一种HPLC法分离测定度他雄胺原料药及制剂中降解杂质的方法技术

本发明专利技术具体涉及一种采用高效液相色谱法分离和测定度他雄胺原料药及制剂中降解杂质的方法，该杂质是在强制降解条件下生成。本发明专利技术的方法采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，用流动相A和流动相B进行线性梯度洗脱。由于目前各国药典上均未有度他雄胺软胶囊质量标准，也没有相关的任何文献或者标准报道，因此该套HPLC法为完全自建的一套方法，本发明专利技术摸索了检测波长、稀释剂质量浓度等条件确定出一套适合该物质检测的方法。该方法在检测时干扰小，且专属性好，重现性好，准确度高，对度他雄胺软胶囊的质量控制能起到提供技术支持的作用。

【技术实现步骤摘要】
一种HPLC法分离测定度他雄胺原料药及制剂中降解杂质的方法
本专利技术属于分析化学领域，具体涉及一种采用高效液相色谱法分离和测定度他雄胺原料药及制剂中降解杂质的方法。
技术介绍
度他雄胺是一种白色结晶固体的化学品，其分子式为C27H30F6N2O2，临床上主要用于治疗前列腺肿大、男性型脱发、脂溢性脱发和遗传性脱发。度他雄胺的结构式如下：2,5-二三氟甲基苯胺为度他雄胺软胶囊在强酸、强碱、高温条件下生成的降解杂质，也是合成度他雄胺时的起始原料，其分子式为C8H5F6N，结构式如下：经查询，目前各国药典上均未有度他雄胺软胶囊质量标准，也没有相关的任何文献或者标准报道。按照进口质量标准JX20130056有关物质方法进行检测，主成分峰相对保留时间约6.5min，而降解杂质2,5-二三氟甲基苯胺出峰时间约为5min，位于大量辅料峰的中间，干扰明显，故进口标准不适用于本降解杂质的检测。因此需要开发一套能准确检测该杂质含量且不受干扰的方法，对度他雄胺软胶囊的质量控制能起到提供技术支持的作用。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种采用高效液相色谱法分离和测定度他雄胺原料药及制剂中2,5-二三氟甲基苯胺的方法。为实现上述目的，本专利技术的技术方案为：一种HPLC法分离测定度他雄胺原料药及制剂中降解杂质的方法，该方法采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，用乙腈-水-三氟乙酸的混合液作为流动相A和用甲醇作为流动相B进行梯度洗脱，进入检测器检测；所述降解杂质为2,5-二三氟甲基苯胺，结构式如下：本专利技术中采用的色谱柱规格为Kromasil100-5C18，250mm×4.6mm，5μm，或其他性能相当的色谱柱。进一步，动相A中乙腈、水、三氟乙酸的体积比为500-520:450-480:0.2-0.3，作为一种优选为520:480:0.25。进一步，检测器的检测波长为300-320nm，作为一种优选，本专利技术的检测波长为310nm；检测柱温为35℃。进一步，梯度洗脱条件为：0min，流动相A与流动相B的体积比为70：30；13min，流动相A与流动相B的体积比为70：30；15min，流动相A与流动相B的体积比为10：90；30min，流动相A与流动相B的体积比为10：90；31min，流动相A与流动相B的体积比为70：30；40min，流动相A与流动相B的体积比为70：30；梯度洗脱的流速为1.0ml/min。进一步，根据以上描述的方法，具体检测包括以下步骤：1)取度他雄胺样品，加稀释剂溶解稀释制得样品溶液；2)取2,5-二三氟甲基苯胺对照品，加稀释剂溶解稀释制成每1ml中约含0.75μg和0.25μg的溶液，分别作为对照品溶液和灵敏度测试溶液；3)取灵敏度测试溶液50μl，注入色谱仪，记录色谱图，主峰的信噪比应不小于10；再取供试品溶液和对照品溶液各50μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，2,5-二三氟甲基苯胺与相邻峰的分离度应大于1.5，理论塔板数按2,5-二三氟甲基苯胺计应不低于3000。4)2,5-二三氟甲基苯胺的出峰时间应不小于10min且不大于13min。进一步，以上方法中所用的稀释剂为质量浓度为70％-90％的乙腈水溶液，作为一种优选为70％的乙腈水溶液。本专利技术还提供一种HPLC法分离测定度他雄胺软胶囊在强制降解条件下产生的杂质的方法，包括在强制降解条件为5mol/l硫酸溶液、5mol/l氢氧化钠溶液、高温80℃30min条件下产生的杂质，该方法采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(Kromasil100-5C18，250mm×4.6mm，5μm，或其他性能相当的色谱柱)，采用流动相A和流动相B进行梯度洗脱，所述流动相A为乙腈-水-三氟乙酸的混合液，流动相B为甲醇。进一步，流动相A中乙腈、水、三氟乙酸的体积比500-520:450-480:0.2-0.3；作为一种优选的体积比为520:480:0.25。进一步，梯度洗脱条件为：0min，流动相A与流动相B的体积比为70：30；13min，流动相A与流动相B的体积比为70：30；15min，流动相A与流动相B的体积比为10：90；30min，流动相A与流动相B的体积比为10：90；31min，流动相A与流动相B的体积比为70：30；40min，流动相A与流动相B的体积比为70：30。进一步，检测器的检测波长为300-320nm，作为一种优选，本专利技术的检测波长为310nm。一种采用十八烷基硅烷键合硅胶、乙腈-水-三氟乙酸混合液和甲醇水溶液在HPLC法中分离测定2,5-二三氟甲基苯胺的应用，其特征在于，该HPLC法中采以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱、乙腈-水-三氟乙酸的混合液作为流动相A、用甲醇作为流动相B进行梯度洗脱；所述乙腈-水-三氟乙酸的混合液的体积比为乙腈:水:三氟乙＝500-520:450-480:0.2-0.3。本专利技术的有益效果在于：1)本专利技术自建了一套HPLC方法检测度他雄胺软胶囊中2,5-二三氟甲基苯胺的含量，该方法在测定时，度他雄胺、BHT、各已知杂质和空白辅料均不干扰2,5-二三氟甲基苯胺测定。2)经验证，该方法专属性好，重现性好，准确度高，对度他雄胺软胶囊的质量控制能提供技术支持。附图说明图1采用本专利技术方法检测2,5-二三氟甲基苯胺的色谱图图2不同波长下检测2,5-二三氟甲基苯胺的色谱图图3不同浓度稀释剂条件下检测2,5-二三氟甲基苯胺的色谱图图4不同流动相检测2,5-二三氟甲基苯胺的色谱图具体实施方式以下将对本专利技术的优选实施例进行详细描述。优选实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，所举实施例是为了更好地对本专利技术的内容进行说明，但并不是本专利技术的内容仅限于所举实施例。熟悉本领域的技术人员根据上述
技术实现思路
对实施方案进行非本质的改进和调整，仍属于本专利技术的保护范围。实施例1仪器设备及色谱条件：日本岛津SHIMADZULC-2010AHT液相色谱仪；检测器：UV；色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(Kromasil100-5C18，250mm×4.6mm，5μm)；以乙腈-水-三氟乙酸(520:480:0.25)为流动相A，甲醇为流动相B，流速为1.0ml/min，柱温为35℃，检测波长为310nm；进样量为50μl。梯度洗脱条件：检测步骤：1.供试品溶液制备：取度他雄胺软胶囊10粒，用剪刀刺穿胶囊顶部，将内容物挤入25ml量瓶中，用70％乙腈水溶液分次将剪刀及胶囊壳上的内容物洗净，洗液合并于上述量瓶中，加70％乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，即得；。2.对照品溶液、灵敏度溶液制备：取2,5-二三氟甲基苯胺对照品适量，精密称定，加70％乙腈水溶液溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.6μg和0.2μg的溶液，分别作为对照品溶液和灵敏度测试溶液。3.进样，检测。4.取灵敏度测试溶液50μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，主峰的信噪比应不小于10。再精密量取供试品溶液和对照品溶液各50μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，2,5-二三氟甲基苯胺与相邻峰的分离度应满足要求，理论塔板数按2,5-二三氟甲基苯胺计应不低于3000。检测结果色谱图如图1所示。各物质出峰时间如下表：从上表可知，杂质C峰在310nm波长下与2,本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种HPLC法分离测定度他雄胺原料药及制剂中降解杂质的方法，其特征在于，所述方法采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，用乙腈‑水‑三氟乙酸的混合液作为流动相A和用甲醇作为流动相B进行梯度洗脱；所述降解杂质为2,5‑二三氟甲基苯胺，结构式如下：

【技术特征摘要】
1.一种HPLC法分离测定度他雄胺原料药及制剂中降解杂质的方法，其特征在于，所述方法采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，用乙腈-水-三氟乙酸的混合液作为流动相A和用甲醇作为流动相B进行梯度洗脱；所述降解杂质为2,5-二三氟甲基苯胺，结构式如下：2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，流动相A中乙腈、水、三氟乙酸的体积比为500-520:450-480:0.2-0.3。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，检测器波长为300-320nm。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，梯度洗脱条件为：0min，流动相A与流动相B的体积比为70：30；13min，流动相A与流动相B的体积比为70：30；15min，流动相A与流动相B的体积比为10：90；30min，流动相A与流动相B的体积比为10：90；31min，流动相A与流动相B的体积比为70：30；40min，流动相A与流动相B的体积比为70：30。5.根据权利要求1-4任意一项所述的方法，其特征在于，具体检测步骤如下：1)取度他雄胺样品，加稀释剂溶解稀释制得样品溶液；2)取2,5-二三氟甲基苯胺对照品，加稀释剂溶解稀释制成对照品溶液和灵敏度测试溶液；3)取灵敏度测试溶液50μl，注入色谱仪，记录色谱图，主峰的信噪比应不小于10；再取供试品溶液和对照品溶液各50μl，分别注入色谱仪，记录色谱图，2,5-二三氟甲基苯胺与相邻峰的分离度应大于1.5，理论塔板数按2,5-二三氟甲基苯胺计应不低于3000。4)2,5-二三氟甲基苯胺的出峰时间应不小于10min且不大于13min。6.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：张颖，颜波，
申请(专利权)人：重庆华邦制药有限公司，
类型：发明
国别省市：重庆,50