An immobilized enzyme catalyzed synthesis of 4H In this method, mesoporous silica SBA_15, SBA_16 and MCF were used as carriers to assemble Aspergillus niger lipase (ANL) in buffer solution of pH 5_8 to catalyze the synthesis of 4H_pyran intermediate from non-specific substrate p-fluorophenylene methylene malonitrile. The catalyst of the invention is cheap and efficient, and the assembled catalyst catalyzes the synthesis of 4H
【技术实现步骤摘要】
一种固定化酶催化苯亚甲基丙二腈衍生物合成4H-吡喃药物中间体的方法
本专利技术属于生物催化药物合成领域,提供了一种采用介孔二氧化硅固定化酶催化剂高效催化非专一性底物对氟苯亚甲基丙二腈合成4H-吡喃药物中间体的方法。
技术介绍
酶作为一种高效的生物催化剂,具有高效性、强专一性等特点,许多难以进行的有机反应在酶的催化下都能顺利完成。然而,对于非专一性底物,酶催化往往无法实现其高效转化。因此,如何调控酶结构强化其对非专一底物的催化转化是近些年来生物化学以及催化化学等领域的研究热点。目前调控酶结构的方法有定点突变和固定化,定点突变对酶的一级结构即氨基酸序列进行调控,固定化则调控酶的二级、三级或四级结构。固定化调控酶的结构主要有调控酶的微环境、界面活化、以及酶活性中心相对位置三个方面。首先调控酶的微环境方面,Guisan等采用不同的方法,利用界面吸附分别将皱褶假丝酵母脂肪酶固载在疏水性辛基改性的琼脂糖载体上、离子吸附在PEI涂覆的琼脂糖载体上、共价固定在戊二醛活化的琼脂糖载体上,为酶构筑不同的表面微环境,应用于催化转化不对称反应扁桃酸甲酯的水解中,发现不同方法固定化酶的催化性能(活性、特异性和对映选择性)显著不同。其中在辛基改性的琼脂糖载体上得到S异构体,而戊二醛衍生载体组装酶得到了R异构体,对映选择性E为400。而聚乙烯亚胺(PEI)衍生的载体得到S异构体,对映选择性和活性都很低。文章推断不同载体与酶的作用位点不同,导致酶活性中心的构象以及底物结合的取向不同,因此可得到不同构型的产物。因此,使用不同衍生物改性的载体,有可能获得不同构型的对映体。在界面活化方面,Li ...
【技术保护点】
1.一种固定化酶生物催化剂,其特征在于,由催化剂活性中心及介孔二氧化硅载体通过界面组装而成,催化剂活性中心组装到介孔二氧化硅的表面孔中,催化剂活性中心为脂肪酶,优选催化剂酶活性中心固载在载体表面的密度为0‑20mg/m2载体表面,不为0;催化剂活性中心为黑曲霉脂肪酶(ANL)。
【技术特征摘要】
1.一种固定化酶生物催化剂,其特征在于,由催化剂活性中心及介孔二氧化硅载体通过界面组装而成,催化剂活性中心组装到介孔二氧化硅的表面孔中,催化剂活性中心为脂肪酶,优选催化剂酶活性中心固载在载体表面的密度为0-20mg/m2载体表面,不为0;催化剂活性中心为黑曲霉脂肪酶(ANL)。2.权利要求1所述的一种固定化酶生物催化剂,其特征在于,选以不同孔径的介孔二氧化硅SBA-15、SBA-16、MCF为载体使得二氧化硅和催化剂活性中心协同匹配实现催化非专一性底物苯亚甲基丙二腈衍生物二腈转化为4H-吡喃类药物中间体的催化性能;SBA-15、SBA-16、MCF的介孔范围为8-11nm。3.制备权利要求1所述的一种固定化酶生物催化剂得方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)制备复合介孔大小要求的介孔二氧化硅载体;(2)将介孔二氧化硅载体加入到初始浓度为1-40mg/mL、pH为5-8的酶溶液,在摇床上摇晃进行组装,离心除去上清液,放入冷冻干燥箱干燥5h后取出,得到固定化酶生物催化剂。4.按照权利要求3所述的方法,其特征在于,选以不同孔径的介孔二氧化硅SBA-15、SBA-16、MCF为载体;其中一定孔径结构的SBA-15的制备包括以下步骤:每64mL去离子水和8.2mL12mol·mL-1浓盐酸混合,缓慢搅拌的条件下加入2g切块的嵌段共聚物P123并持续搅拌,待P123完全溶解后升高温度到45℃,在剧烈搅拌条件下缓慢滴加4.4310g(0.0213mol)正硅酸乙酯,保持滴加速度20滴/min,滴加结束后继续搅拌反应24h;将溶液转移到反应釜内,置于140℃条件下晶化48h;晶化结束后自然冷却至室温,抽滤分离,首先用去离子水洗涤三次,再用无水乙醇洗涤三次,室温干燥后得到白色固体粉末。最后将得到的固体在程序升温马弗炉550℃条件下高温煅烧6h去除模板剂,升温速率5℃/min,得到介孔材料SBA-15;一定孔径结构的SBA-16的制备包括以下步骤:室温下每1g三嵌段共聚物F127加入到100mL聚四氟乙烯内衬的高压反应釜中,依次添加38mL去离子水和1.38mL37%的浓盐酸(12mol...
【专利技术属性】
技术研发人员:安哲,何静,王文龙,王秀秀,
申请(专利权)人:北京化工大学,
类型:发明
国别省市:北京,11
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