，未知样品的淀粉酶活性可以直接从多参数分析仪中读出。血浆或尿液中淀粉酶催化淀粉分子中α-1,4糖苷键水解产生麦芽糖，麦芽糖在α-葡萄糖苷酶催化下产生葡萄糖，葡萄糖与葡萄糖氧化酶及电子介体反应产生电流，测量淀粉酶催化淀粉所产生的葡萄糖的电流，即可定量测定样品中淀粉酶活性。血液包括血浆和血细胞，血浆呈淡黄色，半透明，血浆中含有大量的水（约占91%--92%），还含有蛋白质、葡萄糖、无机盐等，食物中的营本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种快速测量淀粉酶的电化学试纸，其特征在于，包括绝缘基片，以及设置在绝缘基片上的两个相互独立的检测体系，所述检测体系包括设置在绝缘基片中的导液槽体，所述导液槽体包括独立的第一导液槽和第二导液槽，第一导液槽设有第一进样口，第二导液槽设有第二进样口；还包括导电膜层，所述导电膜层设置在绝缘基片上，所述导电膜层包括相互绝缘的第一参比电极、第一工作电极、第二参比电极和第二工作电极；反应膜层，所述反应膜层包括第一反应膜和第二反应膜，第一反应膜覆盖于第一参比电极、第一工作电极上；第二反应膜覆盖于第二参比电极和第二工作电极上；所述导液槽体设置在导电膜层上，所述导液槽体将第一反应膜和第二反应膜分隔在独立的导液槽内，第一反应膜设置在第一导液槽内，第二反应膜设置在第二导液槽内；固化层，所述固化层覆贴在导液槽体上，露出第一参比电极的第一引脚、第一工作电极的第二引脚、第二参比电极的第三引脚和第二工作电极的第四引脚；所述反应膜层包括至少一种电子介体，至少一种与被检测物质反应的酶；所述电子介体为铁氰化钾、亚铁氰化钾、二茂铁及其衍生物、钌的络合物或苯醌类化合物，电子介体的含量为3%（W/W）‑20%（W/W）；酶的重量百分比含量为0.5%‑2.0%。...

【技术特征摘要】
1.一种快速测量淀粉酶的电化学试纸，其特征在于，包括绝缘基片，以及设置在绝缘基片上的两个相互独立的检测体系，所述检测体系包括设置在绝缘基片中的导液槽体，所述导液槽体包括独立的第一导液槽和第二导液槽，第一导液槽设有第一进样口，第二导液槽设有第二进样口；还包括导电膜层，所述导电膜层设置在绝缘基片上，所述导电膜层包括相互绝缘的第一参比电极、第一工作电极、第二参比电极和第二工作电极；反应膜层，所述反应膜层包括第一反应膜和第二反应膜，第一反应膜覆盖于第一参比电极、第一工作电极上；第二反应膜覆盖于第二参比电极和第二工作电极上；所述导液槽体设置在导电膜层上，所述导液槽体将第一反应膜和第二反应膜分隔在独立的导液槽内，第一反应膜设置在第一导液槽内，第二反应膜设置在第二导液槽内；固化层，所述固化层覆贴在导液槽体上，露出第一参比电极的第一引脚、第一工作电极的第二引脚、第二参比电极的第三引脚和第二工作电极的第四引脚；所述反应膜层包括至少一种电子介体，至少一种与被检测物质反应的酶；所述电子介体为铁氰化钾、亚铁氰化钾、二茂铁及其衍生物、钌的络合物或苯醌类化合物，电子介体的含量为3%（W/W）-20%（W/W）；酶的重量百分比含量为0.5%-2.0%。2.根据权利要求1所述的快速测量淀粉酶的电化学试纸，其特征在于，所述第一反应膜其中的酶为α-葡萄糖苷酶及葡萄糖氧化酶，电子介体为铁氰化钾；第二反应膜其中的酶为葡萄糖氧化酶，电子介体为铁氰化钾。3.根据权利要求1所述的快速测量淀粉酶的电化学试纸，其特征在于，所述的固化层为浆液中含有亲水材料的亲水膜。4.根据权利要求3所述的快速测量淀粉酶的电化学试纸，其特征在于，所述亲水材料为曲拉通-100或十二烷基硫酸钠或吐温-20。5.根据权利要求4所述的快速测量淀粉酶的电化学试纸，其特征在于，所述亲水膜中含有增稠剂。6.根据权利要求1所述的快速测量淀粉酶的电化学试纸，其特征在于，第一导液槽设有第一排气口，第二导液槽设有第二排气口。7.权利要求1-6任一项所述的快速测量淀粉酶的电化学试纸的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1）采用丝网印刷技术在0.20mm-0.30mm绝缘基片上印刷导电膜层，通过丝网印刷将导电油墨在绝缘基片上铺上分散均匀的油墨薄层后，放到75℃-85℃烘箱中烘干60min；2）通过喷酶机将第一反应膜层酶液喷涂到第一参比电极、第一工作电极上，接着通过喷酶...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁明龙，刘勤，伍寿胜，李中，廖姗，
申请(专利权)人：桂林中辉科技发展有限公司，桂林乐尔医疗器械有限公司，
类型：发明
国别省市：广西,45