一种红树内生真菌中异香豆素类化合物及其制备方法与应用技术

本发明专利技术涉及一种红树内生真菌中异香豆素类化合物及其制备方法与应用，所述异香豆素类化合物具有化合物1‑8所示的结构：

【技术实现步骤摘要】
一种红树内生真菌中异香豆素类化合物及其制备方法与应用
本专利技术属于红树内生真菌次级代谢产物领域，具体涉及一种红树内生真菌中异香豆素类化合物及其制备方法与应用。
技术介绍
海洋来源的内生真菌结构新颖活性独特的化合物重要来源之一。近年来，一些新的活性化合物已经从真菌Penicillum中分离得到，例如：抗炎活性化合物chrysogenester，细胞毒的化合物penicimenolidesB-D和penitalarinsA-C，具有杀毒活性的化合物simpterpenoidA，抗真菌化合物brocapyrrozinA。前期研究发现内生真菌Penicillum乙酸乙酯粗提物具有一定的抗菌活性。
技术实现思路
本专利技术所述的红树内生真菌(Penicillum，以下简称TGM112)分离自红树尖瓣海莲，其菌种保藏信息：保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；保藏日期：2018年11月9日；保藏编号：CGMCCNo.16499；分类命名：青霉Penicilliumsp.。本专利技术提供一种异香豆素类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于所述异香豆素类化合物具有化合物1-8所示的结构：本专利技术的另一实施方案，提供一种同时制备化合物1-8的制备方法，其特征在于包括如下步骤：(1)配制种子培养基，将TGM112菌株接入种子培养基，26～28℃，培养3～4天得种子培养液；(2)将步骤(1)得到的种子培养液接入发酵培养基中，26～28℃静置培养21～24天得发酵物；(3)将步骤(2)得到的发酵物中的发酵液和菌体分离，发酵液和菌体分别用等体积的乙酸乙酯萃取3～5次，合并萃取液后减压浓缩得到浸膏；(4)步骤(3)得到的浸膏经过减压硅胶柱层析，采用石油醚-乙酸乙酯按100:0、90:10、80:20、70:30、60:40，50:50、40:60、30:70、20:80、10:90、0:100梯度洗脱，每个梯度收集两个柱体积，其中20:80梯度洗脱得到的馏分浓缩后经SephadexLH-20凝胶柱层析，洗脱剂为甲醇：氯仿＝1:1，再经高效液相色谱HPLC制备，色谱柱为AgilentC18,9.4×250mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为CH3CN:H2O＝45:55，最终得到化合物1、化合物4、化合物5、化合物6和化合物7；其中0:100梯度得到的馏分浓缩后经SephadexLH-20凝胶柱层析，洗脱剂为甲醇：氯仿＝1:1，再经高效液相色谱HPLC制备，色谱柱为AgilentC18,9.4×250mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为MeOH:H2O＝45:55最终得到化合物2、化合物3和化合物8。其中所述洗脱剂或流动相的比例均为体积比；所述种子培养基中含有葡萄糖1.5％–3.0％、酵母膏0.1％–0.5％、蛋白胨0.1％–0.5％、粗海盐0.11％–0.6％、适量的水；所述发酵培养基中含有葡萄糖1.6％–3.5％、酵母膏0.1％–0.5％、蛋白胨0.1％–0.5％、粗海盐0.11％–0.6％、适量的水；上述百分比均为重量百分比；所述种子培养基和发酵培养基均需120℃灭25–30分钟。本专利技术提供一种药物组合物，其特征在于以本专利技术上述化合物1-8(尤其是化合物1、2、5、6、8)或其药学上可接受的盐作为活性成分。本专利技术提供的上述药物组合物，还可包含其他杀虫药物；也可以包含药学上可接受的辅料(优选药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂)。上述药物组合物的剂型可以是固体制剂、半固体制剂或液体制剂。本专利技术的另一实施方案提供化合物1-8(尤其是化合物1、2、5、6、8)或其药学上可接受的盐在制备杀虫剂中的用途。尤其是在制备杀棉铃虫药物中的应用。本专利技术中术语“药学上可接受的盐”是指非毒性的无机或有机酸和/或碱的加成盐，可参见“Saltselectionforbasicdrugs”,Int.J.Pharm.(1986),33,201–217。附图说明图1是化合物1、2的ECD谱图；图2是化合物3-7的ECD谱图；图3是化合物8的ECD谱图。具体实施方式为了便于对本专利技术的进一步理解，下面提供的实施例对其做了更详细的说明。但是这些实施例仅供更好的理解专利技术而并非用来限定本专利技术的范围或实施原则，本专利技术的实施方式不限于以下内容。实施例1(1)TGM112的菌种培养配制种子培养基：葡萄糖80g，蛋白胨8g，酵母膏8g，粗海盐10g，水4.0L，平均分装于8个1000mL锥形瓶，120℃灭25–30分钟。将TGM112菌株接入配制好的种子培养基中，于26～28℃下，培养3天得种子培养液；(2)TGM112的发酵配制发酵培养基：葡萄糖1.1kg，蛋白胨100g，酵母膏100g，海盐125g，水50L，平均分装于75个1000mL锥形瓶中，120℃灭25–30分钟。取适量的步骤(1)中得到的种子培养液接入装有发酵培养基的锥形瓶中，于26～28℃静置培养21天得发酵物。(3)浸膏的制备将步骤(2)得到的发酵物中的发酵液和菌体分离，发酵液和菌体分别用等体积的乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液后减压浓缩得到浸膏；(4)化合物1-8的提取分离步骤(3)得到的浸膏经过减压硅胶柱层析，采用石油醚-乙酸乙酯按100:0、90:10、80:20、70:30、60:40，50:50、40:60、30:70、20:80、10:90、0:100梯度洗脱，每个梯度收集两个柱体积，其中20:80梯度洗脱得到的馏分浓缩后经SephadexLH-20凝胶柱层析，洗脱剂为甲醇：氯仿＝1:1，再经高效液相色谱HPLC制备，色谱柱为AgilentC18,9.4×250mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为CH3CN:H2O＝45:55，最终得到化合物1(12.4mg)、化合物4(15.3mg)、化合物5(18.2mg)、化合物6(9.6mg)和化合物7(14.2mg)；其中0:100梯度得到的馏分浓缩后经SephadexLH-20凝胶柱层析，洗脱剂为甲醇：氯仿＝1:1，再经高效液相色谱HPLC制备，色谱柱为AgilentC18,9.4×250mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为MeOH:H2O＝45:55最终得到化合物2(14.8mg)、化合物3(11.6mg)和化合物8(16.4mg)。化合物1-8的1H和13C-NMR(400/100MHz,aCD3OD.bDMSO-d6)数据如下表1、表2。表1化合物1-8的1H-NMR(400MHz,aCD3OD.bDMSO-d6)数据(ppm)表2化合物1-8的1H-NMR(100MHz,aCD3OD.bDMSO-d6)数据(ppm)实施例2(1)TGM112的菌种培养配制种子培养基(10.0L)：葡萄糖1.5％(重量百分比，下同)、酵母膏0.5％、蛋白胨0.1％、粗海盐0.11％，其余为水；平均分装于16个1000mL锥形瓶，120℃灭25–30分钟。将TGM112菌株接入配制好的种子培养基中，于26～28℃下，培养4天得种子培养液；(2)TGM112的发酵配制发酵培养基(100L)：葡萄糖1.6％(重量百分比，下同)、酵母膏0.5％、蛋白胨0本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种异香豆素类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于所述异香豆素类化合物具有化合物1‑8所示的结构：

【技术特征摘要】
1.一种异香豆素类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于所述异香豆素类化合物具有化合物1-8所示的结构：2.一种同时制备权利要求1所述的异香豆素类化合物1-8的制备方法，其特征在于包括如下步骤：(1)配制种子培养基，将TGM112菌株接入种子培养基，26～28℃，培养3～4天得种子培养液；(2)将步骤(1)得到的种子培养液接入发酵培养基中，26～28℃静置培养21～24天得发酵物；(3)将步骤(2)得到的发酵物中的发酵液和菌体分离，发酵液和菌体分别用等体积的乙酸乙酯萃取3～5次，合并萃取液后减压浓缩得到浸膏；(4)步骤(3)得到的浸膏经过减压硅胶柱层析，采用石油醚-乙酸乙酯按100:0、90:10、80:20、70:30、60:40，50:50、40:60、30:70、20:80、10:90、0:100梯度洗脱，每个梯度收集两个柱体积，其中20:80梯度洗脱得到的馏分浓缩后经SephadexLH-20凝胶柱层析，洗脱剂为甲醇：氯仿＝1:1，再经高效液相色谱HPLC制备，色谱柱为AgilentC18,9.4×250mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为CH3CN:H2O＝45:55，最终得到化合物1、化合物4、化合物5、化合物6和化合物7；其中0:100梯度得到的馏分浓缩后经SephadexLH-20凝胶柱层析，洗脱剂为甲醇：氯仿＝1:...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑彩娟，黄国雷，白猛，陈光英，王斌，
申请(专利权)人：海南师范大学，
类型：发明
国别省市：海南,46