【技术实现步骤摘要】
一种同时检测番茄抗病基因Sw-5和I-2的多重PCR方法
本专利技术涉及生物检测
，具体涉及一种同时检测番茄抗病基因Sw-5和I-2的多重PCR方法。
技术介绍
番茄（Lycopersicon.esculentumMill）是世界上最主要的蔬菜作物之一，在我国各地广泛种植。番茄以味美、营养丰富著称，在人们的饮食结构中占重要地位。然而，番茄病害种类繁多，世界上发生较严重的番茄病害就有40多种，在我国普遍发生的也有十几种。近年来，随着栽培面积的增加和栽培形式的多样化，我国番茄病害日益严重。番茄斑萎病毒病是由布尼亚病毒科（Bunyaviridae）番茄斑萎病毒属（Tospovirus）的番茄斑萎病毒（Tomatospottedwiltvirus,TSWV）引起的。通过蓟马传播。番茄斑萎病毒还可以通过汁液摩擦接种、嫁接等途径传播，但是日常的接触以及种子不能传播该病毒。目前在不同番茄材料上鉴定出的抗番茄斑萎病毒的基因有Sw-1a、Sw-1b、Sw-2、Sw-3、Sw-4、Sw-5、Sw-6和Sw-7。其中Sw-5在番茄育种实践中被认为是抗番茄斑萎病毒病的主效基因，是目...
【技术保护点】
1.一种同时检测番茄抗病基因Sw‑5和I‑2的多重PCR方法，其特征在于：其包括以下步骤，（1）引物设计，I‑2引物为：I‑2 F：5’‑CAAGGAACTGCGTCTGTCTG‑3’；I‑2 R：5’‑ATGAGCAATTTGTGGCCATG‑3’；Sw‑5引物为：Sw‑5 F：5’‑AAT TAG GTT CTT GAA GCC CAT CT‑3’；Sw‑5 R：5’‑TTC CGC ATC AGC CAA TAG TGT‑3’；（2）采用CTAB法，从番茄叶中提取待检测番茄叶DNA；（3）以步骤（2）提取获得的DNA为模板，利用I‑2和Sw‑5的引物，通过建立的多重P...
【技术特征摘要】
1.一种同时检测番茄抗病基因Sw-5和I-2的多重PCR方法，其特征在于：其包括以下步骤，（1）引物设计，I-2引物为：I-2F：5’-CAAGGAACTGCGTCTGTCTG-3’；I-2R：5’-ATGAGCAATTTGTGGCCATG-3’；Sw-5引物为：Sw-5F：5’-AATTAGGTTCTTGAAGCCCATCT-3’；Sw-5R：5’-TTCCGCATCAGCCAATAGTGT-3’；（2）采用CTAB法，从番茄叶中提取待检测番茄叶DNA；（3）以步骤（2）提取获得的DNA为模板，利用I-2和Sw-5的引物，通过建立的多重PCR反应体系，对待测样品进行多重PCR扩增；（4）将PCR产物进行1.5％琼脂糖凝胶电泳，采用凝胶成像系统成像。2.根据权利要求1所述的一种同时检测番茄抗病基因Sw-5和I-2的多重PCR方法，其特征在于：步骤（2）中，具体操作步骤如下：（1）称取1g的番茄叶，去除中脉，放置于已经高温灭菌后的研钵中;（2）对步骤（1）中的研钵中的番茄叶研磨，待番茄叶变为淡绿色粉末状时，迅速将其装入5mL离心管中;（3）向步骤（2）的5mL离心管中加入200μL的β-巯基乙醇和3mL的CTAB提取液并震荡使其均匀混合，其中CTAB提取液提前放置于65℃水浴锅中进行预热;（4）将步骤（3）5mL离心管放入65℃恒温水浴锅1h，并每隔10min摇一次，充分混匀;（5）将步骤（4）的离心管置于离心机中，离心机设置：12000r/min，离心10min；（6）取上清溶液，置于另外一个5mL的离心管中，加入与本步骤取用的上清溶液体积相等的酚：氯仿：异戊醇，酚：氯仿：异戊醇为体积比25：24：1，上下颠倒混匀至少10min；（7）将步骤（6）得到的离心管置于离心机中，离心机设置：12000r/min，离心10min；（8）吸取上清液置于另外一个5mL离心管中，加入氯仿：异戊醇，所述氯仿：异戊醇的总体积与该上清液体积相等，氯仿和异戊醇的体积比为24:1，上下颠倒混匀至少10min；（9）将步骤（8）的离心管置于离心机中，离心机设置：12000r/min，离心10min；（10）取上清溶液并加入另一个的离心管中，加入该上清溶液1.5倍体积的异丙醇，混匀，于-20℃放置30min，所述异丙醇提前在-20℃下预冷;（11）取出离心管，置于离心机中，离心机设置：12000r/min，离心10min;（12）弃上清液，用体积分数为70%乙醇洗涤所得白色沉淀三次，此沉淀即为DNA;（13）用无水乙醇冲洗步骤（12）得到的沉淀并晾干后，加入0.2mL的TE溶解DNA，所述TE中含有0.4μL、10...
【专利技术属性】
技术研发人员：宋建军，孙功，李振侠，
申请(专利权)人：河北科技大学，
类型：发明
国别省市：河北,13
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