异嗜性抗体阻断剂HBR-6及其制备方法技术

本发明专利技术提出一种异嗜性抗体阻断剂HBR‑6，包括其可变区的氨基酸序列和核苷酸序列，其中，重链的3个互补决定区CDR序列分别为，CDR1：Phe‑Thr‑Ala‑Asp‑Thr‑Ser‑Ser，CDR2：Glu‑Asp‑Asp‑Pro，CDR3：Val‑Leu‑Asp‑Ser‑Asp‑Gly‑Ser‑Tyr；轻链的3个互补决定区CDR序列分别为，CDR1：Asn‑Ile‑Pro‑Lys‑Leu‑Leu‑Ile‑Tyr，CDR2：Ile‑Val‑Met‑Thr，CDR3：Gln‑Gly‑Glu‑Asp‑Ile‑Ala‑Thr‑Tyr‑Arg，具备良好的亲和性。同时本发明专利技术还提出了异嗜性抗体阻断剂HBR‑6的制备方法。

【技术实现步骤摘要】
异嗜性抗体阻断剂HBR-6及其制备方法
本专利技术属于生物医学
，尤其是一种异嗜性抗体阻断剂HBR-6及其制备方法。
技术介绍
阻断剂，也叫受体拮抗剂，指能与受体结合，并能阻止激动剂产生效应的一类配体物质。拮抗剂对相应受体有亲和性，但没有效能，从而抑制了激动剂对受体的作用。拮抗剂可以结合受体的活性位点，也可以结合别构位点，甚至单独结合通常没有生物调节作用的位点来达到效果。拮抗剂和受体结合性质不同，所以结合时间有长有短，结合的可逆性也有不同。拮抗剂分为竞争性拮抗剂和非竞争性拮抗剂等类型。大部分药物拮抗剂都与内源性配体或底物竞争受体结合位点来达到效果。受体是可被配体结合而激活的大型蛋白质分子。受体可以结合在细胞膜上，也可存在于细胞内部，比如在细胞核或线粒体中。受体在活性位点与配体以非共价键结合，一个受体上可以有多个结合不同配体的位点。配体和受体在活性位点或别构位点结合后，都可以调节受体的活性。拮抗剂可以通过结合活性位点、别构位点，或者单独结合通常不参与生物调节的位点来产生效果。
技术实现思路
本专利技术所解决的技术问题在于提供一种异嗜性抗体阻断剂HBR-6，包括其可变区的氨基酸序列和核苷酸序列，具备良好的亲和性。实现本专利技术目的的技术解决方案为：异嗜性抗体阻断剂HBR-6，包括重链和轻链，其中，重链的3个互补决定区CDR序列分别为，CDR1：Phe-Thr-Ala-Asp-Thr-Ser-Ser，CDR2：Glu-Asp-Asp-Pro，CDR3：Val-Leu-Asp-Ser-Asp-Gly-Ser-Tyr；轻链的3个互补决定区CDR序列分别为，CDR1：Asn-Ile-Pro-Lys-Leu-Leu-Ile-Tyr，CDR2：Ile-Val-Met-Thr，CDR3：Gln-Gly-Glu-Asp-Ile-Ala-Thr-Tyr-Arg。进一步的，本专利技术的异嗜性抗体阻断剂HBR-6，所述重链可变区氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。进一步的，本专利技术的异嗜性抗体阻断剂HBR-6，所述轻链可变区氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。进一步的，本专利技术的异嗜性抗体阻断剂HBR-6，所述重链可变区核苷酸序列如SEQIDNO.3所示。进一步的，本专利技术的异嗜性抗体阻断剂HBR-6，所述轻链可变区核苷酸序列如SEQIDNO.4所示。本专利技术还提出异嗜性抗体阻断剂HBR-6的制备方法，包括以下步骤：步骤1：采用33％-50％硫酸铵纯化抗体；步骤2：进行戊二醛交联；步骤3：对抗体进行处理；步骤4：配制试剂：透析缓冲液和饱和硫酸铵。本专利技术采用以上技术方案与现有技术相比，具有以下技术效果：本专利技术筛选出异嗜性抗体阻断剂HBR-6，并获得其重链和轻链可变区，测序后得到其独特的核苷酸序列，具有良好的亲和性。附图说明图1是本专利技术的亲和力数据结果图。具体实施方式下面详细描述本专利技术的实施方式，所述实施方式的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施方式是示例性的，仅用于解释本专利技术，而不能解释为对本专利技术的限制。实施例1异嗜性抗体阻断剂HBR-6，包括重链和轻链，其中，重链的3个互补决定区CDR序列分别为，CDR1：Phe-Thr-Ala-Asp-Thr-Ser-Ser，CDR2：Glu-Asp-Asp-Pro，CDR3：Val-Leu-Asp-Ser-Asp-Gly-Ser-Tyr；轻链的3个互补决定区CDR序列分别为，CDR1：Asn-Ile-Pro-Lys-Leu-Leu-Ile-Tyr，CDR2：Ile-Val-Met-Thr，CDR3：Gln-Gly-Glu-Asp-Ile-Ala-Thr-Tyr-Arg。重链可变区氨基酸序列如SEQIDNO.1所示，轻链可变区氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。重链可变区核苷酸序列如SEQIDNO.3所示，轻链可变区核苷酸序列如SEQIDNO.4所示。如图1所示，异嗜性抗体阻断剂HBR-6具备良好的亲和力，与其他阻断剂相比如下表所示：表1异嗜性抗体阻断剂HBR-6的制备方法具体包括以下步骤：步骤1：采用33％-50％硫酸铵纯化抗体；步骤2：进行戊二醛交联；步骤3：对抗体进行处理；步骤4：配制试剂：透析缓冲液和饱和硫酸铵。实施例2异嗜性抗体阻断剂HBR-6的制备方法如下：一、33％-50％硫酸铵纯化抗体1)脱脂棉过滤M0102腹水，量取过滤后的腹水体积，加入等体积0.01MPBS(pH7.4)，混匀，在慢速搅拌状态下用量筒缓慢匀速倒入二倍腹水体积的饱和硫酸铵溶液，此时硫酸铵饱和度为50％；2)磁力搅拌器上中速搅拌5min，混匀，4℃静置1h；3)混匀分装入离心杯，配平，10000r/min，4℃离心25min；4)弃上清，沉淀用原两倍腹水体积0.01MPBS(pH7.4)重悬溶解，用0.01MPBS(pH7.4)进行透析(透析液≥10L/次)，期间换液三次，换液时间不少于4小时；5)解透析袋，将抗体转移至烧杯，在缓慢搅拌状态下用量筒缓慢匀速倒入原腹水体积的饱和硫酸铵溶液，此时硫酸铵饱和度约为33％；6)磁力搅拌器上中速搅拌5min，混匀，4℃静置1h；7)混匀分装入离心杯，配平，12000r/min，4℃离心25min；8)弃上清，沉淀用原腹水体积1/2的0.01MPBSpH7.4溶解，用0.01MPBS(pH7.4)进行透析(透析液≥10L/次)，期间换液3次，换液时间不少于4小时；9)收集抗体，观察是否有沉淀。9-1)有沉淀的样品用快速滤纸过滤去除沉淀，量取抗体体积；9-2)无沉淀的抗体，直接量取抗体体积。轻轻混匀抗体，使用微量紫外分光光度计测定A280nm的蛋白含量，并记录测量值；10)用0.01MPBS(pH7.4)稀释至17mg/ml，使用微量紫外分光光度计测定抗体浓度(A280模式测)，并记录测量结果，准备进行戊二醛交联。二、戊二醛交联1)量取上一步纯化得到的抗体(抗体浓度为：17mg/ml)体积，倒入烧杯中，置于冰浴1h；2)将冰浴放在在磁力搅拌器上(在交联过程中始终保持冰量没过抗体液面)，边快速搅拌边加入25％戊二醛(250mg/ml)至终浓度为0.4mg/ml，加入时间约20S；3)继续冰浴慢速搅拌10min；4)在快速搅拌下，均匀加入甘氨酸(2M)至终浓度为0.01M，慢速搅拌30min。5)样品0.01MPBS(pH7.4)缓冲液透析(透析液≥10L/次)，期间换液二次，换液时间不少于6小时；6)解透析袋，样品5500r/min，4℃离心18min，取上清，使用紫外分光光度计测定抗体浓度，并记录测量结果。三、抗体处理慢速滤纸过滤，使用紫外分光光度计OD280nm检测抗体浓度，用0.01MPBS(pH7.4)缓冲液稀释至10mg/ml，加入总体积2％甘油甘油，再加入总体积0.1％Proclin300，-20℃保存。四、试剂配制1)透析缓冲液：10mMPBS(pH7.4)品名原料来源1L标准量磷酸氢二钠北京益利2.87g磷酸二氢钠北京益利0.31g氯化钠北京益利9g超纯水自制，质检合格定容至1L用电子天平称取上述试剂，倒入1L烧杯中，再加入适量超纯水，搅拌溶解，用2.5MNaoH调pH至7.4，定容至本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.异嗜性抗体阻断剂HBR‑6，其特征在于，包括重链和轻链，其中，重链的3个互补决定区CDR序列分别为，CDR1：Phe‑Thr‑Ala‑Asp‑Thr‑Ser‑Ser，CDR2：Glu‑Asp‑Asp‑Pro，CDR3：Val‑Leu‑Asp‑Ser‑Asp‑Gly‑Ser‑Tyr；轻链的3个互补决定区CDR序列分别为，CDR1：Asn‑Ile‑Pro‑Lys‑Leu‑Leu‑Ile‑Tyr，CDR2：Ile‑Val‑Met‑Thr，CDR3：Gln‑Gly‑Glu‑Asp‑Ile‑Ala‑Thr‑Tyr‑Arg。

【技术特征摘要】
1.异嗜性抗体阻断剂HBR-6，其特征在于，包括重链和轻链，其中，重链的3个互补决定区CDR序列分别为，CDR1：Phe-Thr-Ala-Asp-Thr-Ser-Ser，CDR2：Glu-Asp-Asp-Pro，CDR3：Val-Leu-Asp-Ser-Asp-Gly-Ser-Tyr；轻链的3个互补决定区CDR序列分别为，CDR1：Asn-Ile-Pro-Lys-Leu-Leu-Ile-Tyr，CDR2：Ile-Val-Met-Thr，CDR3：Gln-Gly-Glu-Asp-Ile-Ala-Thr-Tyr-Arg。2.根据权利要求1所述的异嗜性抗体阻断剂HBR-6，其特征在于，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：李永刚，李双林，王玉婷，吴德风，
申请(专利权)人：南京京达生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32