本发明专利技术涉及用于通过除了表达白细胞介素10(IL‑10)肽之外，还表达IL‑10受体1型(IL‑10R1)肽以克服白细胞介素10(IL‑10)的剂量依赖性下调的方法和组合物。该方法可用于治疗多种疾病和症状，包括但不限于神经性疼痛或慢性疼痛；与多发性硬化、脊髓损伤、ALS、神经炎症、关节炎和其他关节疾病相关的症状和生理伤害；和自身免疫性疾病。
Methods and compositions for enhancing the anti-inflammatory effect of interleukin 10
The present invention relates to a method and composition for overcoming dose-dependent down-regulation of interleukin 10 (IL 10) by expressing IL 10 receptor type 1 (IL 10R1) peptide in addition to interleukin 10 (IL 10) peptide. This method can be used to treat a variety of diseases and symptoms, including but not limited to neuropathic pain or chronic pain; symptoms and physiological injuries associated with multiple sclerosis, spinal cord injury, ALS, neuroinflammation, arthritis and other joint diseases; and autoimmune diseases.
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】增强白细胞介素10的抗炎作用的方法和组合物相关申请的交叉引用本国际PCT申请要求2016年4月22日提交的美国临时专利申请第62/326,082号的优先权。专利
本专利技术涉及通过除了表达白细胞介素10(IL-10)肽之外，还表达IL-10受体1型(IL-10R1)肽来减弱炎症信号传导的失活的方法和组合物。方法用于治疗多种状况，包括但不限于神经性疼痛；与多发性硬化、脊髓损伤、ALS、神经炎症、关节炎和其他关节疾病相关的症状，以及自身免疫性疾病。专利技术背景在下面的讨论中，将出于背景和介绍目的描述某些文章和方法。本文中包含的任何内容都不应被解释为对现有技术的“承认”。申请人明确保留在适当情况下根据适用法律规定来证明本文所引用的文章和方法不构成现有技术的权利。炎症与增强疼痛的促炎细胞因子和自由基(诸如H2O2和NO)的释放有关。为了限制炎症和伤害，还释放抗炎细胞因子诸如白细胞介素-10；例如，在发炎的组织中，IL-10升高至足以限制(cap)过度炎症的浓度。先前研究表明，当在神经性疼痛(参见Watkins,USSN14/066,581)和多发性硬化(MS)(参见Watkins,等人,USSN14/370,724)的啮齿动物模型中通过鞘内注射以及在具有天然存在(狗)或手术诱导(马)的骨关节炎(OA)的大型动物中通过关节内注射(参见Chavez,等人,USSN14/905,915)时，人类白细胞介素-10(hIL-10)的质粒定向表达是抗触诱发痛的(anti-allodynic)。在过去几年中进行的IND许可(IND-enabling)研究已经提供令人信服的证据，即，治疗慢性疼痛的该方法可能对人类安全有效。然而，在这些研究的过程中，已经变得清楚的是，IL-10当以低于1ng/ml的浓度存在时表现出最大信号传导效率，并且IL-10浓度的增加反而导致IL-10的下调。本领域对能够克服IL-10信号传导的下调以实现非剂量依赖性的更强大的IL-10介导的炎症抑制的方法和组合物存在需求。本专利技术解决此需求。专利技术概述本专利技术涉及用于通过在抗原呈递细胞中除了表达白细胞介素10(IL-10)肽之外，还表达IL-10受体1型(IL-10R1)肽(本文中为“IL-10/IL-10R1表达载体”)来克服IL-10的剂量依赖性下调的方法和组合物。方法用于治疗慢性疼痛或神经性疼痛；与多发性硬化、脊髓损伤、神经炎症、ALS和关节炎和其他关节疾病相关的症状和生理伤害；以及自身免疫性疾病。因此，在一个实施方案中，本专利技术提供用于治疗受试者炎症的方法，包括在受试者中的抗原呈递细胞中从一种或更多种细菌、病毒、噬菌体、粘粒或人工染色体载体表达白细胞介素-10(IL-10)肽和白细胞介素10受体1型(IL-10R1)肽。在该实施方案的一些方面中，在抗原呈递细胞中表达的IL-10肽包含在IL-10肽的铰链区中的突变，并且在一些方面中，IL-10肽包含突变，其中IL-10野生型序列的位置129处的苯丙氨酸已被丝氨酸、苏氨酸、丙氨酸或半胱氨酸取代。在一些优选的方面中，野生型序列的位置129处的苯丙氨酸已被丝氨酸取代。在一些实施方案中，IL-10肽和IL-10R1肽从单一载体表达，并且在一些方面中，载体是病毒载体，病毒载体是腺相关病毒载体，或病毒载体是慢病毒载体。在一些方面中，IL-10和IL-10R1编码序列被转录为单一mRNA，并且载体包含在IL-10和IL-10R1编码序列之间的内部核糖体进入位点的编码序列或在IL-10和IL-10R1编码序列之间的自裂解2a肽的编码序列。在一些实施方案中，炎症由神经性疼痛或慢性疼痛引起，并且一种或更多种载体通过鞘内注射被递送。在又其他实施方案中，炎症由MS引起，并且一种或更多种载体通过鞘内注射被递送。在又其他实施方案中，炎症由自身免疫性疾病引起，并且一种或更多种载体通过鞘内注射被递送。在其他实施方案中，炎症位于关节中，并且一种或更多种载体通过关节内注射被递送。在又其他实施方案中，炎症是神经炎症。在一些实施方案中，抗原呈递细胞选以下项的组：成单核细胞、单核细胞、星形胶质细胞、少突胶质细胞、小胶质细胞、巨噬细胞、B细胞、树突细胞、泡沫细胞、成淋巴细胞和B淋巴细胞。在该实施方案的一些方面中，将抗原呈递细胞从待治疗的受试者中取出，在体外用一种或更多种载体转导，并且施用回至受试者；然而，在一些方面中，将抗原呈递细胞用一种或更多种载体稳定转化并且维持在培养物中。本专利技术的又其他实施方案提供单一病毒或细菌表达载体，其包含白细胞介素10(IL-10)和白细胞介素10受体1型(IL-10R1)的编码区。在该实施方案的一些方面中，载体是包含驱动IL-10肽和IL-10R1肽的转录的单一启动子的病毒载体，并且还包含位于IL-10肽的编码区和IL-10R1肽的编码区之间的自裂解2a肽。将在详述中描述本专利技术的这些和其他方面以及用途。附图简述图1是在神经性疼痛的慢性压迫性损伤模型中从用AAV-9-hIL-10注射大鼠获得的结果的绝对阈值(g)与注射后天数的图。图2是在神经性疼痛的慢性压迫性损伤模型中从用AAV9-hIL-10和AAV9-hIL10R1的1:1混合物注射大鼠获得的结果的绝对阈值(g)与注射后天数的图。图3是在复发-缓解型EAE大鼠中从用包封在PLGA微粒中的IL-10(圆圈)对大鼠进行鞘内注射获得的结果的运动评分与运动症状发作后的时间(天)的图。运动评分：0＝正常；1＝尾尖麻痹；2＝全尾麻痹；3＝后肢无力；4＝后肢麻痹；5＝完全的后肢麻痹；6-部分前肢麻痹。N＝6/组。图4示出IL-10质粒显微注射到正常小鼠的脑和唐氏综合征的炎性小鼠模型(Dp16)的脑中的结果。专利技术详述定义除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本专利技术所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。本文提及的所有出版物、公开的专利申请和专利通过引用全文并入，用于描述和公开可与当前描述的专利技术结合使用的装置、动物模型、制剂和方法。如本文所用的，“抗原呈递细胞”是指在其表面展示与主要组织相容性II类复合物(MHC)复合的抗原(抗原呈递)并且表达IL-10受体2型(IL-10R2)的各种细胞中的任一种。本专利技术的抗原呈递细胞包括但不限于星形胶质细胞、少突胶质细胞、小胶质细胞、巨噬细胞、B细胞、树突细胞及其前体细胞。如本文所用的术语“抗炎”是指减少由神经、神经元、神经胶质细胞、内皮细胞、成纤维细胞、肌肉、免疫细胞或其他细胞类型产生的一种或更多种促炎细胞因子的作用或产生。如本文所用的术语“抗炎细胞因子”是指减少由神经、神经元、神经胶质细胞、内皮细胞、成纤维细胞、肌肉、免疫细胞或其他细胞类型产生的一种或更多种促炎细胞因子或蛋白的作用或产生的蛋白。炎性细胞因子和蛋白包括但不限于白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)等。本专利技术中感兴趣的抗炎细胞因子是白细胞介素-10(IL-10)、IL-10的全长分子和片段，以及修饰的IL-10肽，包括具有对天然序列的缺失、添加和取代(本质上保守的或非保守的)的那些修饰的IL-10肽，只要抗炎细胞因子为治疗上有效的即可。修饰可以是有意的，如通过定点本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于治疗受试者炎症的方法，包括在所述受试者中的抗原呈递细胞中从一种或更多种细菌、病毒、噬菌体、粘粒或人工染色体载体表达白细胞介素10(IL‑10)肽和白细胞介素10受体1型(IL‑10R1)肽。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.04.22 US 62/326,0821.一种用于治疗受试者炎症的方法，包括在所述受试者中的抗原呈递细胞中从一种或更多种细菌、病毒、噬菌体、粘粒或人工染色体载体表达白细胞介素10(IL-10)肽和白细胞介素10受体1型(IL-10R1)肽。2.根据权利要求1所述的方法，其中在所述抗原呈递细胞中表达的所述IL-10肽包含在所述IL-10肽的铰链区中的突变。3.根据权利要求2所述的方法，其中所述IL-10肽包含突变，其中IL-10野生型序列的位置129处的苯丙氨酸已被丝氨酸、苏氨酸、丙氨酸或半胱氨酸取代。4.根据权利要求3所述的方法，其中野生型序列的位置129处的苯丙氨酸已被丝氨酸取代。5.根据权利要求1所述的方法，其中所述IL-10和所述IL-10R1从单一载体表达。6.根据权利要求5所述的方法，其中所述载体是病毒载体。7.根据权利要求6所述的方法，其中所述病毒载体是腺相关病毒载体。8.根据权利要求6所述的方法，其中所述病毒载体是慢病毒载体。9.根据权利要求5所述的方法，其中IL-10和IL-10R1编码序列被转录为单一mRNA。10.根据权利要求9所述的方法，其中所述载体还包含在所述IL-10和IL-10R1编码序列之间的内部核糖体进入位点的编码序列。11.根据权利要求9所述的方法，其中所述载体还包含在所述IL-10和IL-10R1编码序列之间的自裂解2a肽的编码序列。12...
【专利技术属性】
技术研发人员：约翰·福萨叶什，雷蒙德·查韦斯，琳达·沃特金斯，彼得·格雷斯，
申请(专利权)人：萨鲁德医疗公司，科罗拉多州立大学董事会法人团体，
类型：发明
国别省市：美国,US
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