一种灭活饲养细胞联合细胞因子刺激NK细胞扩增的方法技术

本发明专利技术的目的是提供一种新型灭活重组K562细胞联合细胞因子组合刺激NK细胞扩增的方法。本发明专利技术制备得到的NK细胞，具有很高的纯度和杀伤活性，经检测培养至14天时，NK细胞纯度达90％以上；当效靶比为10:1时，NK细胞对K562细胞的杀伤活性为80％以上。本发明专利技术制备的NK细胞增殖速度快，培养至14‑17天细胞扩增倍数达500以上，本发明专利技术制备的NK细胞有很好的靶向杀伤肿瘤细胞的效果。

【技术实现步骤摘要】
一种灭活饲养细胞联合细胞因子刺激NK细胞扩增的方法
本专利技术属于细胞培养
，具体涉及一种灭活饲养细胞联合细胞因子刺激NK细胞(Naturalkillercells)扩增的方法。
技术介绍
目前，癌症已经成为全球第一死亡原因。常规治疗癌症的手段有：手术、放疗和化疗三种方式。免疫细胞治疗是继手术、化疗和放疗之后的第四大治疗肿瘤的新方式，其能系统杀灭肿瘤细胞，有效抑制肿瘤细胞的转移，副反应小，临床效果好。免疫细胞治疗应用于临床的有DC细胞、CIK细胞、DC-CIK细胞和NK细胞。NK细胞是第三类淋巴细胞，不同于T/B淋巴细胞，无需抗原刺激即可发挥细胞毒效应，能自发溶解多种肿瘤细胞和被病毒感染的细胞，还可以分泌多种细胞因子和趋化因子参与免疫调节。NK细胞的免疫治疗在抗病毒，抗肿瘤的治疗中有着广泛的应用前景。近些年，临床上将NK细胞用于免疫治疗的例子在不断增多。目前，体外扩增NK系统主要通过以下三种方法：一是采用免疫磁珠的方法从PBMC中将NK细胞分离出来再培养；二是单纯的细胞因子组合刺激PBMC中NK细胞的扩增。三是采用饲养细胞(基因修饰)的方法培养PBMC中的NK细胞。采用饲养细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种灭活饲养细胞联合细胞因子刺激NK细胞扩增的方法，其特征在于，所述的方法包括如下步骤：1)配制次氯酸液用DPBS溶液将次氯酸钠溶液配制成浓度为60mM的次氯酸储存液；2)然后将次氯酸储存液加入到重组K562细胞中，吹打混匀，3)将细胞悬浮液放入37℃，5％CO2的二氧化碳培养箱中培养1小时，期间每30min吹打混匀一次，诱导饲养细胞氧化死亡；4)1小时以后，100g，5min离心收集细胞，用DPBS洗涤，培养基重悬制成灭活重组K562细胞；5)将分离的人外周血单核细胞用培养基重悬，按1:1的比例加入灭活重组K562细胞，10％的自体血浆，添加细胞因子组合IL‑2、CD16mAb和CD3m...

【技术特征摘要】
1.一种灭活饲养细胞联合细胞因子刺激NK细胞扩增的方法，其特征在于，所述的方法包括如下步骤：1)配制次氯酸液用DPBS溶液将次氯酸钠溶液配制成浓度为60mM的次氯酸储存液；2)然后将次氯酸储存液加入到重组K562细胞中，吹打混匀，3)将细胞悬浮液放入37℃，5％CO2的二氧化碳培养箱中培养1小时，期间每30min吹打混匀一次，诱导饲养细胞氧化死亡；4)1小时以后，100g，5min离心收集细胞，用DPBS洗涤，培养基重悬制成灭活重组K562细胞；5)将分离的人外周血单核细胞用培养基重悬，按1:1的比例加入灭活重组K562细胞，10％的自体血浆，添加细胞因子组合IL-2、CD16mAb和CD3mAb；PBMC的接种浓度范围为1x106cells/ml-1.5x106cells/m...

【专利技术属性】
技术研发人员：葛淑娟，徐矫健，刘燕丽，王玉娟，
申请(专利权)人：青岛麦迪赛斯生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37