细胞制品中真菌污染检测的通用引物、试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术公开了一种细胞制品中真菌污染检测的通用引物、试剂盒及检测方法，其中通用引物包括用以扩增真菌rDNA的上游引物和下游引物，所述上游引物和下游引物序列与真菌26S rDNA序列的保守区域互补，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。实验证明，利用本发明专利技术所提供的引物对待测样本进行荧光定量PCR检测，极大提高了真菌检测的通用性；同时也可避免检测目的片段与细胞制品中含有的人基因组序列的同源性，为细胞产品早期的检测提供了快速准确的方法。本发明专利技术的检测方法操作简单，无需复杂的核酸提取过程，只需将细胞制品中污染的真菌通过短暂离心富集后用裂解液裂解即可作为模板进行定量PCR检测，能够在3小时内完成细胞制品中常见真菌的检测。

【技术实现步骤摘要】
细胞制品中真菌污染检测的通用引物、试剂盒及检测方法
本专利技术属于微生物检测
，具体涉及一种细胞制品中真菌污染检测的通用引物、试剂盒及检测方法。
技术介绍
近年来，随着细胞疗法研究的迅速发展，体外的细胞培养已成为细胞治疗过程中的一个重要环节。在细胞培养过程中，细菌、真菌以及支原体等的污染严重影响了细胞生长。按照2015年版《中国药典》的无菌检查法，供试品的无菌检查需要在规定的培养基和适宜的温度下培养14天，在实验过程中需要做好各项实验对照，同时实验要求较为严格，并且在培养过程中每日观察并记录培养的平皿中是否有真菌生长。药典中的检测方法在检测时间上要求的时间较长，待到培养法检测得出结论时，细胞培养过程中也早已能够观察出来。因此，需要一种快速灵敏的方式来检测细胞培养过程中是否存在真菌污染。实时荧光定量PCR技术作为一种新兴的检测手段，其在检测过程中具灵敏度高、重复性好、检测时间短等优点，已逐渐被应用到病原菌检测中。真菌基因组中编码核糖体RNA的基因有4种，26SrDNA、5SrDNA、18SrDNA和5.8SrDNA。26S在结构上分为保守区和高变区，保守区反映生物物种间的亲缘关系本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于细胞制品中真菌污染检测的通用引物组，其特征在于，包括用以扩增真菌rDNA的上游引物和下游引物，所述上游引物和下游引物序列与真菌26S rDNA序列的保守区域互补，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。

【技术特征摘要】
1.一种用于细胞制品中真菌污染检测的通用引物组，其特征在于，包括用以扩增真菌rDNA的上游引物和下游引物，所述上游引物和下游引物序列与真菌26SrDNA序列的保守区域互补，其核苷酸序列如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示。2.根据权利要求1所述的一种用于细胞制品中真菌污染检测的通用引物组，其特征在于，组成所述引物组的两条单链DNA分子的摩尔比为1：1。3.用于检测细胞制品中真菌污染的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含有权利要求1-2任一项所述的通用引物组和PCR预混液。4.根据权利要求3所述的一种用于检测细胞制品中真菌污染的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括标准品，所述标准品序列如SEQIDNO.3所示。5.权利要求1-2任一项所述的通用引物，或权利要求3-4任一项所述的试剂盒在细胞培养液、细胞培养基真菌污染检测中的应用。6.一种细胞制品中真菌污染的快速检测方法，其特征在于，包括(1)以带有标准序列的质粒为模板进行荧光定量PCR，建立标准曲线，所述标准序列如SEQIDNO.3所示，所述荧光定量PCR的上下游引物核苷酸序列如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示；(2)供试品处理，获得荧光定量PCR供试品模板；(3)扩增检测：以步骤(2)中的模板为扩增模板进行荧光定量P...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡萌，毛伟兵，魏君，
申请(专利权)人：武汉睿健医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北,42