一种产谷氨酸消旋酶的重组菌及其构建方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种产谷氨酸消旋酶的重组菌及其构建方法和应用，属于生物技术领域，所述重组菌包含藤黄轮丝链霉菌HY61的谷氨酸消旋酶基因MurI，载体为pET32a，宿主菌为E.coli BL21(DE3)，进而利用重组菌发酵的谷氨酸消旋酶催化L‑谷氨酸消旋生产DL‑谷氨酸，反应完成后，经过滤、脱色、等电结晶、抽虑、干燥得DL‑谷氨酸产品。本发明专利技术生产方法原料易得，生产工艺简单，反应条件温和，降低了DL‑谷氨酸的生产成本。

【技术实现步骤摘要】
一种产谷氨酸消旋酶的重组菌及其构建方法和应用
本专利技术涉及一种产谷氨酸消旋酶的重组菌及其构建方法和应用，属于生物

技术介绍
DL-谷氨酸主要用作食品鲜味料，也用作生化试剂和发酵用原料，也是氨基酸类药。同时DL-谷氨酸亦是拆分合成D-谷氨酸的重要原料。近年来，随着科学研究的深入和各种新药的开发，人们对非天然氨基酸的重要性有了深入的认识，DL-谷氨酸将在医药、食品、饲料及化工等领域广泛应用，市场前景良好。目前DL-谷氨酸主要以化学合成法进行制备，一种是在酸性或碱性条件下以水杨醛为催化剂高温高压催化消旋合成，另一种是在高温高压下脱水并消旋为DL-焦谷氨酸，再在酸性条件下水解为DL-谷氨酸。反应条件剧烈，反应时间长、能耗高，废水量大环境不友好。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题在于提供一种产谷氨酸消旋酶的重组菌及其构建方法和应用，所述方法通过构建一种产谷氨酸消旋酶的重组菌，利用该重组菌生产谷氨酸消旋酶，并利用所述谷氨酸消旋酶生产DL-谷氨酸的方法。本专利技术所采用的技术方案是：一种产谷氨酸消旋酶的重组菌，所述重组菌包含藤黄轮丝链霉菌HY61的谷氨酸消旋酶基因MurI，载体为p本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种产谷氨酸消旋酶的重组菌，其特征在于所述重组菌包含藤黄轮丝链霉菌HY61的谷氨酸消旋酶基因MurI，载体为pET32a，宿主菌为E.coli BL21(DE3)。

【技术特征摘要】
1.一种产谷氨酸消旋酶的重组菌，其特征在于所述重组菌包含藤黄轮丝链霉菌HY61的谷氨酸消旋酶基因MurI，载体为pET32a，宿主菌为E.coliBL21(DE3)。2.权利要求1所述重组菌的构建方法，其特征在于所述方法包括如下步骤：(1)克隆藤黄轮丝链霉菌HY61的谷氨酸消旋酶基因MurI，其核苷酸序列如SEQIDNo.1所示；(2)将SEQIDNo.1所示核苷酸序列与载体pET32a双酶切并连接，筛选阳性克隆得到重组载体pET32a-MurI；(3)将重组载体pET32a-MurI转化到宿主菌E.coliBL21(DE3)中，得到产谷氨酸消旋酶的重组菌E.coliBL21(DE3)/pET32a-MurI。3.利用权利要求1或2所述重组菌发酵生产谷氨酸消旋酶的方法，所述方法具体步骤如下：(1)将构建的重组菌接入LB斜面培养基，37℃培养14～24h；(2)将斜面培养基培养的重组菌接种于LB液体种子培养基，37℃、200r/min振荡培养6～12h；(3)发酵罐中装入发酵培养基，种子液以体积比5～10％种量接入发酵培养基，初始转速200r/min，初始通气流量为1.5L/min，维持溶氧值在20％以上，调节pH值稳定在7.0，37℃培养6～10h后降温至24～30℃表达；发酵过程中维持葡萄糖浓度在3～5g/L；发酵结束后8000r/min、4℃离心10min收集菌体，无菌生理盐水洗涤菌体两次。4.利用权利要求3所述步骤生产的谷氨酸消旋酶转化L-谷氨酸生产DL-谷氨酸的方法，具体步骤如下：将菌体投入转化液中进行转化，其转化条件为...

【专利技术属性】
技术研发人员：冯志彬，张娟，
申请(专利权)人：鲁东大学，
类型：发明
国别省市：山东,37