银杏内酯B纳米脂质体及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种银杏内酯B纳米脂质体，包含银杏内酯B、卵磷脂、胆固醇、维生素E、培化磷脂酰乙醇胺、磷脂聚乙二醇马来酰亚胺和多肽(Cys)‑An2。还公开了所述脂质体的制备方法。相比较于现有技术，本发明专利技术通过具有与脑毛细血管壁上低密度脂蛋白受体特异结合功能的(Cys)‑An2与磷脂聚乙二醇马来酰亚胺进行化学偶联制成脑靶向材料，并利用该偶联物制备的脂质体包裹银杏内酯B，构建兼具长循环与脑主动靶向功能的药物新剂型，显著提高了银杏内酯B在水中的分散性，从而大大提高其生物利用度和成药性。

Ginkgolide B nanoliposomes and their preparation methods

The invention discloses a ginkgolide B nano-liposome, which comprises ginkgolide B, lecithin, cholesterol, vitamin E, cultured phosphatidylethanolamine, phospholipid polyethylene glycol maleimide and polypeptide (Cys) An2. The preparation method of the liposome is also disclosed. Compared with the existing technology, the present invention makes brain targeting material by chemical coupling of (Cys)An2 with phospholipid polyethylene glycol maleimide with low density lipoprotein receptor specific binding function on brain capillary wall, and encapsulates ginkgolide B with the liposome prepared by the conjugate, so as to construct a new drug formulation with both long circulation and active brain targeting function, which greatly improves the performance of the drug delivery system. The dispersion of ginkgolide B in water greatly improves its bioavailability and medicinal properties.

【技术实现步骤摘要】
银杏内酯B纳米脂质体及其制备方法
本专利技术涉及医药制剂，具体涉及一种具有脑主动靶向功能的银杏内酯B纳米脂质体及其制备方法。
技术介绍
心脑血管疾病是一种严重威胁人类，特别是50岁以上中老年人健康的常见病，即使应用目前最先进、完善的治疗手段，仍可有50％以上的脑血管意外幸存者生活不能完全自理。全世界每年死于心脑血管疾病的人数高达1500万人，居各种死因首位。缺血性脑血管疾病是最为常见，危害最大的心脑血管疾病，主要体现为脑卒中、缺血-再灌注损伤、神经损伤。银杏叶提取物(GBE)是临床治疗脑血管疾病的一线药物，疗效得到国内外医学界充分肯定。银杏内酯B(GB)是GBE中重要的活性成分之一，是一种具有高度专属性的血小板活化因子受体拮抗剂，它可减轻脑缺血/再灌注介导的脑组织脂质过氧化反应，提高自由基清除系统酶的活性，对脑损伤有明显保护作用。银杏内酯的剂型研究目前大都停留在传统的注射液方面，目前市面上有成都百裕制药生产的银杏内酯注射液，有效成份为多种银杏内酯，辅料为甘油、乙醇。银杏内酯B作为银杏二萜内酯中最强的血小板活化因子抑制剂，目前还没有原料药仅为GB的制剂上市销售。并且银杏内酯B在血液中的半衰期短，传统的银杏内酯注射液在给药后药物循环时间短，难以在脑部蓄积，更难以透过血脑屏障，药物不易到达病灶。因此传统的注射液存在着给药量大，生物利用度低，辅料副作用大，缺乏靶向性等问题。近几年越来越多的患者受到脑血管疾病困扰，并且有向年轻化发展的趋势，所以开发一种具有高生物利用度，靶向性的银杏内酯B制剂迫在眉睫。脂质体是以磷脂为主要材料构成的双分子层囊泡，最早由英国科学家发现，其结构类似生物膜。上世纪70年代脂质体开始成为药物载体，由于其生物相容性、生物可降解性、无毒和无免疫原性优点，脂质体作为药物新剂型迅速发展，目前已有十余种脂质体制剂上市。制备脂质体的主要材料为各种天然磷脂和合成磷脂(包括蛋黄卵磷脂，大豆卵磷脂，氢化大豆卵磷脂，二硬脂酰基磷脂酰胆碱，二棕榈酰基卵磷脂，二肉豆蔻酰基卵磷脂等)，适量能调整磷脂双分子层流动性和通透性的胆固醇，以及一定量的抗氧化剂(如α-生育酚)。脂质体被用作药物载体后，其缺点便很快被发现，传统组分的脂质体很快离开血流，蓄积于肝脏的Kupffer细胞和脾脏的巨噬细胞中。经过多年的发展，研究人员制备了长循环脂质体，其最常用的方法是在脂质体表面包覆线型聚乙二醇，即PEG。因此将适量PEG化磷脂(常用DSPEG-PEG2000)加入到脂质体配方中可以制备得到长循环脂质体，其PEG长链能帮助脂质体躲避巨噬细胞的识别与吞噬，有效延长了脂质体药物在体内的循环时间。因为血脑屏障的存在，长循环脂质体药物也难以到达脑实质与脑神经内的病灶，目前最主要的脑靶向递药策略是通过受体介导入脑，经研究表明，血脑屏障上有许多受体，包括转铁蛋白受体、胰岛素受体、低密度脂蛋白受体相关蛋白(LRP)受体等。本申请就此进行了深入研究。
技术实现思路
专利技术目的：针对银杏内酯B现有剂型存在的水溶性差、半衰期短和毒副作用大等技术问题，本申请提供了一种具有脑主动靶向功能的银杏内酯B纳米脂质体制剂。技术方案：本申请所述的一种银杏内酯B纳米脂质体，包含银杏内酯B、卵磷脂、胆固醇、维生素E、培化磷脂酰乙醇胺、磷脂聚乙二醇马来酰亚胺和多肽(Cys)-An2。其中，银杏内酯B的结构如下：银杏内酯B英文名GinkgolideB，分子量：424.40，分子式：C20H24O10。多肽(Cys)-An2的氨基酸序列为TFFYGGSRGKRNNFKTEEYC，其末端半胱氨酸(Cys)的巯基通过与马来酰亚胺基团耦合的方式连接到脂质体表面。进一步的，所述银杏内酯B、卵磷脂、胆固醇、维生素E、培化磷脂酰乙醇胺、磷脂聚乙二醇马来酰亚胺和(Cys)-An2摩尔比2-8：30-60：10-40：1-4：2-8：1-4：1-4。进一步优选的，所述银杏内酯B、卵磷脂、胆固醇、维生素E、培化磷脂酰乙醇胺、磷脂聚乙二醇马来酰亚胺和(Cys)-An2摩尔比为3-6：35-50：15-30：1-3：3-6：1-3：1-3。所述银杏内酯B、卵磷脂、胆固醇、维生素E、培化磷脂酰乙醇胺、磷脂聚乙二醇马来酰亚胺和(Cys)-An2摩尔比可以选择为2:20:10:1:2:1:1，在能够达到较高包封率的情况下，节约成本。所述卵磷脂可以是天然磷脂和(或)合成磷脂，包括但不仅限于蛋黄卵磷脂，大豆卵磷脂，氢化大豆卵磷脂，二硬脂酰基磷脂酰胆碱，二棕榈酰基卵磷脂，二肉豆蔻酰基卵磷脂等磷脂酰胆碱中的一种或任意几种混合物。所述多肽(Cys)-An2的氨基酸序列为TFFYGGSRGKRNNFKTEEYC，其末端半胱氨酸(Cys)的巯基通过与马来酰亚胺基团耦合的方式连接到脂质体表面。银杏内酯B脂质体制剂的制备方法，包括以下制备步骤：(1)称取配方量的银杏内酯B、卵磷脂、胆固醇、维生素E、培化磷脂酰乙醇胺和磷脂聚乙二醇马来酰亚胺溶解于有机溶剂中，超声形成均匀脂质溶液；(2)在氮气条件保护下，将步骤(1)所得脂质溶液减压蒸馏至无有机溶剂残留，制成均匀的脂质膜；(3)将步骤(2)制成的脂质膜水化，并在氮气保护下涡旋搅拌均匀；(4)将步骤(3)处理后的脂质体溶液质体挤出器进行挤出操作；(5)在氮气保护下，将步骤(4)处理后的脂质体溶液的PH调至7.0-7.5，再将配方量的多肽(Cys)-An2加入到脂质体溶液中，避光搅拌反应；(6)反应结束后，超滤除去未反应的多肽(Cys)-An2，用PH＝7.0-7.5磷酸缓冲盐溶液重新分散脂质体，即得具有脑主动靶向功能的银杏内酯B纳米脂质体制剂。步骤(1)中，所述有机溶剂选自无水乙醇、氯仿甲醇混合液、甲醇和二氯甲烷中的一种或多种混合。步骤(1)中，所述超声条件为水浴超声10-30分钟。步骤(2)中，减压蒸馏条件为：控制真空度大于0.09MPa，水浴温度为30-40℃。步骤(3)中，用PH＝6.0-7.0磷酸缓冲盐溶液水化，优选PH＝6.5。所述磷酸缓冲盐溶液的温度为30-55℃，需高于卵磷脂的相变温度。步骤(3)中，涡旋搅拌条件为：控制转速为每秒2-4转。步骤(4)中，脂质体挤出器依次使用0.8μm、0.4μm、0.2μm、0.1μm孔径的聚碳酸酯膜。步骤(5)中，常温下反应6-10小时。本专利技术通过具有与脑毛细血管壁上低密度脂蛋白受体特异结合功能的(Cys)-An2与磷脂聚乙二醇马来酰亚胺(DSPE-PEG2000-MAL)进行化学偶联制成脑靶向材料，并利用该偶联物制备的脂质体包裹银杏内酯B，构建兼具长循环与脑主动靶向功能的药物新剂型。有益效果：本专利技术制备的银杏内酯B脂质体粒径小，以水为分散介质，稀释10倍后，用激光粒度测定仪测得平均粒径为127.5nm，多分散指数(PDI)为0.186。本专利技术提供的银杏内酯B脂质体制剂粒径达到纳米级别，并且在脂质体中加入长循环材料DSPE-PEG200，其在表面形成亲水层和空间位阻，可以有效避免网状内皮系统的吞噬，降低脂质体的血液清除率，从而延长脂质体在循环系统的滞留时间，增加脂质体的脑靶向效果。本专利技术提供的银杏内酯B脂质体经过(Cys)-An2的表面修饰，使得银杏内酯B脂质体能通过受体介导的方式在脑部聚集并透过血脑屏障，达到保护脑组织与中本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种银杏内酯B纳米脂质体，其特征在于，包含银杏内酯B、卵磷脂、胆固醇、维生素E、培化磷脂酰乙醇胺、磷脂聚乙二醇马来酰亚胺和多肽(Cys)‑An2。

【技术特征摘要】
1.一种银杏内酯B纳米脂质体，其特征在于，包含银杏内酯B、卵磷脂、胆固醇、维生素E、培化磷脂酰乙醇胺、磷脂聚乙二醇马来酰亚胺和多肽(Cys)-An2。2.根据权利要求1所述的银杏内酯B脂质体，其特征在于，所述银杏内酯B、卵磷脂、胆固醇、维生素E、培化磷脂酰乙醇胺、磷脂聚乙二醇马来酰亚胺和(Cys)-An2摩尔比2-8：30-60：10-40：1-4：2-8：1-4：1-4。3.根据权利要求1所述的银杏内酯B纳米脂质体，其特征在于，所述卵磷脂选自蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、二硬脂酰基磷脂酰胆碱、二棕榈酰基卵磷脂和二肉豆蔻酰基卵磷脂中的一种或多种。4.根据权利要求1所述的银杏内酯B纳米脂质体，其特征在于，所述多肽(Cys)-An2的氨基酸序列为TFFYGGSRGKRNNFKTEEYC，其末端半胱氨酸(Cys)的巯基通过与马来酰亚胺基团耦合的方式连接到脂质体表面。5.权利要求1-4中任一所述银杏内酯B纳米脂质体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)称取配方量的银杏内酯B、卵磷脂、胆固醇、维生素E、培化磷脂酰乙醇胺和磷脂聚乙二醇马来酰亚胺溶解于有机溶剂中，超声形成均匀脂质溶液；(2)在氮气条件保护下，将步骤(1)所得脂质溶液减压蒸馏至无有机溶剂残留，制成均匀的脂质膜；(3)将...

【专利技术属性】
技术研发人员：于颖，李雄，胡宇玉，张亚兰，邢宇，郭传家，王云波，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32